孫兆敏，張 芹，郭正霞，王靜鳳，李兆杰，薛 勇，王玉明，薛長湖（中國海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東青島266003）

酶促乙酯化和分子蒸餾聯(lián)用制備高DHA乙酯的工藝

孫兆敏，張 芹，郭正霞，王靜鳳，李兆杰，薛 勇，王玉明，薛長湖*
（中國海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東青島266003）

利用固定化脂肪酶催化乙酯化反應(yīng)將裂殖壺菌總脂轉(zhuǎn)化為乙酯，并借助分子蒸餾手段制備得到了高DHA含量的乙酯產(chǎn)品。實(shí)驗(yàn)考察了反應(yīng)溫度、時(shí)間、底物質(zhì)量配比和脂肪酶添加量等參數(shù)對(duì)酶促乙酯化反應(yīng)的影響。在較優(yōu)條件下（反應(yīng)溫度40℃，反應(yīng)時(shí)間24h，底物質(zhì)量比10∶2，Lipozyme 435添加量為油脂質(zhì)量的6%），固定化脂肪酶的操作穩(wěn)定性良好。采用分子蒸餾技術(shù)富集酶促醇解所得裂殖壺菌乙酯中的DHA，可得到DHA含量高于80%的乙酯產(chǎn)品，通過多級(jí)分子蒸餾和將輕相組分回流的方式可以顯著提高DHA含量乙酯的得率。

裂殖壺菌，乙酯化，分子蒸餾，DHA

二十二碳六烯酸（DHA）是一種重要的n-3多不飽和脂肪酸（n-3 PUFA），它是嬰幼兒的生長發(fā)育和維持大腦的正常認(rèn)知功能不可或缺的物質(zhì)[1]。裂殖壺菌（Schizochytrium sp.）是目前工業(yè)發(fā)酵制備DHA的理想菌種之一，其產(chǎn)生的油脂可達(dá)細(xì)胞干重的70%以上，而DHA的含量則多在35%～45%范圍內(nèi)[2]，是制備高含量DHA產(chǎn)品的優(yōu)良原料。

脂肪酸乙酯或甲酯的制備通常采用化學(xué)法，即采用堿性化合物（如LiOH、NaOH、CH3ONa等）[3-7]為催化劑在高溫條件反應(yīng)，反應(yīng)過程易引起中性脂的皂化、產(chǎn)物不易于分離純化且產(chǎn)生大量污染環(huán)境的廢棄物；以脂肪酶作為催化劑的反應(yīng)具有反應(yīng)條件溫和、效率高和產(chǎn)物易于分離純化等優(yōu)點(diǎn)[8]。目前利用脂肪酶催乙酯化反應(yīng)的研究多集中在生物柴油[9-11]和富含n-3PUFA的甘油酯的酶法制備[12-13]方面。分子蒸餾技術(shù)可在遠(yuǎn)低于物料沸點(diǎn)的溫度條件下進(jìn)行分離，蒸餾壓力低，受熱時(shí)間短，特別適于高沸點(diǎn)、易氧化、熱敏性物質(zhì)的分離，且不涉及對(duì)環(huán)境有害的廢棄物的排放，目前該技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于維生素E、單甘油酯、L-乳酸等的提取和精制以及n-3 PUFA的富集等領(lǐng)域[14-16]。

本研究擬采用固定化脂肪酶為催化劑，催化裂殖壺菌總脂與乙醇的醇解反應(yīng)制備含DHA的乙酯，并通過分子蒸餾法進(jìn)一步富集乙酯中的DHA，得到高DHA含量的乙酯產(chǎn)品。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

裂殖壺菌（Schizochytrium sp.）干粉 廈門匯盛生物有限公司；固定化脂肪酶Lipozyme 435（活力為76.33U/g） 天津諾維信公司。

6890N氣相色譜儀、1100型液相色譜儀 美國Agilent公司；ELSD2000型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器 美國Alltech公司；KDL-1型分子蒸餾設(shè)備 德國UIC公司；Laborota4000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 德國Heidolph公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 裂殖壺菌總脂的提取 稱取500g裂殖壺菌干粉加入1.5L氯仿-甲醇混合液（2∶1，V/V）攪拌提取30min，抽濾得到濾液減壓濃縮至1.0L后加入5%NaCl溶液400mL充分振蕩，靜置分層取下層氯仿相，過無水硫酸鈉脫水后于45℃、-0.08MPa條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)脫除氯仿，得到黃色裂殖壺菌總脂。

