王慶芬，鄭紹忠

復(fù)方乳酸依沙吖啶散中乳酸依沙吖啶含量測(cè)定方法研究

王慶芬，鄭紹忠

目的探討復(fù)方乳酸依沙吖啶散中乳酸依沙吖啶含量的測(cè)定方法。方法 排除影響乳酸依沙吖啶吸光度值的因素，篩選出供試液制備的最佳方法:減少取樣量，采用微孔濾膜于80℃以下條件下加壓過(guò)濾。采用紫外分光光度法在362 nm處測(cè)定吸光度(A)，計(jì)算乳酸依沙吖啶含量。結(jié)果 乳酸依沙吖啶在5～22．5 mg/L(r=0．9997)范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，高、中、低含量樣品(n=5)平均測(cè)定率分別為93．132%、93．074%和93．261%。結(jié)論 該方法簡(jiǎn)單、快速，測(cè)定結(jié)果符合要求，可作為復(fù)方乳酸依沙吖啶散中乳酸依沙吖啶含量的測(cè)定方法。

質(zhì)量控制;乳酸依沙吖啶;復(fù)方乳酸依沙吖啶散;分光光度法，紫外線(xiàn)

復(fù)方乳酸依沙吖啶散是《中國(guó)人民解放軍醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)范》(簡(jiǎn)稱(chēng)《軍規(guī)》)2002年版收載的標(biāo)準(zhǔn)制劑，是一種消炎收斂藥，主要用于新生兒臍帶的干燥。該制劑處方組成為乳酸依沙吖啶5 g、氧化鋅300 g、硼酸30 g、滑石粉665 g，制成1000 g 制劑［1］?！盾娨?guī)》中該制劑含量測(cè)定項(xiàng)下提供的乳酸依沙吖啶的測(cè)定方法，經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)，得率僅為標(biāo)示量的56%上下。查閱有關(guān)報(bào)道，認(rèn)為與處方中的共存成分滑石粉對(duì)乳酸依沙吖啶的吸附有關(guān)［2-3］;方法中并未對(duì)其過(guò)濾過(guò)程中所采取的濾材作具體規(guī)定，因此不同濾材對(duì)其含量測(cè)定也有影響［4］;供試液制備中取樣量過(guò)大也會(huì)影響含量測(cè)定。為此，本研究在減少了樣品取用量、改善供試液制備方法后進(jìn)行直接紫外含量測(cè)定，取得了較滿(mǎn)意的效果，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 儀器與試劑

紫外分光光度計(jì)(日本島津UV-2550)，電子分析天平(Sartorius BT224S)，LD5-2A型低速離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠(chǎng))，KH-100B型超聲波清洗器(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)，數(shù)顯恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市江南儀器廠(chǎng))。乳酸依沙吖啶對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):100290、199901);乳酸依沙吖啶原料(遼源市銀鷹制藥有限責(zé)任公司，批號(hào):0705001);滑石粉、氧化鋅、硼酸均為藥用規(guī)格;高、中、低含量供試品，混合物A、B、C(筆者所在醫(yī)院制劑科實(shí)驗(yàn)室配制)，復(fù)方乳酸依沙吖啶散劑(筆者所在醫(yī)院制劑科制劑室配制，批號(hào):080322、081229、090115)。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品制備

2.1.1 高、中、低含量與空白對(duì)照供試品制備:取105℃干燥3 h的乳酸依沙吖啶原料精制品，參照《軍規(guī)》制備主藥含量為標(biāo)示量120%、100%、80%和0的各供試品100 g，含乳酸依沙吖啶分別為6.0370、5.0330、3.69120 mg/g［5］。

2.1.2 混合物制備:按處方量，參照《軍規(guī)》制備混合物A(含乳酸依沙吖啶、硼酸、氧化鋅)、混合物B(含乳酸依沙吖啶、氧化鋅)及混合物C(含乳酸依沙吖啶、滑石粉)，其中含乳酸依沙吖啶分別為15.1253、17.0251、7.5486 mg/g。

2.2 供試液制備方法

2.2.1 制備法Ⅰ:取中含量供試品(相當(dāng)于含乳酸依沙吖啶1.2 mg)，精密稱(chēng)定，置100ml硅化離心管中，加80℃以上熱水20 ml，攪勻，超聲波水浴加熱提取10 min，傾取上清液至100 ml容量瓶中。照此制取100 ml，放至室溫，定容。針頭注射器(內(nèi)裝0.45μm濾膜，下同)加壓過(guò)濾(壓濾)，棄去前30 ml，備用。

2.2.2 制備法Ⅱ:將“超聲波水浴加熱提取10 min”改為“水浴加熱10 min”，離心(4000 r/min)10 min，余照“2.2.1”項(xiàng)下方法制備。

2.2.3 制備法Ⅲ:取中含量供試品適量(相當(dāng)于含乳酸依沙吖啶1.2 mg)，精密稱(chēng)定，分置50 ml燒杯中，加80℃以上熱水20 ml，攪拌下水浴加熱10 min，針頭注射器壓濾至100 ml容量瓶中，續(xù)以熱水，每次10 ml同法壓濾至100 ml，冷至室溫，定容。

