金曉敏,李 耿,吳依娜*

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣東 廣州 510000；2.廣州王老吉大健康產(chǎn)業(yè)有限公司，廣東 廣州 510000)

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千斤腎安寧膠囊薄層色譜鑒別

金曉敏1,2,李 耿1,吳依娜1*

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣東 廣州 510000；2.廣州王老吉大健康產(chǎn)業(yè)有限公司，廣東 廣州 510000)

目的：建立千斤腎安寧膠囊的TLC鑒別方法。方法：采用TLC對千斤腎安寧膠囊中千斤拔、淫羊藿、補(bǔ)骨脂、冬蟲夏草、人參、三七等主要成分進(jìn)行定性鑒別。結(jié)果與結(jié)論：該方法能明顯檢測出千斤拔、淫羊藿、補(bǔ)骨脂、冬蟲夏草、人參、三七等藥物成分，斑點(diǎn)清晰，分離度好，專屬性較強(qiáng)，重復(fù)性好，可以有效控制千斤腎安寧膠囊的質(zhì)量。

千斤腎安寧；薄層色譜；藥物鑒別

千斤腎安寧是近年來開發(fā)的一類治療慢性腎炎普通型(脾腎兩虛證)、氮質(zhì)血癥期慢性腎功能不全的藥物，主要功效為健脾補(bǔ)腎、利尿降濁。《中國藥典》(2010年版)中收納了桂林漓江制藥公司生產(chǎn)的千斤腎安寧膠囊國家標(biāo)準(zhǔn)[1]，系統(tǒng)介紹了千斤腎安寧的配方組成及工藝制法[2]。

1 實(shí)驗(yàn)材料

千斤腎安寧膠囊若干，千斤拔、淫羊藿、補(bǔ)骨脂、冬蟲夏草、人參、三七等對照藥材，淫羊藿苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110737-200415)、補(bǔ)骨脂對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110739-201115)、異補(bǔ)骨脂對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110738-201012)、冬蟲夏草對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：121201-200502)、人參皂苷Rg1(中國食品藥品檢定研究院，批號：110703-201128)、人參皂苷Rb1(中國食品藥品檢定研究院，批號：110704-201223)、人參皂苷Re(中國食品藥品檢定研究院，批號：110754-201324)、三七皂苷R1(中國食品藥品檢定研究院，批號：110745-200617),陰性對照品。

2 方法與結(jié)果

2.1 千斤拔TLC鑒別

取本品內(nèi)容物2g，加甲醇20mL，加熱回流20min，濾過，濾液置分液漏斗中，加石油醚(60～90℃)振搖提取2次，每次15mL，合并石油醚液，濃縮至1mL，作為供試品溶液。另取千斤拔對照藥材2.5g，同法制成對照藥材溶液。取除千斤拔外根據(jù)處方量及其工藝制得的樣品約2g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法，制備陰性樣品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5～10μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯(6∶4)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以磷鉬酸試液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)，陰性對照品不顯斑點(diǎn)。

2.2 淫羊藿TLC鑒別

取本品內(nèi)容物6g，加水70mL，加熱溶解，濾過，濾液加氯仿40mL，加熱回流1h，靜置分層，棄去氯仿液，水液揮去氯仿，加水飽和的醋酸乙酯振搖提取3次，每次30mL，合并提取液，用0.5mol/L碳酸氫鈉溶液洗滌2次，每次30mL，加水30mL洗滌1次，醋酸乙酯液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。取除淫羊藿外根據(jù)處方量及其工藝制得的樣品約6g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法，制備陰性樣品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液15μL、對照品溶液5μL、陰性對照溶液15μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對照品不顯斑點(diǎn)。

2.3 補(bǔ)骨脂TLC鑒別

取本品內(nèi)容物3g，加醋酸乙酯20mL，加熱回流20min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴?mL使溶解，作為供試品溶液。另取補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素對照品，分別加醋酸乙酯制成每1mL各含1mg的溶液，作為對照品溶液。取除補(bǔ)骨脂外根據(jù)處方量及其工藝制得的樣品約3g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法，制備陰性樣品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述四種溶液各2～4μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正已烷-醋酸乙酯(6∶4)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%氫氧化鉀甲醇溶液，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對照品不顯斑點(diǎn)。

2.4 冬蟲夏草TLC鑒別

取本品內(nèi)容物6g，加乙醚30mL，密塞，時時振搖，浸漬4h，濾過，濾液揮去乙醚，殘?jiān)訜o水乙醇0.5mL使溶解，作為供試品溶液。另取冬蟲夏草對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。取除冬蟲夏草外根據(jù)處方量及其工藝制得的樣品約6g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法，制備陰性樣品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2～5μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正已烷-醋酸乙酯(8∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茴香醛-濃硫酸試劑，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對照品不顯斑點(diǎn)。

2.5 人參/三七TLC鑒別

取本品內(nèi)容物9g，加水18mL攪拌濕潤，加水飽和正丁醇90mL,超聲處理30min，吸取上清液加3倍量氨試液，搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘?jiān)铀m量使溶解。作為供試品溶液。置D101型大孔樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm×柱高10cm)上，先用水洗脫至洗脫液無色，然后用5%NaHCO3洗4個柱體積，之后用水洗脫至洗脫液呈中性，再用純甲醇洗脫至樹脂無色，收集甲醇洗脫液，置蒸發(fā)皿中，蒸干，殘?jiān)眉状?mL溶解，作為供試品溶液；另取人參對照藥材、三七對照藥材各1g，同法制成對照藥材溶液[3]。取除人參及三七外根據(jù)處方量及其工藝制得的樣品約9g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法，制備陰性樣品溶液。

照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-乙酸乙脂-甲醇-水-醋酸(5∶30∶11∶5∶0.2)為展開劑，展距為8cm，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇試液,在110℃加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對照無干擾。

3 結(jié)論與討論

本文所建立的TLC鑒別方法，可以明顯檢出千斤拔、淫羊藿、補(bǔ)骨脂、冬蟲夏草、人參、三七等藥物成分，斑點(diǎn)清晰，分離度好，專屬性較強(qiáng)，重復(fù)性好，可以有效控制千斤腎安寧膠囊的質(zhì)量。提供了三七/人參的色譜鑒別方法，文中千斤腎安寧中供試品的處理方法，在常規(guī)基礎(chǔ)上增加了大孔樹脂純化步驟，有效去除了樣品中的雜質(zhì)，從而使得薄層色譜的斑點(diǎn)更加清晰。通過對目標(biāo)藥材中有效成分的分析，利用溶劑的極性、化合物的吸附性及其在溶劑中的分配系數(shù)來選擇合適的展開試劑，從而選擇毒性低、分離效果好的展開劑。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].第一部. 北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2] 竇啟玲,熊仕芳, 陳珊,等.一種千斤腎安寧藥物組合物及其制備方法和制劑：中國，201110265016[P]. 2012-01-04.

[3] 王艷.三七質(zhì)量評價方法研究[D].沈陽：沈陽藥科大學(xué)，2003.

(責(zé)任編輯：王尚勇)

2014-03-02

金曉敏(1985-)，女，廣州中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生， 研究方向?yàn)橹谐伤庂|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及質(zhì)量控制。

吳依娜(1965-)，女，廣州中醫(yī)藥大學(xué)教授，研究方向?yàn)橹兴幣湮榕c臨床應(yīng)用、中藥藥性理論及嶺南藥學(xué)。

R286.0

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1673-2197(2014)12-0037-02