劉洋洋，楊 云，林 波，黃俊卿

(1.中國醫(yī)學科學院&北京協(xié)和醫(yī)學院 藥用植物研究所海南分所 海南省南藥資源保護與開發(fā)重點實驗室，海南 萬寧 571533；2.中國醫(yī)學科學院&北京協(xié)和醫(yī)學院 藥用植物研究所，北京 100193)

沉香是瑞香科沉香屬植物白木香[Aquilariasinensis(Lour.) Spreng]含有樹脂的木材，具有行氣止痛、溫中止嘔、納氣平喘的功效[1]，臨床使用廣泛，是傳統(tǒng)名貴中藥。近年來，大量研究表明沉香倍半萜和2-(2-苯乙基)色酮類化合物是沉香的主要成分，從沉香中已分離鑒定了63個2-(2-苯乙基)色酮類化合物[2-3]。除沉香外，迄今僅從禾本科白茅(Imperatacylindrica)[4]、白羊草(Bothriochloaischaemum)[5]和葫蘆科甜瓜(CucumismeloL.var.reticulatus)[6]中分離得到過2-(2-苯乙基)色酮類化合物，該類化合物具有不同程度的抗過敏和神經(jīng)保護等活性[4]，是沉香品質(zhì)評價的重要指標性成分[7-8]。

戚樹源等[9]建立了測定6,7-二甲基-2-(2-苯乙基)色酮和6-甲氧基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮含量的HPLC方法，并分析了白木香感染黃綠墨耳菌(Menanotusflavovirens)3 d后2個2-(2-苯乙基)色酮化合物的含量變化。何夢玲等[10]建立了測定6,7-二甲氧基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮、6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮、6-甲氧基-2-[2-(3′-甲氧基)苯乙基]色酮類和6-甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮等4種2-(2-苯乙基)色酮類化合物含量的LC-MS方法，并對黃綠墨耳菌提取液誘導的白木香根懸浮培養(yǎng)細胞中2-(2-苯乙基)色酮類化合物含量進行分析。陳亞等[11]建立了測定沉香藥材中6-羥基-2-[2-(4′-甲氧基苯乙基)]色酮和6-羥基-2-(2-苯乙基)色酮含量的HPLC方法，并對3批沉香樣品進行分析。Okudera等[12]建立了測定沉香藥材中AH3、AH4、AH5、AH6等4個2-(2-苯乙基)色酮類化合物含量的HPLC方法。

2-(2-苯乙基)色酮類化合物是沉香在形成過程中產(chǎn)生的一類化合物[13]，且其含量在不同品質(zhì)等級的沉香藥材中存在差異[7-8]?，F(xiàn)有報道[9-12]關(guān)于沉香藥材中2-(2-苯乙基)色酮類化合物含量測定的方法都是針對某個或數(shù)個2-(2-苯乙基)色酮類化合物建立的，難以測定或比較不同沉香藥材中2-(2-苯乙基)色酮類化合物的總含量。而目前關(guān)于沉香藥材中2-(2-苯乙基)色酮類化合物總含量的測定方法尚未見報道。因此，作者建立了一種測定沉香中2-(2-苯乙基)色酮類化合物總含量的紫外分光光度法，并將其應用于沉香藥材的品質(zhì)評價。

1 實驗

1.1 材料

沉香樣品的特征及來源信息見表1。其中野生沉香藥材于2012年4月購于海南省沉香國際博覽會，經(jīng)中國醫(yī)學科學院藥用植物研究所魏建和研究員鑒定為瑞香科植物白木香[Aquilariasinensis(Lour.) Spreng]含有樹脂的木材。憑證樣本保存于中國醫(yī)學科學院藥用植物研究所海南分所南藥化學實驗室沉香標本庫。

表1 沉香樣品信息表

1.2 試劑與儀器

6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮(含量>99%),自制；甲醇、石油醚(30～60 ℃)、乙醚均為國產(chǎn)分析純。

UV-2550型紫外分光光度計，日本島津公司；AR1140/C型電子天平，美國奧豪斯公司；SK8200H6型超聲波提取器，上?？茖С晝x器有限公司；HH-6型水浴鍋，常州國華電器有限公司；N-1100型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，日本東京理化器械株式會社。

1.3 方法

1.3.1 溶液的制備

對照品溶液：精密稱取6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮1.5240 mg，用甲醇溶解，定容至100 mL，即得2-(2-苯乙基)色酮類化合物對照品溶液。

供試品溶液：沉香藥材粉碎過4號篩，取沉香粉末20 mg，精密稱定，置索氏提取器中。加入70 mL石油醚，置于65 ℃水浴中回流提取3 h除去色素；再加入100 mL乙醚于50 ℃水浴中回流提取6 h?；厥杖軇瑵饪s物用甲醇溶解并定容至10 mL，即得供試品溶液。

1.3.2 測定波長的選擇

采用紫外分光光度計在200～400 nm范圍內(nèi)分別對2-(2-苯乙基)色酮類化合物對照品溶液和供試品溶液進行全波長掃描，選擇適宜的測定波長。

1.3.3 線性關(guān)系考察

精密稱取一定量6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮，加甲醇溶解并稀釋成質(zhì)量濃度(mg·L-1)為1.5625、3.125、6.250、9.375、12.500、15.625的溶液。以甲醇為空白，采用紫外分光光度計于230 nm處測定各溶液的吸光值，考察線性關(guān)系。

