王 磊 王天杰 董媛媛 張俊利 李玉賢

（河南中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，河南 鄭州 450046）

澤漆中總黃酮超聲提取工藝優(yōu)化研究

王 磊 王天杰 董媛媛 張俊利 李玉賢

（河南中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，河南 鄭州 450046）

目的 研究澤漆總黃酮超聲提取法的最佳提取工藝，在此基礎(chǔ)上采用分光光度法測(cè)定不同部位總黃酮的含量。方法 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)尋找超聲提取法提取澤漆總黃酮的最佳工藝條件，以蘆丁為考察指標(biāo)，通過(guò)分光光度法對(duì)澤漆不同部位總黃酮含量進(jìn)行精密測(cè)定。結(jié)果乙醇濃度50%，物料比1∶25，超聲提取時(shí)間20 min，超聲提取溫度60 ℃為最佳提取工藝。澤漆葉中總黃酮含量最高，根次之，莖最低。結(jié)論 優(yōu)選的澤漆總黃酮提取工藝方法，簡(jiǎn)便易行，快速靈敏，實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

澤漆；總黃酮；含量；分光光度法；提取工藝

澤漆是一味產(chǎn)地廣泛的大戟科大戟屬一年生或兩年生的全草本植物澤漆的干燥全草。別名貓眼兒草，五燈頭，五朵云，一把傘，九頭獅子草，燈臺(tái)草，奶漿草等。主要生于山坡，荒野，田邊及河岸邊，分布于除新疆西藏以外的全國(guó)各地。藥物資源較為豐富。澤漆始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，作為一種以全草入藥的民間常用藥物。據(jù)《中藥大辭典》記載，其性微寒。味辛，苦，有小毒。入肺、大腸、小腸、脾經(jīng)。具有利水消腫，消痰退熱，散結(jié)，殺蟲(chóng)，止癢，解毒等功效。澤漆主要化學(xué)成分含有二萜酯類，黃酮類，酚酸類，甾醇類，氨基酸及天然油脂等物質(zhì)，并含有多種以槲皮素為苷元的黃酮苷[1-8]。黃酮類化合物是廣泛存在于植物界的一大類化合物，有抗氧化，抗衰老，清除體內(nèi)自由基及增加機(jī)體免疫力，降血脂，降血壓，抑制血小板聚集及血栓形成的作用[9-10]。超聲提取法提取黃酮類物質(zhì)是目前比較科學(xué)有效的方法[11]。其原理是利用超聲波在液體中產(chǎn)生“空穴作用”，而該產(chǎn)生的沖擊波和射流可以有效破壞植物細(xì)胞和細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，從而提高細(xì)胞內(nèi)容物通過(guò)細(xì)胞膜的穿透能力，一定程度上有助于黃酮類化合物的釋放與溶出，而且超聲波使提取液不斷振蕩，有助于溶質(zhì)擴(kuò)散，同時(shí)超聲波的熱效應(yīng)對(duì)原料有水浴作用。

1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器：KQ-100E型超聲波清洗器，721型可見(jiàn)分光光度計(jì)，F(xiàn)W80型高速萬(wàn)能粉碎機(jī)，DZKW-D型星宇電熱恒溫水浴鍋，101-1型電熱恒溫干燥箱，微量分析天平（北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司），HZ-D循環(huán)水式真空泵，標(biāo)準(zhǔn)配套磨口玻璃儀器。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑：澤漆樣品于2012年5月采自河南（樣品經(jīng)風(fēng)干，粉碎，保存在塑料袋中備用），蘆丁對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品鑒定所），氫氧化鈉，亞硝酸鈉，硝酸鋁，乙醇等實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 黃酮的定性鑒別：依次做了紫外光下顯色反應(yīng)，濃氨水反應(yīng)，三氯化鋁反應(yīng)，乙酸鎂反應(yīng)，鹽酸-鎂粉反應(yīng)均顯陽(yáng)性反應(yīng)，可得出澤漆提取物中含有黃酮。

2.2 蘆丁對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制[12]：①對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：精密稱量120 ℃干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品12.8 mg，置于50 mL干燥燒杯中，用60%乙醇溶液溶解，冷卻至室溫，并定容至100 mL的容量瓶中，振蕩均勻，則配制得到濃度為0.0128 mg/mL的蘆丁對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用。②吸收波長(zhǎng)的確定：準(zhǔn)確量取蘆丁對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00 mL置于10 mL容量瓶中，加入60%乙醇溶液4 mL，加入5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL，放置5 min后，加入10%硝酸鋁溶液0.3 mL，放置5 min后，加入1 mol/L氫氧化鈉溶液4 mL，再用60%乙醇溶液定容。放置10 min后在400～600 nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度，確定最大吸收波長(zhǎng)為510 nm。③蘆丁對(duì)照品溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密量取蘆丁對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液0、1、2、3、4、5 mL，分別置于六支10 mL容量瓶中，依次加入60%乙醇溶液5、4、3、2、1、0mL，各加入5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL，搖蕩均勻，放置5 min后，各分別加入10%硝酸鋁溶液0.3 mL，搖蕩均勻，放置5 min后，各分別加入1 mol/L氫氧化鈉溶液4 mL，搖蕩均勻，最后用60%乙醇溶液定容。靜置10 min后于510 nm處測(cè)量吸光度，試劑1為空白參照液，以蘆丁對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（mg/mL），吸光度為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸分析，繪制蘆丁對(duì)照品溶液濃度與吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線.說(shuō)明蘆丁對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與吸光度之間有良好的線性關(guān)系。