2.2.4 制備法Ⅳ:將所用溶媒改為熱硫酸溶液(0.05 mol/L)外，余照“2.2.3”項(xiàng)下方法制備。

2.3 排除影響乳酸依沙吖啶吸收值因素

2.3.1 不同過(guò)濾材料的吸附作用:精密量取乳酸依沙吖啶對(duì)照品儲(chǔ)備液(0.125 mg/ml)10.0 ml 9份，分置100 m l量瓶中，加水至刻度，搖勻，其中3份用普通定性濾紙過(guò)濾，3份用0.45μm濾膜過(guò)濾，3份不過(guò)濾，測(cè)定吸光度值，結(jié)果3次測(cè)定均值分別為0.511、0.578和0.584。與不過(guò)濾比較，普通定性濾紙過(guò)濾吸收值降低12.5%，0.45μm濾膜過(guò)濾吸收值降低1.03%。表明普通定性濾紙過(guò)濾對(duì)乳酸依沙吖啶有明顯的吸附作用。

2.3.2 共存成分對(duì)乳酸依沙吖啶吸收值的影響:分別取混合物 A、B、C 0.1、0.1、0.2 g各 3 份，精密稱(chēng)定，照“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試液，測(cè)定。結(jié)果混合物 A、B、C測(cè)得率分別為 98.26%、98.69%和46.33%(n=3)，表明共存成分滑石粉對(duì)乳酸依沙吖啶有明顯的吸附作用，影響測(cè)得率。

2.3.3 供試液制備方法對(duì)乳酸依沙吖啶吸收值的影響:取各制備法制備的供試液，分別測(cè)定乳酸依沙吖啶含量，結(jié)果制備法Ⅰ～Ⅳ制備的供試液的乳酸依沙吖啶測(cè)得率依次為89.58%、87.65%、92.47%和90.61%(n=3)。雖然高、低測(cè)得率之間行t檢驗(yàn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但照制備法Ⅲ制備的供試液測(cè)得率最高。

2.4 紫外吸收光譜與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

2.4.1 乳酸依沙吖啶儲(chǔ)備液制備［6-7］:取經(jīng)105℃干燥至恒重的乳酸依沙吖啶對(duì)照品25 mg，精密稱(chēng)定，加適量80℃以上熱水使溶解，至200 ml量瓶中，放置室溫，加水定容，搖勻，即得乳酸依沙吖啶儲(chǔ)備液(0.125 mg/ml，下稱(chēng)儲(chǔ)備液)。

2.4.2 乳酸依沙吖啶紫外吸收光譜:精密量取儲(chǔ)備液5.0 ml，至50 ml量瓶，加水定容，搖勻，在300～400 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收光譜，可見(jiàn)在362 nm有一最大吸收峰［8-9］，而空白對(duì)照溶液在此范圍內(nèi)未見(jiàn)吸收，對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，故確定測(cè)定波長(zhǎng)為362 nm。

2.4.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備:精密量取儲(chǔ)備液2.0、3.5、5.0、7.0、9.0 ml，分置50 ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，以水為參比溶液，在362 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度(A)，以A(Y)對(duì)濃度(X)作線(xiàn)性回歸，得回歸方程:Y=0．04157X+0．05930(r=0．9997)，表明乳酸依沙吖啶在5～22．5 mg/L范圍內(nèi)與吸光度呈良好線(xiàn)性關(guān)系。

2.5 測(cè)定方法與驗(yàn)證

2.5.1 測(cè)定方法:按制備法Ⅲ制備供試液，以水為參比溶液，在362 nm處測(cè)定吸光度(A)。

2.5.2 方法學(xué)驗(yàn)證

2.5.2.1 測(cè)定范圍與精密度試驗(yàn):取高、中、低含量供試品適量(相當(dāng)于含乳酸依沙吖啶1．2 mg)，各5份，精密稱(chēng)定，至50 ml燒杯中，照制備法Ⅲ制備各供試液，以水作空白，測(cè)得量為根據(jù)樣品稱(chēng)重量與測(cè)定成分含量計(jì)算而得。在362 nm處測(cè)定吸光度(A)，求出相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.5.2.2 加樣回收率測(cè)定:取低含量樣品、乳酸依沙吖啶原料精制品適量，精密稱(chēng)定，充分碾勻，測(cè)得供試品含量5．7491 mg/L。稱(chēng)取該供試品5份(每份約含乳酸依沙吖啶1．2 mg)，精密稱(chēng)定，照制備法Ⅲ制備各供試液，以水作空白對(duì)照，在362 nm處測(cè)定吸光度(A)，求出RSD。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.5.2.3 專(zhuān)屬性試驗(yàn):分別取混合物 A、B、C各0.1、0．1、0．2 g，各3 份，精密稱(chēng)定，照制備法Ⅲ制備供試液，以水為空白對(duì)照液，在200～400 nm波長(zhǎng)處掃描，所用供試液僅在362 nm處有單一峰出現(xiàn)，而空白對(duì)照液則無(wú)吸收，表明其他成分對(duì)乳酸依沙吖啶的紫外吸收測(cè)定方法無(wú)干擾。