1.2.2 裂殖壺菌總脂的酶促乙酯化 稱取裂殖壺菌總脂、無水乙醇以及固定化脂肪酶Lipozyme 435加入具塞三角瓶中，充氮?dú)夂竺芊?，置于振蕩水浴搖床中分別在不同溫度下反應(yīng)一定時(shí)間。反應(yīng)完畢后過濾取濾液于60℃、-0.08MPa條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)脫除未反應(yīng)的乙醇，取樣溶于正己烷-異丙醇混合液（1∶1，V/V），液相色譜法測(cè)定其脂質(zhì)組成，計(jì)算酯化率。

1.2.3 裂殖壺菌乙酯的分子蒸餾 將酶促乙酯化制備得到的裂殖壺菌乙酯產(chǎn)物經(jīng)水洗、脫色、脫水后進(jìn)行分子蒸餾。首先在不同蒸餾溫度下進(jìn)行單級(jí)分子蒸餾，收集重相組分分析其脂肪酸組成，再進(jìn)行多級(jí)分子蒸餾制備高DHA含量的乙酯產(chǎn)品，單級(jí)分子蒸餾和多級(jí)分子蒸餾各級(jí)蒸餾單元的刮片轉(zhuǎn)速為170r/min，蒸餾壓力為0.1Pa，進(jìn)料速度為4mL/min，其高DHA乙酯得率即為分子蒸餾重相組分占進(jìn)料量的百分比。

1.2.4 脂質(zhì)組成測(cè)定 反應(yīng)混合物的脂質(zhì)組成測(cè)定采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器聯(lián)用（HPLCELSD）的方法[17]，其條件如下：a.色譜條件：液相色譜儀為Agilent1100型液相色譜儀；流動(dòng)相采用正己烷-異丙醇-乙酸（90∶10∶0.2，V/V/V），流速為0.8mL/min，每個(gè)樣品分析時(shí)間為12min；分析柱選用Rx-SIL型正相硅膠色譜柱，柱溫35℃；b.ELSD條件：以99.9%氮?dú)鉃殪F化氣，流量為1.4L/min；撞擊器處于關(guān)閉模式；漂移管溫度為60℃。根據(jù)計(jì)算機(jī)采集的數(shù)據(jù)進(jìn)行積分計(jì)算各組分峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各組分在樣品中的質(zhì)量，計(jì)算各組分在反應(yīng)混合物中的含量，酯化率（ED）和DHA酯化率（ED of DHA）的計(jì)算公式如下：

式中：m（EE）—樣品中乙酯（EE）的質(zhì)量，mg；m’（EE）—理論上裂殖壺菌總脂能轉(zhuǎn)化成的EE質(zhì)量，mg；A—一定反應(yīng)時(shí)間EE中DHA的含量，%；A’—裂殖壺菌總脂中DHA的含量，%。

1.2.5 脂肪酸組成測(cè)定 脂肪酸組成的測(cè)定采用氣相色譜法，其樣品衍生和檢測(cè)條件如下：a.反應(yīng)混合物的甲酯化：取約10μL樣品點(diǎn)樣于硅膠G薄層色譜板上，于正己烷-乙醚-乙酸（85∶15∶1，V/V）體系中展開，硅膠板揮干溶劑后碘缸略微顯色，刮下各條帶于10mL具塞試管中，加入10%H2SO4-甲醇溶液1mL后于60℃水浴加熱15min，之后加入0.4mL正己烷充分振蕩，靜置分層，取正己烷層脫水過膜后密封冷藏待測(cè)。b.氣相色譜條件條件：進(jìn)樣口溫度為250℃，分流比為20∶1；分析柱選用HP-INNOWax石英毛細(xì)管柱（30m×0.32mm×0.25μm），采用梯度升溫，初始溫度為170℃，以3℃/min升溫至210℃并保持13min，其載氣（高純氮?dú)猓┝魉贋?mL/min；檢測(cè)器為火焰離子化檢測(cè)器（FID），檢測(cè)器溫度280℃。

