袁建菱 郭建生 左之文 曾貴榮 丁志高 張國民

（湖南中醫(yī)藥大學，長沙410208）

婦科千金片對盆腔炎模型大鼠血清中TNF-α、NF-κB含量的影響※

袁建菱 郭建生*左之文 曾貴榮 丁志高 張國民

（湖南中醫(yī)藥大學，長沙410208）

目的探討婦科千金片治療盆腔炎的作用機理。方法選用Wistar大鼠，運用子宮內(nèi)接種混合菌液制造急性盆腔炎模型。隨機分為空白組、假手術(shù)組、模型組、婦科千金片低、中、高劑量組、婦炎康組及羅紅霉素組，治療后，用ELISA檢測血清腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、核因子κB（NF-kB）含量。結(jié)果與空白組比較，模型組TNF-α、NF-κB的含量明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，婦科千金片低、中、高劑量組、婦炎康組及羅紅霉素組的TNF-α、NF-κB含量明顯降低（P＜0.05）。結(jié)論婦科千金片可能是通過調(diào)節(jié)血清中TNF-α、NF-κB的含量而發(fā)揮抗炎作用。

婦科千金片；盆腔炎；腫瘤壞死因子-α；核因子κB；中醫(yī)藥實驗

婦科千金片為臨床常用中成藥，具有清熱除濕、益氣化瘀之功效，用于濕熱瘀阻所致的帶下病，腹痛。癥見帶下量多，色黃質(zhì)稠、臭穢，小腹疼痛，腰骶酸痛，神疲乏力；慢性盆腔炎、子宮內(nèi)膜炎、慢性宮頸炎見上述癥候者［1］。婦科千金片除用于常見的婦科炎癥外，還廣泛用于急慢性前列腺炎、慢性咽炎、慢性支氣管炎、慢性腸炎等，有很好的臨床應(yīng)用前景［2］。藥效學研究表明，婦科千金片對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌和白色念珠菌均有抑菌作用，對環(huán)磷酰胺所致免疫低下的小鼠，具有增加小鼠血清溶血抗體、提高小鼠細胞吞噬百分率和吞噬指數(shù)的作用［3］。為進一步探討其藥理作用，將婦科千金片對大鼠盆腔炎模型血清中TNF-α、NF-κB含量的影響進行了研究，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1動物雌性Wistar大鼠74只，體重180～220g，鼠齡8周，由上海西普爾-必凱實驗動物有限公司提供（SPF級，合格證號2008-0016），每籠圈5只。

1.2造模及分組［4］將大鼠分別稱重，10%烏拉坦按0.075ml／kg體重腹腔麻醉后，以1ml注射器取0.2ml含 3×109個／ml的混合菌液（含金黃色葡萄球菌、大腸桿菌及解脲脲原體），左手持鼠尾提起大鼠，用10ml注射器的針頭于陰道底部的子宮頸分叉處小心進入一側(cè)宮腔內(nèi)，針頭宮腔內(nèi)來回抽拉2次，然后朝卵巢方向推注菌液0.1ml，同樣操作步驟將0.lml菌液注入另一側(cè)子宮。假手術(shù)組，手術(shù)操作同上，但針頭進入子宮后不來回抽動，只朝卵巢方向注射等量0.9%生理鹽水，空白組不予任何處理。

正常組、假手術(shù)組各10只，模型組、婦科千金片低、中、高劑量組、婦炎康組及羅紅霉素組各9只。按大鼠與人等效劑量換算出各大鼠給藥劑量各藥均配成10ml／kg體質(zhì)量給藥溶液，灌胃給藥，每日1次，連續(xù)21d。

1.3指標檢測灌胃給藥結(jié)束后第2天，以10%烏拉坦0.075ml／kg體質(zhì)量腹腔注射麻醉。無菌條件下，斷頭取血5ml，在4℃，1.2×106rqm／分鐘速度下離心30min，吸取上清，在－20℃保存血清，供ELISA檢測，分析程序如下：①確定持有一定數(shù)量的離心管。②向槽內(nèi)加入50μl標準品和樣品。③每個槽內(nèi)加入結(jié)合酶試劑100ul，輕輕地混勻，持續(xù)15秒。④在36±2℃下孵化60分鐘。⑤將孵化混合物通過排空板排除到合適的廢物容器。⑥用去離子水（20x緩沖液50ml和蒸餾水950ml）沖洗微量滴定器5次。⑦在吸水紙上用力敲打離心管以回收殘余的水滴。⑧分別加入50ul染色劑A和染色劑B，輕輕地混合，持續(xù)5秒。⑨在（36±2）℃下孵化15分鐘。⑩通過加入50μl的終止劑以終止反應(yīng)?！?1輕輕地混合30秒?！?2在30分鐘內(nèi)使用分光光度計測定光密度，選擇光密度在450nm。

