屈新輝+++劉春發(fā)（等）

[摘要] 目的 從細(xì)胞及分子水平，探求中藥復(fù)方對(duì)免疫功能增強(qiáng)的作用及效能，在扶正固本、活血益氣的中藥中遴選出有廣闊應(yīng)用前景的促進(jìn)免疫的中藥復(fù)方。 方法 50只昆明小鼠隨機(jī)分成正常對(duì)照組、模型對(duì)照組與高劑量中藥組、中劑量中藥組、低劑量中藥組。用環(huán)磷酰胺抑制小鼠免疫功能制作免疫抑制模型，觀察用藥后正常對(duì)照組、模型對(duì)照組與高劑量中藥組、中劑量中藥組、低劑量中藥組血清IgG、補(bǔ)體C3，脾淋巴細(xì)胞表面抗原標(biāo)志物CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+、CD49b+，脾淋巴細(xì)胞細(xì)胞因子IL-2和IFN-γ及體重和脾指數(shù)。 結(jié)果 與模型對(duì)照組相比，高劑量中藥組、中劑量中藥組、低劑量中藥組體重和脾指數(shù)、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），低劑量中藥組血清IgG降低[（177.19±45.66）g/L]，CD49b+、補(bǔ)體C3及脾淋巴細(xì)胞細(xì)胞因子IL-2和IFN-γ升高[（32.43±6.31）%、（294.0±61.2）g/L、（38.44±7.82）%、（22.11±6.29）%]，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05），中劑量中藥組脾淋巴細(xì)胞細(xì)胞因子IL-2和IFN-γ升高[（35.40±4.59）%、（22.26±8.84）%]，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05）。正常對(duì)照組與模型對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。 結(jié)論 盡管還未能證實(shí)復(fù)方中藥對(duì)特異性細(xì)胞免疫和體液免疫有促進(jìn)作用，但在一定劑量范圍內(nèi)對(duì)非特異性細(xì)胞免疫和體液免疫有顯著促進(jìn)作用。

[關(guān)鍵詞] 免疫促進(jìn)；復(fù)方中藥；小鼠

[中圖分類號(hào)] R285.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2014）02（a）-0004-05

Studies of compound Chinese medicine on immunosuppression mice promoting immune function

QU Xinhui1，2 LIU Chunfa3 HU Jianxin4▲ HE Dan2 XIANG Zhengbing1，2 WU Xiaomu1，2

1.Department of Neurology， the Jiangxi Provincial People's Hospital， Jiangxi Province， Nanchang 330006， China； 2.Institute of Neurology of Jiangxi Province， Jiangxi Province， Nanchang 330006， China； 3.Medical College of Nanchang University， Jiangxi Province， Nanchang 330006， China； 4.Department of Pharmacy， the Jiangxi Provincial People's Hospital， Jiangxi Province， Nanchang 330006， China

[Abstract] Objective To select the new broad application prospect of the Chinese medicine compound for promoting immunity by studying the effect of traditional Chinese medicine compound from cell and molecular levels in Fuzheng Guben and Huoxue Yiqi of traditional Chinese medicine. Methods Fifty Kunming mice were randomly divided into five groups： the normal control group， the model control group ， the high dose Chinese medicine group， the middle dose Chinese medicine group and the low dose Chinese medicine group. The model of immunosuppression was established with cyclophosphamide inhibiting the immune function of the mice. Serum IgG， complement C3， splenic lymphocyte surface antigen markers of CD3+， CD4+， CD8+， CD4+/CD8+， CD19+， CD49b+， lymphocyte cell factor IL-2 and IFN-γ， weight of body and spleen index of the mice in the normal control group， the model control group， the high dose Chinese medicine group， the middle dose Chinese medicine group and the low dose Chinese medicine group were observed. Results Compared with the model control group， weight and spleen index， CD3+， CD4+， CD8+， CD4+/CD8+， CD19+ of the mice in the high dose Chinese medicine group， the middle dose Chinese medicine group， the low dose Chinese medicine group had no significant difference， decreasing serum IgG of （177.19±45.66） g/L and increasing CD49b+ of （32.43±6.31）%， complement C3 of （294.0±61.2） g/L， splenic lymphocyte cytokines IL-2 of （38.44±7.82）% and splenic lymphocyte cytokines IFN- γ of （22.11±6.29）% of the mice in the low dose of Chinese medicine group had no significant difference （all P < 0.05）， of spleen lymphocytes cytokines IL-2 of （35.40±4.59） % and IFN- γ of （22.26±8.84）% of the mice in the middle dose Chinese medicine group increased and there were significant difference （P < 0.05） between the normal control group and the model control group. Conclusion It is still not confimed that the compound Chinese medicine has a promoting effect on specific cellular immunity and humoral immunity， however， compound Chinese medicine dramatically promotes the non-specific cellular immunity and the non-specific humoral immunity in a certain dose range.