2 結(jié)果與討論

2.1 裂殖壺菌總脂脂肪酸測(cè)定

裂殖壺菌干粉經(jīng)氯仿-甲醇法提取總脂后，采用氣相色譜法測(cè)定了其脂肪酸組成。實(shí)驗(yàn)選用的裂殖壺菌干粉總脂中的脂肪酸組成較為簡單，主要含有六種脂肪酸，分別為：23.89%C16∶0、2.33%C18∶0、6.27%C18∶1、16.94%C18∶2、8.69%C22∶5 n-6和41.69% C22∶6 n-3（DHA），包括了飽和脂肪酸（26.22%）、單不飽和脂肪酸（6.27%）和多不飽和脂肪酸（67.32%）。

圖1 裂殖壺菌總脂脂肪酸氣相色譜圖Fig.1 The GC chromatogram of fatty acids in total lipids of Schizochytrium sp.

圖2 反應(yīng)溫度對(duì)酶促乙酯化反應(yīng)的影響Fig.2 Effect of temperature on enzymatic ethylation

2.2 溫度對(duì)酶促乙酯化的影響

溫度能夠改變反應(yīng)體系的黏度和酶的活力。隨著溫度的升高，反應(yīng)體系的黏度下降，反應(yīng)底物和產(chǎn)物的傳質(zhì)效率得到提高，在一定的溫度范圍內(nèi)，酶活力隨溫度的升高而提高，但過高的溫度則會(huì)引起酶蛋白的變性失活。實(shí)驗(yàn)在底物質(zhì)量比（裂殖壺菌總脂與無水乙醇的質(zhì)量比）為10∶3、固定化脂肪酶添加量3%、反應(yīng)時(shí)間24h的條件下，選取了30、40、50、60℃四個(gè)溫度來考察溫度對(duì)酶促乙酯化反應(yīng)的影響。由圖2可知，在30℃的溫度條件下，反應(yīng)的乙酯化率和DHA酯化率分別為59.19%和45.90%；提高溫度至40℃，乙酯化率、乙酯中DHA的含量和DHA酯化率都達(dá)到最高；提高溫度至50℃和60℃，Lipozyme 435的催化效率甚至低于30℃的反應(yīng)結(jié)果，可能原因是極性較強(qiáng)的乙醇和高溫的共同作用導(dǎo)致酶活力的降低。根據(jù)以上的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選用40℃作為后續(xù)研究的溫度條件。

2.3 反應(yīng)時(shí)間對(duì)酶促乙酯化的影響

實(shí)驗(yàn)在反應(yīng)溫度40℃、底物質(zhì)量比10∶3、固定化脂肪酶添加量3%的條件下，于不同反應(yīng)時(shí)間取樣測(cè)定其脂質(zhì)組成和各組分的脂肪酸組成，以考察反應(yīng)時(shí)間對(duì)酶促乙酯化反應(yīng)的影響，其結(jié)果如圖3所示。反應(yīng)初期的底物濃度高，反應(yīng)速度較快。在所選的實(shí)驗(yàn)條件下反應(yīng)2h，裂殖壺菌總脂的酯化率和DHA酯化率分別達(dá)到25.00%和12.38%，當(dāng)反應(yīng)至4h時(shí)，酯化率和DHA酯化率分別為39.59%和22.31%，與前2h相比反應(yīng)速度有所降低，由于底物的消耗，4h后的反應(yīng)速度進(jìn)一步降低，當(dāng)反應(yīng)至12h時(shí)，酯化率和DHA酯化率分別達(dá)到63.46%和45.10%，而反應(yīng)時(shí)間為24h時(shí)基本達(dá)到平衡，因此選取24h作為后續(xù)研究的反應(yīng)時(shí)間。

圖3 反應(yīng)時(shí)間對(duì)酶促乙酯化反應(yīng)的影響Fig.3 Effect of reaction time on enzymatic ethylation

圖3 所示DHA酯化率的曲線在反應(yīng)過程中一直低于酯化率的曲線，表明裂殖壺菌總脂中的DHA酯化率一直低于總脂肪酸的酯化率，說明Lipozyme 435在反應(yīng)過程中可能優(yōu)先催化飽和脂肪酸和低不飽和度的脂肪酸參與乙酯化反應(yīng)，表現(xiàn)出一定的脂肪酸選擇性，相同的結(jié)論也可以通過圖3中乙酯的DHA含量隨反應(yīng)時(shí)間的變化曲線得出。

