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(1.內(nèi)蒙古民族大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，內(nèi)蒙古通遼028000；2.廣州市誠(chéng)一水產(chǎn)科技有限公司，廣東廣州510000)

飼用酶制劑是一種以酶為主要功能因子的生物飼料添加劑，具有提高營(yíng)養(yǎng)消化利用、提高免疫機(jī)能、高效環(huán)保等特性，不僅可以提高動(dòng)物對(duì)飼料的蛋白質(zhì)、糖類等的消化利用率，降低動(dòng)物排泄物中的養(yǎng)分含量，減少環(huán)境污染，而且還可以消除飼料中抗?fàn)I養(yǎng)因子和擴(kuò)大非常規(guī)性飼料原料在配合飼料中的應(yīng)用（Mahagna等，1995；Krause等，1998；紅敏，2014）。

目前，酶制劑越來越廣泛應(yīng)用于飼料中，而在水產(chǎn)飼料中應(yīng)用及研究也在逐漸增加（柴仙琦等，2014）。但是，水產(chǎn)配合飼料的加工需要高溫、高壓、高水分等條件，對(duì)飼用酶制劑的作用會(huì)產(chǎn)生一定的影響（楊海鋒等，2014；徐雪梅等，2014）。然而，關(guān)于飼用酶在水產(chǎn)飼料加工各工序過程中的變化報(bào)道的較少。根據(jù)環(huán)膜制粒工藝生產(chǎn)不同耐水特性的水產(chǎn)配合飼料，需要后熟化加工工藝，因此本文就環(huán)模制粒工藝生產(chǎn)水產(chǎn)配合飼料，后熟化過程對(duì)蛋白酶和淀粉酶活力的變化以及作用進(jìn)行了研究，為飼用酶在生產(chǎn)水產(chǎn)配合飼料加工中合理應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 飼用酶制劑及基礎(chǔ)飼料

飼用復(fù)合酶制劑（蛋白酶：20 000 U/g，淀粉酶：2 400 U/g）、飼用蛋白酶制劑（5 000 U/g）：購(gòu)于諾維信；枯草芽孢桿菌α-淀粉酶（3 000 U/ml）：購(gòu)于無錫杰能科生物工程有限公司；豆粕、棉籽粕、面粉等飼料原料：購(gòu)于無錫三里橋糧油市場(chǎng)；魚油：購(gòu)于無錫；魯花花生油：產(chǎn)自山東；基礎(chǔ)飼料、DNS溶液、福林試劑和磷酸鹽緩沖液（pH值6.0和pH值7.0）、環(huán)模壓粒機(jī)制硬顆粒飼料（下簡(jiǎn)稱硬顆粒飼料）；其他試劑均為分析純：采購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司?；A(chǔ)飼料組成見表1。

表1 基礎(chǔ)飼料組成

1.2 水產(chǎn)飼料生產(chǎn)工藝

飼料生產(chǎn)工藝：原料接收→初清(含磁選)→粉碎(或微粉碎)→配料→混合→調(diào)質(zhì)→制?！笫旎鋮s(或干燥)→后噴涂→稱重→包裝。含酶飼料生產(chǎn)中，飼用酶在后噴涂中添加，考察后熟化溫度85、90、95℃在0~40 min內(nèi)飼用酶活性的損失。

1.3 主要儀器與設(shè)備

數(shù)顯恒溫水浴鍋；GZX-9140 MBE型電熱鼓風(fēng)干燥箱、UV-2100型紫外可見分光光度計(jì)、DSHZ-300多用途恒溫水浴振蕩器、Buhler-180試驗(yàn)顆粒機(jī)(布勒機(jī)械制造有限公司)、自制后熟化密封箱。

1.4 測(cè)定方法

1.4.1 水分、淀粉含量、還原糖測(cè)定

飼料水分含量測(cè)定用烘干恒重法(GB/T 6435—2006)進(jìn)行測(cè)定；飼料淀粉含量測(cè)定按照GB/T 5009.9—2008中酶水解法進(jìn)行處理，飼料中淀粉充分水解成單糖后，用DNS法測(cè)定單糖含量；還原糖測(cè)定根據(jù)3，5-二硝基水楊酸法（DNS法）測(cè)定還原糖含量（齊香君等，2004）。

1.4.2 酶活力測(cè)定方法

含酶飼料中淀粉酶活力測(cè)定：稱取1.000 g含酶飼料，加入到10 ml pH值6.0的緩沖液中，攪拌使其充分溶解，按工業(yè)酶制劑通用試驗(yàn)方法QBT 1803—1993，測(cè)定淀粉酶活力,以1.000 g含酶飼料的干重計(jì)算得出飼料酶活力。

含酶飼料中蛋白酶活力測(cè)定：取樣1.000 g含酶飼料，加入到10 ml pH值7.0的緩沖液中，攪拌使其充分溶解。按工業(yè)酶制劑通用試驗(yàn)方法QBT 1803—1993測(cè)定蛋白酶活力，以1.000 g含酶飼料的干重計(jì)算得出飼料酶活力。

溶失淀粉酶活力測(cè)定：淀粉酶活力測(cè)定參照張龍翔等（1981）的方法。

2 結(jié)果與分析

2.1 水產(chǎn)飼料后熟化過程溫度曲線

試驗(yàn)預(yù)設(shè)定的后熟化溫度分別為85、90、95℃，而后熟化箱內(nèi)0~40 min實(shí)測(cè)溫度曲線如圖1所示，其實(shí)際平均溫度分別為85.00、89.97、94.98℃，試驗(yàn)預(yù)設(shè)定溫度與實(shí)際操作溫度基本一致。