[Key words] Promotion of immunity； Compound Chinese medicine； Mice

免疫學(xué)是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)展極為迅速的學(xué)科之一，疾病發(fā)生發(fā)展很多都與免疫功能有關(guān)，某些腫瘤患者在放療、化療后或一些病毒感染后致免疫性力低下，但臨床增強(qiáng)免疫力有明顯臨床療效的藥物卻不多見。祖國(guó)醫(yī)學(xué)認(rèn)為“正虛邪擾”，疾病與人體的抵抗力密切相關(guān)，并且臨床處方運(yùn)用扶正祛邪的法則治療疾病，臨床觀察亦有療效，許多學(xué)者研究了多種單味藥對(duì)免疫功能的調(diào)節(jié)作用，嘗試發(fā)現(xiàn)、提取、合成能調(diào)節(jié)免疫的化合物，本實(shí)驗(yàn)旨在從細(xì)胞及分子水平出發(fā)，探求中藥復(fù)方對(duì)免疫功能增強(qiáng)的作用及效能，在扶正固本、活血益氣的中藥中遴選出有廣闊應(yīng)用前景的促進(jìn)免疫的中藥復(fù)方。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 中藥的制備

復(fù)方中藥（由西洋參、黃芪、枸杞、當(dāng)歸等多味藥）組成，按總量400 g（西洋參96 g、黃芪96 g、枸杞128 g、當(dāng)歸80 g）稱取處方各藥（由江西省人民醫(yī)院藥劑科供應(yīng)），加蒸餾水400 mL，浸泡24 h，隔水煮1 h，濾過藥液，藥渣再加蒸餾水適量，煮1 h，濾出藥液，合并兩次藥液，隔水濃縮至400 mL，即每1 mL相當(dāng)于1 g生藥的原液，滅菌封存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

6周齡昆明小鼠50只，體重（20±2）g，雌雄各半，均購(gòu)自江西中醫(yī)學(xué)院。動(dòng)物自由飲食、飲水，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：JIDW NO.2012-0041。試驗(yàn)過程中對(duì)動(dòng)物的處置符合2006年科技部關(guān)于對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物的有關(guān)規(guī)定[1]。