2.4 底物質(zhì)量比對(duì)酶促乙酯化的影響

實(shí)驗(yàn)在反應(yīng)溫度40℃、反應(yīng)時(shí)間24h、脂肪酶添加量3%的條件下，考察了底物質(zhì)量比對(duì)酶促乙酯化反應(yīng)的影響。由圖4可知，當(dāng)?shù)孜镔|(zhì)量比為10∶1時(shí)，乙醇的添加量在理論上不足以使裂殖壺菌總脂完全反應(yīng)，在實(shí)驗(yàn)所選的條件下反應(yīng)24h，其酯化率和DHA酯化率分別為49.47%和52.60%；底物質(zhì)量比為10∶2時(shí)，酯化率和DHA酯化率為最高，分別為86.72%和87.42%；之后隨著底物質(zhì)量比的降低（乙醇添加量的增加），酯化率和DHA酯化率逐漸降低，且底物比為10∶8和10∶10的時(shí)候，乙酯化反應(yīng)結(jié)果基本相同。由于乙醇和甘油三酯難于互溶，降低底物質(zhì)量比（即反應(yīng)體系中乙醇量的增加），其直接的結(jié)果是影響反應(yīng)底物的混合以及固定化酶在反應(yīng)體系的均勻分布，從而降低脂肪酶的催化效率；由于乙醇的極性較強(qiáng)，向反應(yīng)體系中加入過高的乙醇不利于酶活力穩(wěn)定性的保持[18-21]。實(shí)驗(yàn)所選取的最優(yōu)底物質(zhì)量比為10∶2，在反應(yīng)開始之前，反應(yīng)體系呈微乳狀，脂肪酶催化醇解反應(yīng)產(chǎn)生脂肪酸乙酯、甘油二酯和單甘油酯等產(chǎn)物，其中脂肪酸乙酯可與乙醇互溶，而甘油二酯和單甘油酯存在羥基基團(tuán)，其對(duì)乙醇的溶解性大大增強(qiáng)，乙酯化反應(yīng)30min，反應(yīng)混合物即可互溶成為均一透明的液體（數(shù)據(jù)未列出），而增加酶量則可能更利于加快該進(jìn)程。另外，乙酯中的DHA含量隨底物質(zhì)量比的降低而降低，說明反應(yīng)體系中乙醇量的增加會(huì)導(dǎo)致DHA在甘油酯中的富集。

圖4 底物質(zhì)量比對(duì)酶促乙酯化反應(yīng)的影響Fig.4 Effect of substrate ratio on enzymatic ethylation

2.5 脂肪酶添加量對(duì)酶促乙酯化的影響

為考察脂肪酶添加量對(duì)酶促乙酯化反應(yīng)的影響，在反應(yīng)溫度40℃、底物質(zhì)量比10∶2條件下，選取1%、2%、3%、4%、6%、8%和10%七個(gè)脂肪酶添加量進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，反應(yīng)24h后測(cè)定乙酯化指標(biāo)，結(jié)果如圖5所示。脂肪酶的添加量小于4%時(shí)，乙酯中DHA的含量隨酶量的增加而緩慢提高，直到脂肪酶添加量增加到4%，乙酯中DHA的含量達(dá)到與原料裂殖壺菌總脂相同的水平，繼續(xù)增加酶量至6%，DHA酯化率不再低于乙酯化率，二者均接近100%。脂肪酶添加量較低時(shí)，乙酯化率和DHA酯化率較低的原因之一可能是反應(yīng)產(chǎn)生甘油對(duì)固定化酶的包裹作用，加大酶量可能在一定程度上“稀釋”了這種包裹作用。根據(jù)以上的結(jié)果，選擇脂肪酶添加量6%進(jìn)行后續(xù)研究。

圖5 酶添加量對(duì)酶促乙酯化反應(yīng)的影響Fig.5 Effect of enzyme dosage on enzymatic ethylation