圖1 后熟化過程溫度曲線

2.2 水產(chǎn)飼料后熟化溫度對(duì)飼料酶活力及作用影響

2.2.13 種后熟化溫度對(duì)飼用酶活力影響

飼料蛋白酶活力在85、90、95℃條件下后熟化過程中的變化情況，如圖2所示。在同一后熟化溫度條件下，飼料蛋白酶活力隨著時(shí)間延長(zhǎng)而下降；在同一后熟化時(shí)間點(diǎn)，飼料蛋白酶活力隨著溫度的升高而下降。蛋白酶在85、90、95℃條件下后熟化40 min，酶活力分別下降了37.7%、51.0%、86.5%。在85、90、95℃條件下后熟化，蛋白酶活力下降速度隨著時(shí)間延長(zhǎng)逐漸降低，溫度越高下降速率就越快；后熟化過程前10 min，蛋白酶活力下降最多，分別下降了16.2%、37.7%、54.8%。85、90℃條件下后熟化10 min后，蛋白酶活力減少速度趨于直線；95℃下后熟化，蛋白酶活力損失速度由大變小。

飼料淀粉酶活力在85、90、95℃條件下后熟化過程中的變化情況如圖3所示。在同一后熟化溫度條件下，飼料淀粉酶活力隨著時(shí)間延長(zhǎng)而下降；在同一后熟化時(shí)間點(diǎn)，飼料淀粉酶活力隨著溫度的升高而下降。淀粉酶在85、90、95℃條件下后熟化40 min，酶活力分別下降了17.6%、26.0%、33.0%。90、95℃條件下，淀粉酶活力下降速度先迅速后緩慢，后熟化過程前10 min，淀粉酶活力下降最多，分別下降了10.1%、14.2%，10~40 min之間，酶活力損失隨時(shí)間的變化而呈直線下降。以淀粉酶活力為y,后熟化時(shí)間為x，在本試驗(yàn)范圍內(nèi)85℃條件下，可得回歸方程y=-1.524x+348.1，相關(guān)系數(shù)R2=0.998 9，淀粉酶活力和后熟化時(shí)間呈直線負(fù)相關(guān)。

圖23 種后熟化溫度對(duì)飼用蛋白酶活力的影響

圖33 種后熟化溫度對(duì)飼用淀粉酶活力的影響

根據(jù)不同種類水產(chǎn)動(dòng)物攝食習(xí)性的需要，所投喂的配合飼料的耐水性也不同，所以環(huán)模制粒工藝生產(chǎn)硬顆粒飼料過程中后熟化條件也是不同的。因此，應(yīng)根據(jù)后熟化時(shí)間和溫度等條件考慮飼用酶活力的損失率，適當(dāng)增加飼料的酶添加量，以期達(dá)到飼用酶來提高水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)和改善飼料利用率的較好效果。

2.2.2 水產(chǎn)飼料后熟化溫度和飼料酶對(duì)飼料淀粉含量變化的影響

由圖4所示，淀粉含量隨著時(shí)間延長(zhǎng)和后熟化溫度的升高而降低，表明淀粉酶在后熟化過程中對(duì)淀粉有一定作用。在同一后熟化時(shí)間，溫度越高，飼料淀粉含量越高，表明飼料淀粉酶對(duì)淀粉的酶解作用越小。飼料在85、90、95℃條件下后熟化10 min時(shí)，淀粉含量相對(duì)下降了7.3%、4.1%、2.5%，后熟化40 min時(shí)淀粉含量分別相對(duì)下降了14.4%、9.6%、6.3%。

圖4 后熟化過程中淀粉含量的變化

在后熟化過程中，飼料淀粉酶對(duì)淀粉產(chǎn)生一定的酶解作用。熟化時(shí)間越長(zhǎng)和溫度越高，飼料淀粉糊化度越高，而飼料淀粉酶活力卻越小。飼料即達(dá)到較好的糊化度，又取得一定的酶活，優(yōu)化后熟化時(shí)間和溫度顯得十分重要。因此，添加淀粉酶在后熟化過程中發(fā)揮了一定的作用，在水產(chǎn)飼料中添加淀粉酶有利于水生動(dòng)物對(duì)飼料中糖類的利用。

2.3 后熟化過程飼料水分含量對(duì)飼料酶活力作用的影響

不同水分含量飼料，后熟化前后淀粉酶活力結(jié)果如表2所示。后熟化后飼料水分含量分別為15.1%、16.1%、17.0%、18.0%，飼料中淀粉酶活力損失率分別為24.9%、25.0%、25.9%、28.0%，后熟化后水分含量為15.1%、16.1%的飼料中淀粉酶活力損失率差異性不顯著(P>0.05)，后熟化后水分含量為15.1%、17.0%、18.0%的飼料淀粉酶活力損失率差異顯著(P<0.05)。隨著水分含量升高，酶活力損失率升高。因此，為減少飼料酶活損失，在后熟化過程中應(yīng)考慮減少飼料水分含量。

表2 飼料中水分含量對(duì)淀粉酶活力影響

3 結(jié)論

在水產(chǎn)配合飼料環(huán)模制粒生產(chǎn)工藝中，后熟化加工過程使酶的活力下降，在一定的后熟化時(shí)間和溫度的條件下，淀粉酶活力損失程度小于蛋白酶；在不同溫度的后熟化過程中，淀粉酶對(duì)淀粉產(chǎn)生一定的酶解作用，可降低飼料中淀粉的含量；在后熟化過程中，不同的飼料水分對(duì)淀粉酶的活力和損失也產(chǎn)生不同程度的影響。