1.3.4 方法學考察

1)精密稱取沉香藥材E粉末樣品6份制成供試品溶液，編號1#～6#。平行測定，考察方法的重復性。

2)取1#供試品溶液，于230 nm處連續(xù)測定6次，考察方法的精密度。

3)取1#供試品溶液，于230 nm處測定吸光值，每隔30 min測定1次，連續(xù)測定11次，考察樣品的穩(wěn)定性。

1.4 回收率實驗

分別取1 mL上述1#～6#供試品溶液，各加入1 mL對照品溶液(0.0152 mg·mL-1)，測定吸光值，計算回收率。

1.5 樣品測定

取不同沉香藥材粉末樣品約20 mg，精密稱定，制成供試品溶液，測定吸光值，根據(jù)回歸方程計算不同沉香藥材中2-(2-苯乙基)色酮類化合物總含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 測定波長

2-(2-苯乙基)色酮類化合物對照品溶液和供試品溶液的紫外掃描光譜見圖1。

由圖1可知，2-(2-苯乙基)色酮類化合物對照品溶液和供試品溶液在230 nm附近均有較強吸收。因此，可將230 nm作為沉香藥材中2-(2-苯乙基)色酮類化合物紫外分光光度法的測定波長。

2.2 線性關(guān)系

以6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮溶液的質(zhì)量濃度(y)為橫坐標、吸光值(x)為縱坐標作圖，擬合線性回歸方程為：y=0.096x+0.043(R=0.9984，n=6)。表明，6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮溶液在1.5625～15.625 mg·L-1范圍內(nèi)，其吸光值與質(zhì)量濃度具有良好的線性關(guān)系。

圖1 2-(2-苯乙基)色酮類化合物對照品溶液(a)和供試品溶液(b)的紫外掃描光譜Fig.1 UV Spectra of 2-(2-phenylethyl) chromones reference solution(a) and sample solution(b)

2.3 重復性

實驗發(fā)現(xiàn)，2-(2-苯乙基)色酮類化合物在1#～6#樣品中的質(zhì)量分數(shù)分別為1.55%、1.58%、1.63%、1.55%、1.61%和1.60%，平均值為1.59%，RSD為2.06%，表明方法的重復性良好。

2.4 精密度

精密度實驗發(fā)現(xiàn)，連續(xù)測定6次的吸光值RSD為0.53%，表明方法精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性

穩(wěn)定性實驗發(fā)現(xiàn)，連續(xù)測定11次的RSD值為1.08 %，表明樣品在5 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 回收率實驗結(jié)果(表2)

表2 加樣回收率測定結(jié)果(n=6)

2.7 樣品測定結(jié)果(表3)

由表3可知，編號為E、D、C的野生沉香藥材(品質(zhì)等級分別為一級、二級、三級)中2-(2-苯乙基)色酮類化合物的總含量分別為1.59%、1.30%和0.98%，2-(2-苯乙基)色酮類化合物的總含量高低與其品質(zhì)等級順序相同；編號為F的“通體香”沉香藥材中2-(2-苯乙基)色酮類化合物的總含量為2.73%，高于一級野生沉香藥材；編號為A采用“火烙法”在白木香樹上生產(chǎn)的沉香藥材中2-(2-苯乙基)色酮類化合物的總含量為1.12%，介于二級和三級野生沉香藥材之間；編號為B采用“接菌法”在白木香樹上生產(chǎn)的沉香藥材中2-(2-苯乙基)色酮類化合物的總含量為0.83%，低于三級野生沉香藥材。表明，采用“通體結(jié)香技術(shù)”在白木香樹上生產(chǎn)的沉香藥材品質(zhì)高于一級野生沉香藥材，遠高于采用“接菌法”和“火烙法”在白木香樹上生產(chǎn)的沉香藥材。

表3 不同沉香藥材中2-(2-苯乙基)色酮類化合物 總含量的測定結(jié)果(n=3)

2.8 討論

2-(2-苯乙基)色酮類化合物都具有2-(2-苯乙基)色酮母核結(jié)構(gòu)，作者前期對沉香藥材中6個2-(2-苯乙基)色酮類化合物{6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮、6,8-二羥基-2-(2-苯乙基)色酮、6,8-二羥基-2-[2-(3′-甲氧基-4′-羥基苯乙基)]色酮、6-羥基-2-(2-苯乙基)色酮、6,7-二甲氧基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮、7-羥基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]}進行紫外全波長掃描，發(fā)現(xiàn)6個2-(2-苯乙基)色酮類化合物在230 nm附近均具有較強的紫外吸收。在此，對沉香藥材色酮提取液和沉香藥材中主要的2-(2-苯乙基)色酮類化合物——6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮進行紫外全波長掃描，結(jié)果表明，沉香藥材色酮提取液與色酮類化合物對照品溶液在230 nm附近均有較大吸收，因此，將230 nm作為紫外分光光度法的測定波長。

3 結(jié)論

根據(jù)2-(2-苯乙基)色酮類化合物都具有2-(2-苯乙基)色酮母核結(jié)構(gòu)且其在230 nm波長下具有較強吸收的特點，建立了測定沉香藥材中2-(2-苯乙基)色酮類化合物總含量的紫外分光光度法。方法學考察結(jié)果表明，該方法測定沉香藥材中2-(2-苯乙基)色酮類化合物的總含量重復性好，在5 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，其加樣回收率為101.24%(RSD=2.25%)，具有操作簡便、快速、準確度高、用樣少的特點，可用于沉香藥材中2-(2-苯乙基)色酮類化合物總含量測定，以及對不同沉香藥材進行品質(zhì)評價。

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