褚奇星

參麥注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法的探討

褚奇星①

目的：考察參麥注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法的可行性，加強(qiáng)對參麥注射液的質(zhì)量監(jiān)控。方法：采用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，考察參麥注射液對鱟試劑的干擾試驗(yàn)，并檢測供試品細(xì)菌內(nèi)毒素的限度。結(jié)果：對樣品進(jìn)行1∶4稀釋，用0.125 EU/mL鱟試劑無干擾，與家兔熱源檢查法結(jié)果一致。結(jié)論：與家兔法檢查本品熱原相比，細(xì)菌內(nèi)毒素法可行性高，此方法避免了家兔熱源檢查法操作的復(fù)雜性，且靈敏度高、方便快捷。

鱟試劑； 參麥注射液； 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法

參麥注射液為紅參和麥冬提取有效成分制成的純中藥注射液制劑，其中主要成分人參皂苷，是紅參生理活性的物質(zhì)，還含有機(jī)酸、甾醇、酯類和維生素類等[1]。從保健功能上講，紅參具有大補(bǔ)元?dú)?、益血、抗氧化、抗衰老、增?qiáng)免疫力的作用。在藥用功能方面，可以祛濕、治療氣虛、體寒癥，如多汗、胃下垂、胸悶、心絞痛、冠心病、心血管等疾??；再如陽氣不足、冬季畏寒、老人早衰、婦女內(nèi)分泌紊亂等。麥冬的化學(xué)成分為甾體皂苷、異黃酮類、多糖、氨基酸等，具有抗心肌缺血、抗血栓形成、耐缺氧、抗衰老、降血糖等功效[2-4]。

參麥注射液具有益氣固脫，養(yǎng)陰生津，生脈的作用。臨床上用于治療氣陰兩虛型休克、冠心病、病毒性心肌炎、慢性肺心病、粒細(xì)胞減少癥。能提高腫瘤患者的免疫機(jī)能，與化療藥物合用時，有一定的增效作用，并能減少化療藥物所引起的毒副作用[5-6]。參麥注射液標(biāo)準(zhǔn)熱源檢查法為家兔法，但操作繁瑣，靈敏度低，對細(xì)菌內(nèi)毒素的含量不能準(zhǔn)確檢測。本文參照《中國藥典》2005版附錄動態(tài)比濁發(fā)建立參麥注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，以此法取代家兔法，用以檢測參麥注射液細(xì)菌內(nèi)毒素的限度，同時對其可行性分析并進(jìn)行相關(guān)研究[7-10]。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 動態(tài)濁度鱟試劑（湛江安度斯生物有限公司，標(biāo)示靈敏度0.125 EU/mL，批號130119，1.25 mL/支），細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（中國藥品生物制品檢定所，批號130209，5 mL/支）；細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（湛江安度斯生物有限公司，批號121227，100 EU/支）；參麥注射液（雅安三九藥業(yè)有限公司，批號121209，121217，130122；規(guī)格10 mL/支）BET-72細(xì)菌內(nèi)毒素測定儀（上海昨非實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司），QL-901渦旋混合器（北京恒奧生物科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)菌內(nèi)毒素限值（L）的確定 按照細(xì)菌內(nèi)毒素限值（L）公式L=K/M[1]，K為依照規(guī)定給藥途徑，每人每公斤每小時最大可接受的細(xì)菌內(nèi)毒素劑量，即致熱閾。2010版中國藥典規(guī)定我國內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品對人或家兔的致熱閾為5.0 EU/（kg·h），M為人每千克體重每小時給藥最大劑量（藥品致熱原檢查劑量），參麥注射液熱原檢查劑量為10 mL/kg。細(xì)菌內(nèi)毒素理論值（L）計(jì)算出為：L=0.5 EU/mL，本研究即采用0.5 EU/mL為細(xì)菌內(nèi)毒素?zé)嵩捶磻?yīng)閾值。

1.2.2 鱟試劑靈敏度復(fù)核 按照2010年版中國藥典附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的要求，進(jìn)行鱟試劑靈敏度的復(fù)核[3]。以細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水溶解稀釋細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品工作溶液，混合渦旋混合15 min，后以1∶2分別稀釋制備成以標(biāo)示靈敏度為中間值的稀釋液4份，每一步稀釋后均混合渦旋30 min。每一濃度平行4支。