2.3 澤漆總黃酮超聲提取正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)：澤漆總黃酮的提取，受多種因素的影響，每個(gè)因素包含著不同的水平，為了尋求最優(yōu)化的提取條件，就必需對(duì)各種因素及各因素的不同水平進(jìn)行試驗(yàn)，通過(guò)分析，確定各因素的最好水平和主要因素，以找出最佳工藝方案。

①因素水平表：本研究的因素為乙醇濃度（A），提取時(shí)間（B），物料比（C），提取溫度（D）試驗(yàn)因素設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。②正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表L16(44)及試驗(yàn)結(jié)果：本實(shí)驗(yàn)按正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表L16(44)進(jìn)行試驗(yàn)，以吸光度值為考察指標(biāo)進(jìn)行提取優(yōu)化試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表2。由實(shí)驗(yàn)得：四因素對(duì)澤漆超聲提取所得總黃酮含量的影響大小依次為：乙醇濃度（A），物料比（C），提取溫度（D），提取時(shí)間（B）。最佳提取工藝組合為A4B1C3D4，即提取澤漆總黃酮的最佳提取工藝條件：乙醇溶液濃度60%，物料比1∶25，提取時(shí)間20 min，提取溫度60 ℃。③正交試驗(yàn)方差分析：由方差分析結(jié)果見(jiàn)表3，得出：A是主要因素，C和D是重要因素，B影響不大，所以選取最短提取時(shí)間20 min。

3 討 論

澤漆總黃酮的提取實(shí)驗(yàn)中，一定范圍內(nèi)隨溫度的升高澤漆總黃酮的提取率增大。溫度過(guò)高可能會(huì)導(dǎo)致黃酮類化合物結(jié)構(gòu)被氧化而被破壞，導(dǎo)致其提取率下降。溫度過(guò)低，對(duì)黃酮類化合物有一定的保護(hù)作用，但其提取不徹底，提取率低。

在優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)隨著乙醇濃度的升高，提取液中會(huì)有白色絮狀物的出現(xiàn)，對(duì)吸光度有一定的貢獻(xiàn)，也就使得真正有黃酮類化合物引起的顏色變化較小，所以乙醇提取澤漆中總黃酮時(shí)，乙醇濃度逐漸升高，黃酮類化合物的溶解度也增大，之后呈現(xiàn)下降趨勢(shì)可能是隨著乙醇濃度的增大，一些醇溶性雜質(zhì)，色素，親脂性強(qiáng)的等成分溶出量增大，這些成分與黃酮類化合物競(jìng)爭(zhēng)同乙醇-水分子結(jié)合，從而使黃酮類化合物的提取率下降。

在進(jìn)行藥材提取時(shí)，一般情況下溶劑用量與提取量呈現(xiàn)正相關(guān)，但過(guò)大的物料比會(huì)造成溶劑和能源的浪費(fèi)，并給后續(xù)工作帶來(lái)麻煩。所以一個(gè)科學(xué)，合理，高效的物料比對(duì)于藥材的提取十分重要。

表1 試驗(yàn)因素水平表

表2 澤漆超聲提取工藝的正交試驗(yàn)表

表3 正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方差分析表

[1] 蔡鷹,王晶.澤漆根體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)研究[J].中藥,1999,22(2):85-87.

[2] 蔡鷹,陸瑜.澤漆根體內(nèi)抗腫瘤作用研究[J].中藥材,1999,22(11):579-582.

[3] 高志良.大劑量澤漆為主治療早期肝瘤[J].江蘇中醫(yī),1997,18(2):28.

[4] 國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華草本》編委會(huì).中華本草[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1998.

[5] 胡小華,李國(guó)強(qiáng).澤漆研究進(jìn)展[J].新疆中醫(yī)藥,2008,26(2):80-81.

[6] 何江波,劉月明.澤漆的化學(xué)成分研究[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā), 2010,22(5):731-735.

[7] 龐維榮,杜晨暉.澤漆化學(xué)成分[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,17 (20):118-121.

[8] 楊莉,陳海霞.澤漆化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].中草藥,2007, 38(10):1586-1589.

[9] 曹緯國(guó),劉志勤.黃酮類化合物藥理作用的研究進(jìn)展[J].西北植物學(xué)報(bào),2003,23(12):2241-2247.

[10] 劉仲則.中草藥黃酮類化合物心血管活性成分概述[J].中草藥, 2005,18(3):37.

[11] 鄔方寧.超聲提取技術(shù)在現(xiàn)代中藥中的應(yīng)用[J].中草藥,2007,39 (2):315-316.

[12] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].北京:北京化學(xué)工業(yè)出版社,2005:246-247.

R282.710.2

：B

1671-8194（2014）33-0062-02

河南中醫(yī)學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新學(xué)習(xí)項(xiàng)目（YXCX【2012】5；CXXM【2012】04）