蘇傳偉

(深圳市觀瀾人民醫(yī)院普外科,廣東 深圳 518000)

直腸癌是消化道常見的惡性腫瘤之一，盡管隨著先進(jìn)手術(shù)器械在臨床上的廣泛應(yīng)用以及外科手術(shù)經(jīng)驗(yàn)的不斷積累，直腸癌術(shù)后生存率明顯提高，但直腸癌往往早期臨床癥狀體征不明顯，起病隱匿，患者就診時(shí)往往已處于疾病的中晚期。而目前臨床上用于直腸癌診斷和預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志物都十分有限[1]。因此，尋找相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)志物是目前研究的熱點(diǎn)[2]。本研究旨在探討中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL)在直腸癌組織中的表達(dá)及血清中NGAL和癌坯抗原(Carcinoembryonic antigen，CEA)水平，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集深圳市觀瀾人民醫(yī)院2007年12月至2009年12月間收治的直腸癌患者45例，其中男22例，女23例，年齡38～79(58.6±7.1)歲；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例，未轉(zhuǎn)移19例；高中分化者20例，低分化者25例；按照Dukes分期分A、B、C、D四期，其中(A+B)期18例，(C+D)期27例；浸潤深度：突破肌層25例，未突破肌層20例；腫瘤的大小：<5 cm 19例，≥5 cm 26例。選取同期收治的30例直腸息肉患者進(jìn)行對(duì)照。其中男16例，女14例；年齡34～65(57.9±7.5)歲；直腸癌組和直腸良性腫瘤組在年齡、性別方面比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。所有患者術(shù)前均未進(jìn)行過化療與放射治療，術(shù)后所有患者定期進(jìn)行門診復(fù)查。隨訪工作截止于2012年11月。所有患者均具有完備的隨訪資料。

1.2方法 所有患者術(shù)前進(jìn)行血清NGAL和CEA水平測(cè)定，CEA檢測(cè)采用電化學(xué)發(fā)光法，嚴(yán)格按照羅氏公司提供的試劑盒操作說明進(jìn)行。CEA參考值為0～5 μg/L，血清NGAL水平采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫分析進(jìn)行檢測(cè)。術(shù)后組織切片標(biāo)本采用鏈酶卵白素-生物素過氧化物酶法(SP法)測(cè)定NGAL的表達(dá)，兔抗人NGAL單克隆抗體均來自美國SANTA CRUZ公司，SP9001試劑盒和二氨基聯(lián)苯胺試劑盒均來自北京中杉生物工程公司。嚴(yán)格按照明書步驟進(jìn)行操作。

1.3結(jié)果判定及觀察指標(biāo) NGAL在細(xì)胞質(zhì)中呈現(xiàn)棕黃色染色顆粒為陽性細(xì)胞。光學(xué)顯微鏡下，計(jì)算出每10個(gè)高倍視野(×400)中染色為陽性的腫瘤細(xì)胞百分率，顯色細(xì)胞數(shù)(染色陽性百分比)在20%以上即為陽性表達(dá)作為統(tǒng)計(jì)分析的標(biāo)準(zhǔn)[3]。通過測(cè)定組織中NGAL表達(dá)的陽性率及術(shù)前血清NGAL和CEA水平，探討三者與臨床病理因素、年齡、性別、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度、腫瘤大小、分化程度、臨床分期、脈管侵犯的關(guān)系。

2 結(jié) 果

2.1直腸癌組和直腸良性腫瘤組組織NGAL的表達(dá)及血清NGAL和CEA水平的比較 NGAL的表達(dá)主要定位于細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，呈棕黃色或棕褐色，直腸癌的陽性表達(dá)率為84.44%(38/45)，直腸良性腫瘤的陽性表達(dá)率為33.3%(10/30)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。術(shù)前兩組血清NGAL和CEA水平進(jìn)行比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1)。

表1 直腸癌組和直腸良性腫瘤組組織NGAL的表達(dá)及血清NGAL和CEA的水平的比較

2.245例直腸癌組織NGAL的表達(dá)及術(shù)前血清NGAL和CEA的水平與直腸癌臨床病理因素的關(guān)系 直腸癌組織NGAL異常表達(dá)及術(shù)前血清NGAL和CEA的高水平與直腸癌腫有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度、腫瘤的大小、分化程度、臨床分期、脈管侵犯等臨床病理因素有關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與年齡、性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表2)。

2.3復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組與無復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組血清NGAL和CEA水平的比較 對(duì)45例直腸癌患者跟蹤隨訪3年，根據(jù)術(shù)后患者有無復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移分為兩組，其中有復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者14例，無復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者31例，兩組血清NGAL和CEA的水平進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表3)。

表2 NGAL的表達(dá)及術(shù)前血清中NGAL和CEA的水平與直腸癌臨床病理因素的關(guān)系

表3 復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組與無復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組血清中NGAL和CEA水平的比較

3 討 論

NGAL在人中性粒細(xì)胞內(nèi)于1993年首先被發(fā)現(xiàn)，是Lipocalin家族的一個(gè)新成員，存在于中性粒細(xì)胞中的過氧化物酶陰性顆粒中，定位于人染色體9q34上，包括7個(gè)外顯子和6個(gè)內(nèi)含子，由N端的310-螺旋，C端的α-螺旋和中間的8段反平行的β-折疊所構(gòu)成，研究表明，NGAL與胚胎發(fā)育、炎癥、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、趨化作用及腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移關(guān)系密切[4-5]。

CEA是一種糖蛋白，相對(duì)分子質(zhì)量為180×103，具有使腫瘤細(xì)胞逃避免疫攻擊的作用。CEA在結(jié)直腸癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌患者均升高，目前血清CEA檢測(cè)主要用于早期診斷、輔助判斷預(yù)后及治療效果和監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的指標(biāo)，研究表明，血清CEA檢測(cè)值是發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)的理想指標(biāo)，作為一種無創(chuàng)性檢查方法其敏感性高于X線和結(jié)直腸鏡[6-7]。

本研究結(jié)果顯示，直腸癌的陽性表達(dá)率顯著高于直腸良性腫瘤，直腸癌組織NGAL的表達(dá)及術(shù)前血清NGAL和CEA水平與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度、腫瘤的大小、分化程度、臨床分期、脈管侵犯有關(guān)(P<0.05)；提示NGAL和CEA水平的高低與腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性相關(guān)。對(duì)直腸癌病情評(píng)估具有一定的指導(dǎo)意義。本研究進(jìn)一步研究顯示，有轉(zhuǎn)移患者血清NGAL和CEA的水平顯著高于無復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者，提示聯(lián)合檢測(cè)NGAL和CEA的水平可以作為直腸癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、判斷預(yù)后的指標(biāo)。與相關(guān)研究結(jié)果一致[8-10]。

綜上所述，聯(lián)合檢測(cè)NGAL和CEA水平用于直腸癌篩查診斷和預(yù)后評(píng)價(jià)，具有重要的臨床應(yīng)用前景，可以為直腸癌的診治制訂更加積極、合理、有效的治療方案提供理論依據(jù)，還可以作為評(píng)估直腸癌的生物學(xué)行為、判斷預(yù)后的重要指標(biāo)之一，但有關(guān)的作用機(jī)制還有待做進(jìn)一步的深入研究。

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