1.1.3 試劑與儀器

免疫抑制劑環(huán)磷酰胺（江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號(hào)：12030625），為200 mg/支的粉針劑；小鼠IgG和補(bǔ)體C3的ELISA檢測(cè)試劑盒為西唐生物公司進(jìn)口分裝產(chǎn)品（批號(hào)分別為：1208061、1208201）；Anti-MouseCD3（PE-Cy5）、Anti-MouseCD4（FITC）、Anti-Mouse CD8（PE）、Anti-Mouse CD19（PE）、Anti-MouseCD49（FITC）、Anti-MouseIL-2（PE）、Anti-MouseIFN-γ（FITC）熒光抗體（購(gòu)于eBioscience Inc.San Diego，CA公司，批號(hào)分別為E06065-1630、E00077-1630、E01036-1633、E01047-1630、E00752-1630、E02060-1630、E00862-1631）；BECKMAN COULTER流式細(xì)胞儀；酶標(biāo)儀（550型）；倒置顯微鏡（Leica）；光學(xué)顯微鏡（OLYM-PUS）；紅細(xì)胞裂解液（實(shí)驗(yàn)室制自備）；PBS緩沖液（實(shí)驗(yàn)室制自備）；16號(hào)小鼠灌胃針；Allegra 64R低速冷凍離心機(jī)（BECKMAN COULTER，rmax=204 mm）；HC電子天平（0.1 g）、sarrorious電子天平（0.001 g），300目金屬篩網(wǎng)。

1.2 方法

1.2.1 藥物急性毒理試驗(yàn)

該復(fù)方中藥各組份臨床應(yīng)用廣泛，未見明顯毒副作用，因此用小鼠灌胃最大容量0.4 mL/10 g[2]來檢查藥物的LD50，取20只小鼠，每次灌胃復(fù)方中藥0.8 mL，2次/d，觀察15 d，無一死亡，可見LD50 > 0.4 mL/10 g。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組

應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表法進(jìn)行隨機(jī)將動(dòng)物分為5組：正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、低劑量中藥組、中劑量中藥組、高劑量中藥組。每組10只，雌雄各半。將需隨機(jī)分組的雌雄性小鼠分別稱重，按序編號(hào)記錄體重結(jié)果，給每只小鼠鼠分配一個(gè)隨機(jī)數(shù)，按隨機(jī)數(shù)字大小升序排序，按排序后的順序依次將小鼠分入各個(gè)劑量組 。各組體重均值再做F檢驗(yàn)（單因素方差分析），需滿足P > 0.05，如果條件不能滿足，則重復(fù)以上過程，直到滿足為止。隨機(jī)分組結(jié)束后，分別按各組的原始編號(hào)編上實(shí)驗(yàn)編號(hào)。

1.2.3 小鼠免疫抑制模型

建立小鼠免疫抑制模型一次性腹腔注射環(huán)磷酰胺200 mg/kg，造模完成[3]，正常對(duì)照組注射環(huán)磷酰胺溶劑生理鹽水4 mL/kg。

1.2.4 給藥方法

中藥治療組于環(huán)磷酰胺造模后第2天開始用中藥按小鼠體重灌胃，高劑量中藥組灌中藥0.04 mL/g，中劑量中藥組灌中藥0.02 mL/g +蒸餾水0.02 mL/g，低劑量中藥組灌中藥0.01 mL/g +蒸餾水0.03 mL/g，正常對(duì)照組、模型對(duì)照組均灌蒸餾水0.04 mL/g，喂服14 d。

1.2.5 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的檢測(cè)

1.2.5.1 體重和脾臟指數(shù) 各組小鼠稱量體重，于試驗(yàn)結(jié)束后斷頸處死，取脾臟，用電子天平稱濕重，計(jì)算脾指數(shù)，脾臟指數(shù)=100%脾臟質(zhì)量/體質(zhì)量（g/g）。

1.2.5.2 IgG和補(bǔ)體C3的檢測(cè) 于試驗(yàn)第14天摘取眼球取血，室溫放置2 h后3000 r/min離心10 min將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離，離心得血清后嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書方法檢測(cè)小鼠血清IgG和補(bǔ)體C3水平。