1.4統(tǒng)計分析所有數(shù)據(jù)均用SPSS15.0 windows軟件處理，以均數(shù)和標準差表示，組間比較若方差齊選擇LSD法，方差不齊選擇Tamhane法進行方差分析。

2 結(jié)果

表1 婦科千金片對盆腔炎模型大鼠血清中TNF-α、NF-κB含量的影響（x±s）

表1顯示，與空白組比較，模型組TNF-α、NF-κB的含量明顯升高（P＜0.05），表明盆腔炎模型制作成功；與模型組比較，各治療組TNF-α、NF-κB的含量明顯降低（P＜0.05），表明各治療組對盆腔炎模型均具有一定的調(diào)節(jié)作用。但婦科千金片低、中、高劑量組、婦炎康組及羅紅霉素組組間比較，無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），表明各治療組對盆腔炎模型的TNF-α、NF-κB的調(diào)節(jié)的差異不明顯。

3 討論

研究表明婦科千金片對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌和白色念珠菌均有抑菌作用，對環(huán)磷酰胺所致免疫低下的小鼠，具有增加血清溶血抗體、提高細胞吞噬百分率和吞噬指數(shù)的作用［5］。核因子kB（NF-kB）作為一種普遍存在的轉(zhuǎn)錄因子，是多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的匯聚點，不僅參與介導(dǎo)了免疫應(yīng)答病毒復(fù)制、細胞凋亡和增殖的多種基因的表達，而且在調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的基因表達中起關(guān)鍵作用［6］。已證實NF-κB可高效誘導(dǎo)多種細胞因子（如IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α）趨化因子和急性期反應(yīng)蛋白的基因蛋白的基因表達，同時對參與炎癥級聯(lián)瀑布效應(yīng)多種酶的基因表達具有重要的調(diào)控作用［7］。已證實NF-κB可高效誘導(dǎo)多種細胞因子和急性期反應(yīng)蛋白的基因表達，對參與炎癥級聯(lián)瀑布效應(yīng)的多種酶的基因表達具有重要的調(diào)控作用。作為誘導(dǎo)細胞反應(yīng)的最初物質(zhì)，可促進中性粒細胞顆粒伴蛋白水解酶釋放，可引起粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子等分泌增加［8］。

TNF-α是一種具有廣泛生物學活性的炎癥細胞因子，作為一種轉(zhuǎn)錄因子，是多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的匯聚點，在調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的基因表達中起關(guān)鍵作用［9］。

本研究結(jié)果表明婦科千金片對大鼠盆腔炎模型TNF-α、NF-κB含量具有的一定的調(diào)節(jié)作用。但各治療組對大鼠盆腔炎模型療效的差異不明顯，婦科千金片低、中、高劑量組與婦炎康組、羅紅霉素組療效相當，顯示婦科千金片可能是通過調(diào)節(jié)血清中TNF-α、NF-κB的含量而發(fā)揮抗炎作用。婦科千金片低、中、高劑量組對調(diào)節(jié)TNF-α、NF-κB含量的差異，尚有待增加樣本量，進一步觀察研究。

［1］王桂花，朱洪耀．婦科千金片對不同類型疾病的臨床研究與探討［J］．中國實用醫(yī)藥，2009，4（30）：123-124．

［2］豐有吉，沈鏗，馬丁，等．婦產(chǎn)科學［M］．北京：人民衛(wèi)生出版社，2005：275-282．

［3］張祖蕩，潘善慶．婦科千金片的藥效學研究［J］．湖南中醫(yī)雜志，1998，14（2）：57．

［4］袁建菱，郭建生，伍參榮，等．婦科千金片對急性盆腔炎模型大鼠血清Ig A、IgG、Ig M的影響［J］．湖南中醫(yī)藥大學學報，2010，30（9）：87-89．

［5］王靜，楊軍，劉超．盆腔炎顆粒對大鼠子宮內(nèi)膜炎療效的研究［J］．中國實驗方劑學雜志，2006，12（1）：56-58．

［6］．付靈梅，游慧，尤昭玲．細胞脂多糖體外誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜炎癥模型的建立［J］．中國實驗方劑學雜志，2005，11（3）：70-72．

