李 輝 徐秀玲 穆阿麗 （山東省青島市飼料獸藥檢測站 266071）

在生鮮乳中摻入硫氰酸鈉，可以抑菌、保鮮，延長生鮮乳的保存期，但是硫氰酸鈉在人體內(nèi)釋放的氰根離子能很快與細胞色素氧化酶中的三價鐵離子結(jié)合，抑制該酶活性，使組織不能利用氧，可引起重度中毒，少量的食入就會對人體造成極大傷害。2008年12月硫氰酸鈉被衛(wèi)生部列入第一批公布的《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑名單》中，被認為是可能違法添加的非食用物質(zhì)。

硫氰酸根檢測的常見方法有滴定法、光譜法、色譜法、電分析法和離子交換色譜法等。2009年衛(wèi)生部公布了基于離子色譜的硫氰酸根檢測方法是基于戴安公司離子色譜，其前處理采用乙腈沉淀牛奶中的蛋白，離心后稀釋上清液進行測定，色譜條件采用梯度洗脫。

本文研究了采用等度洗脫的離子色譜儀器檢測，對生鮮乳中硫氰酸根檢測方法進行了優(yōu)化調(diào)整。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑 瑞士萬通850型離子色譜儀(配電導(dǎo)檢測器、858自動進樣器)；固相萃取小柱：Supelclean LC-18 SPE Tubes；硫氰化鉀標準品(純度≥98.5%)。

1.2 標準溶液的配制 準確稱取于80℃烘箱內(nèi)烘干2h的硫氰化鉀1.6986g于1000ml容量瓶中，定容，混勻，得1000mg/L硫氰酸標準儲備液。取硫氰酸標準儲備溶液1ml，置于100ml容量瓶中，加水至刻度，此溶液含硫氰酸10mg/L。移取0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0ml硫氰酸標準中間液，用水定容至10ml，濃度分別為0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0mg/L。

1.3 色譜條件 色譜柱Metrosep A Supp 5-250/4.0mm、檢測器電導(dǎo)檢測器、淋洗液3.2mmol/L Na2CO3+1.0mmol/L NaHCO3+7.5%Acetone、流速0.7ml/min、柱溫30℃、進樣體積20μl。

1.4 樣品前處理 準確量取液態(tài)奶樣品4ml，加入5ml色譜純丙酮，渦旋混勻，10000r/min離心3min，取上清液用超純水稀釋2倍，過經(jīng)5ml甲醇和10ml水活化的LC-18小柱除去樣品中的脂肪，然后上機進行樣品檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品色譜圖 圖1為硫氰酸根標準品圖譜，可見保留時間在19min左右。圖2中自上而下，圖譜1、2、3依次是牛奶樣品經(jīng)過丙酮、乙腈和5%乙酸沉淀蛋白后的測試圖，經(jīng)過丙酮沉淀蛋白后的樣品干擾更少，檢測結(jié)果更為理想。

2.2 線性范圍和檢出限 在上述色譜條件下，以測定標準系列溶液的濃度(mg/L)為橫坐標，硫氰酸色譜峰面積(μS×min)為縱坐標，繪制標準曲線，見圖3。

回歸方程為A=4.75726E-3×Q-2.72040 E-3，R=0.999869，硫氰酸離子色譜具有良好響應(yīng)值，峰面積與標準系列濃度呈良好的線性關(guān)系，線性范圍0.1～5.0mg/L。以3倍信噪比計算求得儀器檢出限為0.082mg/L。

2.3 方法的選擇 衛(wèi)生部推薦的“離子色譜法測定牛奶中硫氰酸根”方法前處理采用乙腈沉淀牛奶中的蛋白，然后稀釋樣品進行測定，色譜條件采用梯度洗脫。該方法前處理過程簡單，但色譜條件采用梯度洗脫，離子色譜儀必須具備梯度洗脫功能才能實現(xiàn)；且在測定凍融過的生鮮乳樣品時，容易出現(xiàn)上清液與沉淀分離不徹底的問題，上清液渾濁、雜質(zhì)較多，容易堵塞小柱，增加了實驗成本，浪費人力物力，尤其不利于對大批量生鮮乳樣品的監(jiān)督檢測。

通過查閱文獻，比較了乙酸溶液、乙腈和丙酮沉淀蛋白，選擇用丙酮沉淀蛋白，凈化更為充分，其溶液組成與所使用的淋洗液組成成分更相近，更利于硫氰酸根的檢測，試驗結(jié)果比較理想。另外采用等度洗脫，拓寬了離子色譜儀的選擇范圍。

圖1 硫氰酸根標準品圖譜

圖2 不同方法蛋白色譜圖對比

圖3 標準曲線

2.4 方法回收率和精密度 取一份經(jīng)凍融后的生鮮乳樣品作為空白對照，分別取該樣品添加10mg/L硫氰酸標準中間液40、400、1000μl，以3種濃度做加標回收率實驗，每個濃度重復(fù)5次，結(jié)果見表1。

表1 樣品加標回收率(n=5) (mg/L、%)

另取6份生鮮乳平行樣，采用本方法進行精密度試驗，結(jié)果見表2。

表2 精密度試驗(n=6) (mg/L、%)

3 結(jié)論

本試驗前處理簡單，采用丙酮沉淀蛋白，凈化充分，沉淀與上清分離徹底，其溶液組成與所使用的淋洗液組成成分更接近，有利于硫氰酸根的檢測。方法檢出限低，分離效果較好，準確性高，對質(zhì)檢部門開展生鮮乳中硫氰酸根殘留監(jiān)督檢查、打擊非法添加行為具有現(xiàn)實參考價值。

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