1.2.5.3 脾淋巴細(xì)胞CD3、CD4、CD8、CD19、CD49b NK細(xì)胞、細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ檢測(cè) 第14天取小鼠脾臟研磨成單細(xì)胞懸液經(jīng)篩網(wǎng)過濾于離心管中離心，棄上清再加入紅細(xì)胞裂解液離心，棄上清后加入PBS定容至1 mL，用倒置相差顯微鏡進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)細(xì)胞數(shù)為1×107～10×107個(gè)，加入標(biāo)記抗小鼠CD3、CD4、CD8、CD19、CD49b NK細(xì)胞、細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ熒光抗體抗體，4℃避光孵育30 min，PBS洗滌2次，流式細(xì)胞儀檢測(cè)淋巴細(xì)胞和細(xì)胞因子指標(biāo)的變化。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)分析軟件分析，所有計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)。將資料進(jìn)行正態(tài)性分析和Levene法方差齊性檢驗(yàn)，行兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，方差齊性采用LSD-t檢驗(yàn)，方差不齊采用Tamhane法檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 體重和脾指數(shù)結(jié)果比較

正常對(duì)照組和模型對(duì)照組與各治療組第1天的體重均值比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.216 > 0.05），表明隨機(jī)分組成功。第14天的體重模型對(duì)照組比正常對(duì)照組減輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.020 < 0.05），而模型對(duì)照組與各治療組體重比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.126、0.904、0.796，均P > 0.05），表明小鼠免疫抑制后引起體重減輕，而各復(fù)方中藥治療組對(duì)免疫抑制小鼠體重?zé)o影響。脾指數(shù)模型對(duì)照組比正常對(duì)照組降低（P=0.0001 < 0.05），而模型對(duì)照組與各治療組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.967、0.255、0.941 > 0.05），表明小鼠免疫抑制后引起脾指數(shù)降低，而各復(fù)方中藥治療組對(duì)免疫抑制小鼠脾指數(shù)無影響。見表1。

表1 各組體重和脾指數(shù)比較（x±s）

注：與模型對(duì)照組比較，*P < 0.05

2.2 各組抗體IgG、補(bǔ)體及CD19結(jié)果比較

模型對(duì)照組比正常對(duì)照組IgG顯著增高（P=0.002 < 0.01），C3顯著降低（正態(tài)分布方差不齊t檢驗(yàn)，P=0.011 < 0.05），而低劑量中藥組與模型對(duì)照組比較，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001 < 0.01），表明低劑量中藥組能顯著降低免疫抑制小鼠抗體IgG的濃度，升高免疫抑制小鼠補(bǔ)體C3濃度。見表2。

表2 抗體、補(bǔ)體及B淋巴細(xì)胞表面抗原CD19結(jié)果比較（x±s）

注：與模型對(duì)照組比較，*P < 0.05，#P < 0.01

2.3 各組脾淋巴細(xì)胞CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+結(jié)果比較

CD3+、CD4+、CD8+模型對(duì)照組均值均低于正常對(duì)照組（P < 0.05），CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+模型對(duì)照組水平與低劑量中藥組、中劑量中藥組、高劑量中藥組水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），顯示復(fù)方中藥對(duì)特異性T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞免疫無促進(jìn)作用。見表3。

表3 T淋巴細(xì)胞表面抗原結(jié)果比較（x±s）

注：與模型對(duì)照組比較，*P < 0.05

2.4 各組脾淋巴細(xì)胞CD49b+結(jié)果比較

CD49b+、IL-2、IFN-γ模型對(duì)照組水平均低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05或P < 0.01），低劑量中藥組、中劑量中藥組、高劑量中藥組均值均增高，但僅低劑量中藥組CD49b+與模型對(duì)照組比較，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.008 < 0.01），表明小劑量復(fù)方中藥對(duì)免疫抑制小鼠非特異性免疫NK細(xì)胞有免疫促進(jìn)作用。IL-2、IFN-γ低劑量中藥組、中劑量中藥組與模型對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（IL-2：P=0.004、P=0.039；IFN-γ：P=0.026、P=0.024，P < 0.05或P < 0.01），表明小劑量、中劑量復(fù)方中藥對(duì)免疫抑制小鼠非特異性免疫細(xì)胞因子IL-2及IFN-γ有免疫促進(jìn)作用。見表4。