2.6 固定化酶的重復(fù)利用

隨著酶促乙酯化反應(yīng)的進(jìn)行，當(dāng)甘油骨架上的脂肪酸被完全乙酯化后，反應(yīng)體系中，甘油黏度和密度高，且不溶于反應(yīng)體系，易于包裹固定化酶顆粒阻礙底物與固定化酶的接觸，從而阻礙反應(yīng)的進(jìn)行。Shimada等[22]在考察脂肪酶的操作穩(wěn)定性時(shí)，發(fā)現(xiàn)甘油積累在固定化酶表面，需要定時(shí)用溶劑清洗。

由于實(shí)驗(yàn)選用的脂肪酶添加量較大，可在一定程度上減小甘油對(duì)固定化酶的包裹作用，實(shí)驗(yàn)在如下條件進(jìn)行以考察固定化酶的操作穩(wěn)定性：底物質(zhì)量比10∶2，Lipozyme 435添加量為油脂質(zhì)量的6%，反應(yīng)溫度40℃，反應(yīng)時(shí)間24h。每一批反應(yīng)完畢后過濾，固定化酶經(jīng)叔丁醇洗滌后直接加入新配制的底物混合液中進(jìn)行下一次反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)共進(jìn)行20次，其結(jié)果如圖6所示。

圖6 固定化脂肪酶的重復(fù)利用Fig.6 The reuse of immobilized lipase

由圖6可知，經(jīng)過20批次的反應(yīng)，在所選的條件下反應(yīng)24h，酯化率和DHA酯化率沒有明顯的降低，其酯化率和DHA酯化率分別為98.44%和97.95%。將20批次反應(yīng)所得油脂混合物合并，經(jīng)5%NaCl溶液洗滌三次后脫水過0.45μm有機(jī)膜，得到黃色的乙酯產(chǎn)品，其DHA含量為40.91%。

2.7 裂殖壺菌乙酯的分子蒸餾

在刮片轉(zhuǎn)速170r/min、蒸餾壓力0.1Pa、進(jìn)料速度4mL/min的條件下，將酶促乙酯化所得裂殖壺菌乙酯于不同溫度進(jìn)行單級(jí)分子蒸餾，收集重相組分測(cè)定脂肪酸組成，所得結(jié)果如圖7所示。

圖7 溫度對(duì)分子蒸餾重相脂肪酸組成的影響Fig.7 Effect of temperature on the fatty acid composition of heavy fractions of molecular distillation

在80～130℃范圍內(nèi)，隨著蒸餾溫度的升高，重相組分中DHA含量不斷提高，當(dāng)溫度達(dá)到130℃時(shí)，重相中DHA和C22∶5n-6含量達(dá)到81.72%和15.86%，由于兩種脂肪酸乙酯的分子自由程差異較小，在實(shí)驗(yàn)室條件下無法通過提高溫度進(jìn)一步提高DHA的含量，當(dāng)提高蒸餾溫度至140℃時(shí)，裂殖壺菌乙酯全部成為輕相。

圖8 三級(jí)分子蒸餾重相脂肪酸組成氣相色譜圖Fig.8 The GC chromatogram of fatty acids in heavy fraction of three-stage procedure of molecular distillation

表1 六級(jí)分子蒸餾結(jié)果（90℃-90℃-100℃-100℃-110℃-110℃）Table 1 Results of six-stage procedure（90℃-90℃-100℃-100℃-110℃-110℃）of molecular distillation

表2 三級(jí)分子蒸餾結(jié)果（100℃-100℃-110℃）Table 2 Results of three-stage procedure（100℃-100℃-110℃）of molecular distillation

雖然采用單級(jí)分子蒸餾在130℃條件下可得到DHA含量在80%以上的乙酯產(chǎn)品，但高DHA乙酯得率較低（僅21.19%）。通過多級(jí)分子蒸餾不僅可以提高最終產(chǎn)品的得率，還能在得到相同DHA含量的產(chǎn)品的前提下，降低蒸餾溫度。多級(jí)分子蒸餾首先在較低的溫度下進(jìn)行分子蒸餾，收集重相組分于下一級(jí)溫度條件進(jìn)行蒸餾，多級(jí)分子蒸餾的刮片轉(zhuǎn)速、蒸餾壓力和進(jìn)料速度均與單級(jí)分子蒸餾相同。表1和表2分別是采用六級(jí)分子蒸餾和三級(jí)分子蒸餾富集DHA乙酯的結(jié)果。比較可知，在三級(jí)分子蒸餾過程中，每級(jí)重相中DHA含量都低于六級(jí)分子蒸餾時(shí)相同溫度下所得到的重相中DHA含量，最終產(chǎn)品中DHA的含量僅比六級(jí)分子蒸餾低0.66%。

