孟祥麗，趙玉佳，徐艷敏

(1.牡丹江醫(yī)學(xué)院 紅旗醫(yī)院,黑龍江 牡丹江 157011； 2.牡丹江醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院,黑龍江 牡丹江 157011)

烏腺金絲桃(HypericumattenuatumChoisy.)，別名趕山鞭、小金絲桃、小旱蓮，為多年生草本，屬藤黃科金絲桃屬(HypericumL.)植物。烏腺金絲桃，為民間常用中草藥，味苦，性平，有止血、鎮(zhèn)痛、通乳作用，主治咯血、吐血、子宮出血、風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、神經(jīng)痛、乳汁缺乏、乳腺炎等；外用治創(chuàng)傷出血、癰癤腫毒[1]。已有文獻(xiàn)報(bào)道從烏腺金絲桃中分離出槲皮素(quercetin)、異槲皮苷(isoquercitrin)、槲皮苷(quercitrin)及金絲桃苷(hyperin)[2]等黃酮類成分。黃酮類化合物不僅有平喘、止咳、祛痰、鎮(zhèn)痛、降壓、抗過(guò)敏等作用[3]，也具有抗抑郁、抗腫瘤及抗艾滋病的作用[4]。本文采用比色法測(cè)定了黑龍江省3個(gè)產(chǎn)地烏腺金絲桃不同物候期地上全草的總黃酮含量。考察烏腺金絲桃不同生境、不同采收期對(duì)總黃酮含量的影響。以總黃酮為技術(shù)指標(biāo)篩選烏腺金絲桃藥材的采收期，確定黃酮含量最高的產(chǎn)地。對(duì)烏腺金絲桃的開發(fā)利用提供指導(dǎo)。

1 實(shí)驗(yàn)材料、儀器與試劑

1.1實(shí)驗(yàn)材料烏腺金絲桃分別于花期、果期、果熟期，采于佳木斯市猴石山、七臺(tái)河市勃利縣通天一林場(chǎng)、鶴崗市蘿北縣廿里河林場(chǎng)。憑證標(biāo)本存于佳木斯大學(xué)藥學(xué)院藥用植物及生藥學(xué)標(biāo)本陳列室。

1.2實(shí)驗(yàn)儀器FA2004電子分析天平(上海恒平科學(xué)儀器有限公司)；KQ5200超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)。

1.3試劑所用試劑均為分析純。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)食品藥品檢定研究院)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

將不同產(chǎn)地、不同時(shí)期的烏腺金絲桃地上全草分別粉碎成粗粉。采用比色法測(cè)定總黃酮的含量。

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

2.2穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取蘆丁95%乙醇溶液(濃度0.234 mg/mL)2 mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下操作，加入顯色劑后，每隔10 min測(cè)定其吸收度，試驗(yàn)表明：比色液在1小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。(RSD%=0.19%)

2.3精密度試驗(yàn)精密吸取蘆丁95%乙醇溶液(濃度0.234 mg/mL)2 mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下操作，加入顯色劑后，連續(xù)測(cè)定 5次，結(jié)果 RSD為0.627%，表明精密度良好。

2.4樣品測(cè)定準(zhǔn)確稱量0.2 g樣品粗粉(每樣稱3份)，石油醚冷浸過(guò)夜，索氏提取器提取至無(wú)色，藥渣陰干后， 95%乙醇超聲提取20 min/次，每次15 mL共3次，合并濾液移至50 mL容量瓶，定容，搖勻后，從中吸取適量(使A值在0.2～0.8之間)溶液至25 mL容量瓶，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下操作顯色后，于波長(zhǎng)504 nm處測(cè)定吸收度，并按回歸方程計(jì)算含量。

分別精密稱取同批樣品6份，上述方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果RSD為2.03%，重復(fù)性良好。

2.5回收率試驗(yàn)精稱烏腺金絲桃樣品(猴石山產(chǎn)，果期)約1g共3份，分別向其中加入蘆丁對(duì)照品10 mg，按樣品測(cè)定方法進(jìn)行提取、測(cè)定，按回歸方程計(jì)算蘆丁含量，并計(jì)算百分回收率，平均回收率為98.32%，RSD%為1.09%(n=3)。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

烏腺金絲桃中總黃酮在花盛期含量最高；不同產(chǎn)地中以勃利縣總黃酮含量最高。見表1、圖1：

表1 烏腺金絲桃地上全草黃酮成分含量

圖1 烏腺金絲桃不同產(chǎn)地、不同物候期總黃酮含量圖

4 結(jié)論與討論

對(duì)不同產(chǎn)地、不同物候期烏腺金絲桃總黃酮的測(cè)定得知：總黃酮在花盛期含量最高，在果熟期含量最低；相對(duì)來(lái)說(shuō)，勃利縣通天一林場(chǎng)采收的藥材總黃酮含量最高。因此：以總黃酮為技術(shù)指標(biāo)篩選烏腺金絲桃藥材的產(chǎn)地、采收期，最好在花盛期(7月末至8月中旬)采收，以勃利縣通天一林場(chǎng)含量最高。

金絲桃屬植物具有復(fù)雜多樣的化學(xué)成分，國(guó)內(nèi)外對(duì)其化學(xué)成分及藥理方面的研究很多。其中研究最多的是苯并二蒽酮化合物(Naphthodianthrones)包括金絲桃素(Hyperein)、 偽金絲桃素(Pseudohypericin)和黃酮類。本文選擇總黃酮作為篩選其用藥部位和采收期的技術(shù)指標(biāo)。比較了不同入藥部位、不同采收季節(jié)對(duì)活性成分的影響，進(jìn)一步規(guī)范了烏腺金絲桃藥材的藥用部位采收季節(jié)，得到一種適用于烏腺金絲桃藥材的采收方法，對(duì)烏腺金絲桃的開發(fā)具有指導(dǎo)意義。

參考文獻(xiàn)：

[1] 朱有昌.東北藥用植物[M].哈爾濱：黑龍江科學(xué)技術(shù)出版社,1989:743-747.

[2] Makovets’ka OI. Biologically active substances isolated from Hypericum attenuatum Choisy[J]. Ukr Biokhim Zh 2000,72(3):110-113.

[3] 潘映紅.國(guó)產(chǎn)金絲桃屬有效成分研究概況.中藥材[J].1993，16(8)：40-42.

[4] Weber N D.The antiviral agent hypericin hasinvitroactivity against HSV-1 through nonspecific association with viral and cell armebranes[J].Antiviral Chemistry and Chemotherapy,1994,5:90183-90204.