表4 各組NK細(xì)胞及細(xì)胞因子比較（%，x±s）

注：與模型對(duì)照組比較，*P < 0.05，#P < 0.01

3 討論

機(jī)體的免疫功能主要與T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、NK自然殺傷細(xì)胞等免疫細(xì)胞及抗體、補(bǔ)體、免疫細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子有關(guān)。特異性免疫與T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞及B淋巴細(xì)胞活化產(chǎn)生的抗體有關(guān)，非特異性免疫與單核巨噬細(xì)胞、NK自然殺傷有關(guān)，而補(bǔ)體及細(xì)胞因子廣泛參與特異性免疫與非特異性免疫。根據(jù)中醫(yī)藥理論和現(xiàn)代藥理研究表明：西洋參補(bǔ)氣養(yǎng)陰，清熱生津，主要活性成分為皂苷類、多糖類和氨基酸類等，其中的活性多糖可以通過激活網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)、補(bǔ)體、激活巨噬細(xì)胞和T、B淋巴細(xì)胞，誘生多種免疫因子等途徑對(duì)機(jī)體免疫產(chǎn)生廣泛的影響，從而提高機(jī)體免疫力[4]；黃芪益氣固表，能調(diào)節(jié)免疫功能，可治療氣虛感冒；枸杞滋補(bǔ)肝腎，能提高機(jī)體免疫功能，延緩抗衰老，長(zhǎng)期服用可增強(qiáng)免疫功能；當(dāng)歸補(bǔ)血活血，具有抗炎和改善血管功能的作用[5]。本文以常用補(bǔ)益劑西洋參、黃芪、當(dāng)歸、枸杞組成的復(fù)方中藥湯劑為研究對(duì)象，全方具有補(bǔ)氣活血、滋補(bǔ)肝腎，滋陰益陽作用，觀察其對(duì)免疫器官、免疫細(xì)胞、抗體、補(bǔ)體、細(xì)胞因子等不同層面免疫功能的影響，探求其增強(qiáng)免疫的機(jī)制。

正常對(duì)照組和模型對(duì)照組與各治療組第1天的體重均值比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），表明隨機(jī)分組成功。環(huán)磷酰胺為常有免疫抑制劑，為細(xì)胞周期非特異性細(xì)胞毒藥物，其免疫抑制機(jī)制為對(duì)骨髓強(qiáng)大抑制作用，致T、B淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)量減少，并抑制淋巴細(xì)胞受特異性抗原刺激后母細(xì)胞的轉(zhuǎn)化[6]。本實(shí)驗(yàn)采用其制作免疫抑制動(dòng)物模型，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后觀察到體重、脾指數(shù)、CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、NK細(xì)胞、補(bǔ)體C3、細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ均降低，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），表明建立免疫抑制動(dòng)物模型成功。模型對(duì)照組與各治療組體重和脾指數(shù)無差異（P > 0.05），各復(fù)方中藥治療組對(duì)免疫抑制小鼠體重和脾指數(shù)無影響，表明其在免疫器官層面無顯著性作用。脾指數(shù)模型對(duì)照組比正常對(duì)照組降低（P=0.0001），可能與促進(jìn)免疫器官的生長(zhǎng)作用因環(huán)磷酰胺對(duì)機(jī)體抑制作用過強(qiáng)而顯現(xiàn)不出來有關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)觀察復(fù)方中藥各劑量組與模型組比較對(duì)CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+均無差異，因此未能證實(shí)其對(duì)特異性細(xì)胞免疫及體液免疫有促進(jìn)作用。以往有報(bào)道西洋參多糖對(duì)60℃ 射線照射致免疫抑制模型小鼠可增強(qiáng)Con A誘導(dǎo)的小鼠脾T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力，增強(qiáng)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)能力[7]；黃芪多糖對(duì)正常小鼠可增強(qiáng)Con A誘導(dǎo)的小鼠脾T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力[8]；當(dāng)歸多糖明顯促進(jìn)健康人外周血T淋巴細(xì)胞增殖[9]；枸杞多糖明顯增強(qiáng)植物凝集素PHA活化的人外周血淋淋巴細(xì)胞的增殖[10]。復(fù)方中藥中四種單味藥均可促進(jìn)T淋巴細(xì)胞免疫力，而組成的復(fù)方反而未得出促進(jìn)T淋巴細(xì)胞免疫的結(jié)論，這可能與免疫模型不同引起藥物對(duì)機(jī)體敏感性不同有關(guān)，還與觀察T淋巴細(xì)胞指標(biāo)不同及檢測(cè)方法不同有關(guān)。