1.2.3 樣品最大有效稀釋倍數(shù)（MVD） 最大有效稀釋倍數(shù)即在實(shí)驗(yàn)中供試品溶液被允許稀釋的最大倍數(shù)，在不超過此稀釋倍數(shù)的濃度下進(jìn)行內(nèi)毒素限值的檢測。依照公式MVD=cL/λ求算[2]，其中L即參麥注射液供試品細(xì)菌內(nèi)毒素限值，λ為鱟試劑標(biāo)示靈敏度，即最低內(nèi)毒素濃度，本動態(tài)比濁鱟試劑標(biāo)示靈敏度為0.125 EU/mL，參麥注射液的最大有效稀釋倍數(shù)根據(jù)L值即可求出為MVD=0.5/0.125=4。

1.2.4 干擾試驗(yàn) 按2010年版中國藥典附錄進(jìn)行干擾試驗(yàn)[3]。將參麥注射液（批號121209）制備成原液，1∶2，1∶4，1∶8，1∶16五個系列濃度，每個濃度分別取0.1 mL樣品進(jìn)行干擾試驗(yàn)檢查。分別制備兩只陰性對照管（細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水和供試品溶液），以1：T（T為稀釋倍數(shù)）稀釋倍數(shù)樣品分別對兩批鱟試劑作干擾試驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 鱟試劑靈敏度復(fù)核結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果為兩批鱟試劑反應(yīng)相同，靈敏度均為0.125 EU/mL。結(jié)果如表1，符合規(guī)定。

表1 鱟試劑靈敏度復(fù)核結(jié)果

2.2 參麥注射液干擾試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果見表2。

表2 參麥注射液干擾試驗(yàn)結(jié)果

2.3 樣品的動態(tài)比濁法鱉實(shí)驗(yàn)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果 本供試品以細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水1∶4稀釋，分別對其采用兩批鱟試劑檢測分析，結(jié)果如表3所示，所得結(jié)果一致。

表3 兩批樣品的細(xì)菌內(nèi)毒素鱟試劑檢測結(jié)果

2.4 家兔法熱原檢查 按2010年版中國藥典操作[3]，所測3批樣品的細(xì)菌內(nèi)毒素鱟試劑檢測結(jié)果均符合規(guī)定。

3 討論

對于中藥注射劑參麥注射液而言，考慮到其作為中草藥的成分復(fù)雜性，以及來源、工藝等相關(guān)原因，干擾因子的變化性不可避免，因此細(xì)菌內(nèi)毒素限值必須嚴(yán)格控制。課題研究中，將本供試品采用多倍稀釋的方法進(jìn)而提高實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性與可靠性。以細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水1∶4稀釋本供試品，結(jié)果表明，對標(biāo)示靈敏度為0.125 EU/mL的不同廠家鱟試劑均無明顯干擾作用，參麥注射液熱源的控制可用細(xì)菌內(nèi)毒素檢測法來進(jìn)行。以1∶4稀釋本品后，再以標(biāo)示靈敏度為0.125 EU/mL的鱟試劑用以檢測參麥注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素，所得結(jié)果與家兔法熱原檢查一致。

因此，以動態(tài)濁度法進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素測定可取代家兔法檢查參麥注射液熱原，且方法靈敏度高、準(zhǔn)確、快捷，在醫(yī)院臨床快速檢查熱原時，有參考應(yīng)用價值。

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Study on the Bacterial Endotoxins Test of Shenmai Injection

/Chu Qi-xing.//Medical Innovation of China，2014，11（08）：120-121

Objective：To investigate the feasibility of bacterial endotoxin test and enhance the quality control for Shenmai Injection.Method：The bacterial endotoxin inspection method was used for the interference test of Shenmai injection to limulus reagent and the LOQ of bacterial endotoxin was tested.Result：The 1：4 diluted sample was test with 0.125 EU/mL tachypleus amebocyte lysate. No interference was found and the result consistent with the rabbit test results.Conclusion：The bacterial endotoxin test is much more feasible， sensitive and fast than rabbit test method for the pyrogen test of Shenmai Injection.

Limulus lysate reagent； Shenmai Injection； Bacterial endotoxin test

10.3969/j.issn.1674-4985.2014.08.052

2014-01-03） （本文編輯：蔡元元）

①河南省平頂山市第一人民醫(yī)院 河南 平頂山 467000

褚奇星

First-author’s address：The First Peoples’Hospital of Pingdingshan City，Pingdingshan 467000 China