2.5.2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn):取“2．5．2．1”項(xiàng)下主法測(cè)得的供試液，分別于 0、1．5、3、4．5、6 h 在 362 nm 處測(cè)定吸收值，結(jié)果分別為 0．536、0．539、0．532、0．538、0．537，RSD=0．5037%，表明供試液在6 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 樣品測(cè)定 按擬定的方法取3批樣品進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。

表1 高、中、低含量供試品中乳酸依沙吖啶精密度測(cè)定結(jié)果

表2 低含量對(duì)照樣品中乳酸依沙吖啶加樣回收率測(cè)定結(jié)果

表3 3批復(fù)方乳酸依沙吖啶散樣品中乳酸依沙吖啶含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

針對(duì)《軍規(guī)》中乳酸依沙吖啶測(cè)定方法測(cè)得率低的情況，本實(shí)驗(yàn)研究表明，濾材選用方面，普通定性濾紙較混合纖維濾膜對(duì)乳酸依沙吖啶的吸附明顯增加，前者吸收值降低 12．5%，而后者僅降低1.03%。將濾材改為孔徑0．45μm的混合纖維微孔濾膜，可減少濾材［10］對(duì)乳酸依沙吖啶的吸附。微孔濾膜的孔徑為椎體狀，光滑的一面孔徑小為正面;粗糙的一面孔徑大為反面，安裝時(shí)應(yīng)將正面朝下，反面朝上，否則易被雜質(zhì)阻塞孔徑，影響濾速［11-13］。

共存成分中，處方比例的滑石粉可使乳酸依沙吖啶測(cè)得量降低46．33%，氧化鋅和硼酸則對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)影響;供試液制備方法方面，本研究設(shè)計(jì)了制備法Ⅰ～Ⅳ，雖然各制備法測(cè)得率經(jīng)t檢驗(yàn)差異無(wú)統(tǒng)學(xué)意義，但制備法Ⅲ制備的供試液測(cè)得率最高。

在以上試驗(yàn)的基礎(chǔ)上提出的改進(jìn)的供試液制備法與原法比較，具有以下特點(diǎn)［4］:一是供試液制備從取樣10 g、制成 50 ml，改為取樣 0．25 g、制備成100 ml，濾層沖洗液量增加約160倍，明顯提高了沖洗效果;二是由原來(lái)的自然過(guò)濾改為壓濾，提高了過(guò)濾速度，改善了過(guò)濾效果;三是供試液制備過(guò)程減少了再稀釋操作和加試劑的反應(yīng)過(guò)程，簡(jiǎn)化了操作環(huán)節(jié)，減少了誤差。

組方中的成分對(duì)乳酸依沙吖啶有吸附作用，但由于各組分都有其獨(dú)特的作用，特別是滑石粉還能起到稀釋作用［2］，因此，不建議改變組方的組成及比例。雖然測(cè)得的主藥回收率偏低，但系滑石粉對(duì)被測(cè)成分的吸附所致，并不影響其臨床應(yīng)用效果。

乳酸依沙吖啶在熱水中易溶，在水中略溶［5］，因此供試品在過(guò)濾時(shí)應(yīng)保持濾液的溫度，防止由于藥液溫度過(guò)低影響藥液濃度，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果偏低。乳酸依沙吖啶見(jiàn)光易分解，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)注意避光操作，以免影響測(cè)定結(jié)果［14-16］。此外，過(guò)濾過(guò)程中的操作壓力、操作速度也會(huì)對(duì)供試液的制備有一定的影響［17-19］，可進(jìn)一步探討。

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Discussion on Content Determ ination of Ethacridine Lactate in Compound Ethacridine Lactate Powder

WANG Qing-fen，ZHENG Shao-zhong(Departmentof Pharmacy，175 Hospital of PLA the Affiliated SoutheastHospital of Xiamen University，F(xiàn)ujian 363000)

ObjectiveTo discuss the content determination of Ethacridine Lactate in Compound Ethacridine Lactate Powder．MethodsThe best preparationmethod of reducing the amountof sample and pressuring filterwithmicropore film below 80℃ was screened by excluding the interference factors．The absorbance(A)and contentwere detected at362 nm with UV spectrophotometry．ResultsThe Ethacridine Lactate had good linear relationship during 5－22.5 mg/L(r=0．9997)of linear range．The average detection rates of samples with high，middle and low contents(n=5)were 93．132%，93．074%and 93．261%respectively．ConclusionThemethod is simple，quick and feasible，and can be used to detect the content of Ethacridine lactate in Compound Ethacridine Lactate Powder．

Quality control;Ethacridine Lactate;Compound ethacridine lactate powder;Spectrophotometry，ultraviolet

R927．2

A

2095-140X(2014)05-0082-04

10．3969/j．issn．2095-140X．2014．05．023

363000福建漳州，解放軍175醫(yī)院，廈門(mén)大學(xué)附屬東南醫(yī)院制劑科

鄭紹忠，電話(huà):13860894774

2013-12-26 修回時(shí)間:2014-01-23)

檢驗(yàn)與病理
·論著·