補(bǔ)體是存在于血清和組織液中經(jīng)活化后具有酶活性的蛋白質(zhì)，補(bǔ)體成分可與多種免疫細(xì)胞相互作用，調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化，補(bǔ)體C3等可參與固定抗原，使抗原易被APC處理與遞呈，參與免疫應(yīng)答的誘導(dǎo)，并參與清除免疫復(fù)合物及免疫記憶，補(bǔ)體系統(tǒng)是具有重要生物學(xué)作用的效應(yīng)級(jí)聯(lián)放大系統(tǒng)。補(bǔ)體途徑分為經(jīng)典、替代和外源凝集素途徑[11]，補(bǔ)體C3是補(bǔ)體激活的三個(gè)級(jí)聯(lián)的一個(gè)關(guān)鍵組成部分[12]，因此本實(shí)驗(yàn)選擇補(bǔ)體C3指標(biāo)作為觀察補(bǔ)體系統(tǒng)功能。低劑量中藥組與模型對(duì)照組比較補(bǔ)體C3顯著升高（P=0.0001 < 0.01），表明低劑量中藥組能顯著升高免疫抑制小鼠補(bǔ)體C3濃度，顯著促進(jìn)免疫抑制小鼠補(bǔ)體系統(tǒng)的功能。

本實(shí)驗(yàn)免疫抑制模型對(duì)照組與正常對(duì)照組比較抗體IgG是升高的，差異有高度統(tǒng)計(jì)意義（P=0.002），而高劑量中藥組、中劑量中藥組、低劑量中藥組IgG均值依次降低，且低劑量中藥組與模型對(duì)照組比較，差異顯著（P值=0.001），表明低劑量中藥組能顯著降低免疫抑制小鼠抗體IgG的濃度。機(jī)體抗原免疫后血清中的抗體其中IgM檢出時(shí)間最早，IgG檢出時(shí)間較晚但存留時(shí)間最長(zhǎng)，IgA檢出時(shí)間最晚[13]。本實(shí)驗(yàn)B淋巴細(xì)胞抗原CD19+在免疫抑制后下降，因IgG產(chǎn)生時(shí)間較晚但存留時(shí)間最長(zhǎng)，在實(shí)驗(yàn)14 d的時(shí)間節(jié)點(diǎn)上，IgG主要是造模前存留的，因此理論上模型組與正常對(duì)照組應(yīng)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。通?？乖c抗體結(jié)合，在補(bǔ)體的參與下，抗原與抗體結(jié)合產(chǎn)生幾何級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)，清除抗原的同時(shí)消耗了抗體，補(bǔ)體升高會(huì)導(dǎo)致抗體降低，補(bǔ)體降低也會(huì)導(dǎo)致抗體升高。本實(shí)驗(yàn)免疫抑制后對(duì)補(bǔ)體也造成了強(qiáng)大的抑制，因而出現(xiàn)正常對(duì)照組IgG抗體低，模型組IgG抗體升高。本實(shí)驗(yàn)B淋巴細(xì)胞抗原CD19+各中藥治療組與模型組無差異，其一定程度上反映了機(jī)體體液免疫功能，體液免疫產(chǎn)生的抗體理論上亦無差異，因此認(rèn)為低劑量中藥組IgG降低是因?yàn)榈蛣┝繌?fù)方中藥可顯著升高補(bǔ)體所引起的。