六級(jí)和三級(jí)分子蒸餾最終高DHA乙酯的得率分別增加到30.96%和33.12%。在多級(jí)分子蒸餾的升溫過程中，輕相組分中的DHA含量隨蒸餾溫度的升高而增加，六級(jí)分子蒸餾所得輕相組分中DHA的含量依次為0%、2.61%、23.94%、39.95%、59.99%和73.37%，而三級(jí)分子蒸餾所得輕相組分中DHA的含量依次為7.10%、19.14%和47.84%，在多級(jí)分子蒸餾過程中，將高DHA含量的輕相組分回流繼續(xù)進(jìn)行蒸餾，可進(jìn)一步提高產(chǎn)品的得率，如將六級(jí)分子蒸餾中第四級(jí)輕相與第一級(jí)的進(jìn)料混合，將第五級(jí)輕相與第二級(jí)的進(jìn)料混合，將第六級(jí)輕相與第三級(jí)進(jìn)料混合，可將六級(jí)分子蒸餾的產(chǎn)品得率由30.96%提高至36.45%。

3 結(jié)論

利用脂肪酶催化乙酯化反應(yīng)將含40%以上DHA的裂殖壺菌總脂轉(zhuǎn)化為乙酯，并借助分子蒸餾手段制備得到DHA含量高于80%的乙酯產(chǎn)品。采用固定化脂肪酶為催化劑可將裂殖壺菌總脂轉(zhuǎn)化為乙酯，相對(duì)于化學(xué)法，該法具有條件溫和、不產(chǎn)生廢棄物和產(chǎn)物易于分離純化等優(yōu)點(diǎn)。在所得較優(yōu)反應(yīng)條件下（反應(yīng)溫度40℃，反應(yīng)時(shí)間24h，底物質(zhì)量比10∶2，Lipozyme 435添加量為油脂質(zhì)量的6%），固定化脂肪酶的操作穩(wěn)定性良好，反應(yīng)20批次裂殖壺菌總脂酯化率未出現(xiàn)明顯降低。分子蒸餾可有效地富集酶促乙酯化所得乙酯中的DHA，而多級(jí)分子蒸餾和將較高DHA含量的輕相組分回流繼續(xù)進(jìn)行蒸餾，可提高高DHA含量產(chǎn)品的得率。

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Preparation of ethyl esters highly enriched in DHA via enzymatic ethylation and molecular distillation

SUN Zhao-min，ZHANG Qin，GUO Zheng-xia，WANG Jing-feng，LI Zhao-jie，XUE Yong，WANG Yu-ming，XUE Chang-hu*
（College of Food Science and Engineering，Ocean University of China，Qingdao 266003，China）

In the present study，the total lipids from Schizochytrium sp.were ethylated by immobilized lipase and ethyl esters highly enriched in C22∶6 n-3（DHA）was obtained through molecular distillation.The effect of temperature，reaction time，substrate ratio，and enzyme dosage on enzymatic ethylation was investigated.Under optimum reaction conditions（reaction temperature 40℃，reaction time 24h，substrate ratio 10∶2，Lipozyme 435 dosage 6%），immobilized lipase had good operational stability.Ethyl esters with no less than 80%DHA was obtained via molecular distillation，and the yield of DHA ethyl esters could be significantly improved by multistage molecular distillation and recycle of light fractions.

Schizochytrium sp.；ethylation；molecular distillation；DHA

TS225.6

A

1002-0306（2014）12-0167-05

10.13386/j.issn1002-0306.2014.12.027

2013－09－24 *通訊聯(lián)系人

孫兆敏（1983-），男，博士，研究方向：水產(chǎn)化學(xué)。

“泰山學(xué)者”建設(shè)工程專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)；長江學(xué)者和創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)發(fā)展計(jì)劃資助；海洋公益性行業(yè)專項(xiàng)（201105029）；國際科技合作項(xiàng)目（2010DFA31330）；山東省科技發(fā)展計(jì)劃（2012G0021506）。