［7］丁青，尤昭玲．三七復(fù)合有效成分對子宮內(nèi)膜炎癥細胞NF-κB p65及TNF-α、IL-1β變化的影響［J］．中國中醫(yī)藥科技，2007，14（12）：113-115．

［8］華亞軍，劉靜，凌厲．TNF-α和IL-2在新生兒全身炎癥反應(yīng)綜合征中的臨床價值［J］．上海醫(yī)藥，2009；30（7）：323-324．

［9］李亞珍，傅應(yīng)云，韓雪梅，等．糖皮質(zhì)激素對慢性阻塞性肺疾病患者IL-8及TNF-α的影響［J］．廣東醫(yī)學，2011，32（5）：602-604．

春季飲食三部曲

春天，萬物復(fù)蘇，氣候由寒變暖。飲食上應(yīng)根據(jù)以下三個不同“時氣”而有所側(cè)重。

早春陰寒漸退，陽氣開始升發(fā)，乍暖乍寒。根據(jù)祖國醫(yī)學“春夏養(yǎng)陽”的理論，此時可適當吃些蔥、姜、蒜、韭菜、芥末，不僅能祛散陰寒，助春陽升發(fā)，而其中所含的有效成分，還具有殺菌防病的功效。此時宜少吃性寒食品，以防阻遏陽氣發(fā)越。

仲春古人云，春應(yīng)在肝。肝稟風木，仲春時節(jié)肝氣隨萬物升發(fā)而偏于亢盛。祖國醫(yī)學認為，肝亢可傷脾（木克土），影響脾胃運化。唐代藥王孫思邈曾講：“春日宜省酸增甘，以養(yǎng)脾氣”。此時可適當進食大棗、蜂蜜、鍋巴之類滋補脾胃的食物，少吃過酸或油膩等不易消化的食物。這時正值各種既富含營養(yǎng)又有療疾作用的野菜繁茂榮盛之時，如薺菜、馬齒莧、魚腥草、蕨菜、竹筍、香椿等，應(yīng)不失時機地擇食。

晚春氣溫日漸升高，此時應(yīng)以清淡飲食為主，在適當進食優(yōu)質(zhì)蛋白類食物及蔬果之外，可飲用綠豆湯、赤豆湯、酸梅湯以及綠茶，防止體內(nèi)積熱。不宜進食羊肉、狗肉、麻辣火鍋以及辣椒、花椒、胡椒等大辛大熱之品，以防邪熱化火，變發(fā)瘡癰癤腫等疾病。

——國家中醫(yī)藥管理局網(wǎng)站

Th e In flue n c e o f Gy ne c olo gic Qianjin Tablet t o t he Con t e n t of TNF-α、NF-κBin Se r um in Ra ts Pel vic In flamma t o r y Dis ea s e Mo d el

Yuan Jianling Guo Jiansheng?Zuo Zhiw en Zeng Guirong D ing Zhigao Zhang Guomin
（Hunan university of traditional Chinesemedicine，Hunan Changsha 410208）

ObjectiveTo investigate the mechanism of Gynecologic Qianjin Tablet to treat rats with pelvic inflammatory disease．MethodsFemale Wistar rats were inoculated mixed bacilli within the uterine to produce acute pelvic inflammatory disease models．Experiment rats were randomly divided into the blank group，the sham-operation group，the model group，the low dosage group，the middle dosage group，the high dosage group，the Fuyankang group，the Roxithromycin group，After 21 days of treatment，the content of Tumor necrosis factor alpha（TNF alpha），nuclear factorκB（NF-κB）in serum were testinged by ELISA．ResultsCompared with the blank group，TNF-α，NF-κB levels of the model group were statistically increased（P＜05）；Compared with the model group，the levels of TNF-αand NF-κBin each treatment groups were statistically decreased（P＜05）；However，all pairwise comparisons between treatment groups had no statistically significant（P＞0.05）．ConclusionGynecologic Qianjin Tablet may play an anti-inflammatory by decreasing the levels of TNF-αand NF-κB．

Gynecologic Qianjin Tablet；Pelvic inflammatory disease；Tumor necrosis factor alpha（TNFalpha）；Nuclear factorκB（NF－kB）；Traditional Chinese medicine experiment

10.3969／j.issn.1672-2779.2014.07.104

：1672-2779（2014）-07-0150-02

蘇 玲 本文校對：劉 密

2013-12-20）

湖南省高校創(chuàng)新平臺開放基金項目［No：10K045］

*通訊作者