NK自然殺傷細(xì)胞對(duì)病原體無嚴(yán)格選擇性，能識(shí)別多種病原體的共有成分，對(duì)多種病原體均有吞噬、殺傷作用。NK細(xì)胞是產(chǎn)生細(xì)胞因子IFN-γ主要的先天免疫細(xì)胞，NK細(xì)胞不需要事先暴露于抗原發(fā)揮其功能，通過自然的細(xì)胞毒性和的分泌細(xì)胞因子發(fā)揮防止微生物的侵襲和傳播的重要的免疫效應(yīng)，NK細(xì)胞是天然免疫和獲得性免疫功能之間的橋梁，先天第一線防御癌癥和病原體的入侵的關(guān)鍵[14]。CD49是小鼠NK 細(xì)胞主要標(biāo)志物，本實(shí)驗(yàn)選用其作為觀察NK細(xì)胞的功能指標(biāo)。復(fù)方中藥低劑量組與模型組比較可顯著升高CD49（P=0.008 < 0.01），顯示低劑量復(fù)方中藥能有效促進(jìn)NK自然殺傷細(xì)胞數(shù)量。在此需要說明的是復(fù)方中藥表現(xiàn)出的對(duì)機(jī)體免疫促進(jìn)作用并不是由于中和環(huán)磷酰胺的藥效而引起的，因?yàn)榄h(huán)磷酰胺的半衰期為4 h，24 h后已經(jīng)過了6個(gè)半衰期，機(jī)體環(huán)磷酰胺的血藥濃度僅有1/64，因此24 h后喂服中藥不存在中和環(huán)磷酰胺的藥效，表明小劑量復(fù)方中藥對(duì)免疫抑制小鼠非特異性免疫NK細(xì)胞有免疫促進(jìn)作用。

輔助性Th1細(xì)胞受抗原刺激分泌細(xì)胞因子IL-2和IFN-γ，IL-2刺激CTL細(xì)胞增殖與分化，IFN-γ可誘導(dǎo)單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、皮膚成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、星狀細(xì)胞等MHC Ⅱ類抗原的表達(dá)，使其參與抗原提呈和特異性免疫的識(shí)別過程；IFN-γ還能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞表面受體Fc的表達(dá)，促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬免疫復(fù)合物、抗體包被的病原體和腫瘤細(xì)胞[15]；IL-2和IFN-γ都可以增強(qiáng)NK細(xì)胞細(xì)胞毒活性。因此IL-2和IFN-γ是反映機(jī)體免疫功能的重要指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)中劑量中藥組及低劑量中藥組與模型組比較均能升高IL-2和IFN-γ（P < 0.05），表明一定劑量范圍的復(fù)方中藥對(duì)免疫細(xì)胞因子有促進(jìn)作用。

本實(shí)驗(yàn)復(fù)方中藥藥理毒理試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)明顯毒副作用，但高劑量中藥組對(duì)所有免疫指標(biāo)均無促進(jìn)作用，說明藥物劑量過大對(duì)機(jī)體還是有一定的不利影響，中藥中既使補(bǔ)益藥，也有一定的副作用。雖然都是補(bǔ)氣養(yǎng)陰活血的補(bǔ)益藥，正應(yīng)了中醫(yī)理論有“氣有余便是火”，補(bǔ)氣有余易產(chǎn)生火邪。

因此，復(fù)方中藥（由西洋參、黃芪、枸杞、當(dāng)歸等多味藥組成）在一定劑量范圍內(nèi)，雖然還未能證實(shí)對(duì)機(jī)體特異性細(xì)胞免疫和體液免疫有促進(jìn)作用，但對(duì)非特異性細(xì)胞免疫及體液免疫有顯著促進(jìn)作用。

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