劉加慧 楊洪帥 王 輝(廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院, 湛江 524088)

溫度、鹽度和pH對(duì)小球藻生長率的聯(lián)合效應(yīng)

劉加慧 楊洪帥 王 輝(廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院, 湛江 524088)

采用中心復(fù)合設(shè)計(jì)(CCD)研究了溫度(16—34 ℃)、鹽度[(15—45)‰]和pH(6.0—9.0)對(duì)小球藻(Chlorella sp. CHX-1)生長的聯(lián)合效應(yīng)。結(jié)果表明, 溫度、鹽度與pH的一次、二次效應(yīng)都對(duì)小球藻比生長速率有極顯著影響(P<0.01); 溫度與鹽度間、溫度與pH間的互作效應(yīng)對(duì)小球藻比生長速率影響顯著(P<0.05), 而鹽度與pH間的互作效應(yīng)影響不顯著(P>0.05); 三因子影響度大小依次為: 溫度>pH>鹽度。采用響應(yīng)曲面法建立了溫度、鹽度和pH對(duì)小球藻比生長速率影響的模型方程, 該模型的決定系數(shù)0.9759, 矯正決定系數(shù)0.9542, 說明模型的擬合度極高; 模型的預(yù)測決定系數(shù)0.8367, 表明可用于預(yù)測小球藻比生長速率的變化。通過模型優(yōu)化和驗(yàn)證試驗(yàn), 得出在溫度、鹽度和pH組合為26.7 ℃/25.5‰/7.3時(shí), 小球藻比生長速率達(dá)到最大值0.69, 滿意度為0.999。本試驗(yàn)結(jié)果可為小球藻生產(chǎn)提供理論指導(dǎo)。

小球藻; 溫度; 鹽度; pH; 生長; 響應(yīng)曲面法

小球藻(Chlorella)是一種常見的單細(xì)胞綠藻,廣泛分布于各種水體。小球藻富含藻多糖、脂肪酸、糖蛋白和維生素等營養(yǎng)成分, 可以作為全營養(yǎng)食品提供給人類, 有較好的藥理和保健作用[1,2], 是培育輪蟲和貝類等的重要餌料[3,4], 也是去除污水 N、P等物質(zhì)效率最高的藻類之一[5,6]。此外小球藻還可用于生產(chǎn)生物柴油[7—9]。

為了更充分的利用小球藻, 首先要提高小球藻的生產(chǎn)力。藻類生長與藻本身的生理特點(diǎn)以及諸多環(huán)境因素有關(guān), 其中水體溫度、鹽度和pH是影響藻類生長的重要環(huán)境因子。關(guān)于環(huán)境因子對(duì)小球藻生長的影響國內(nèi)外已有許多報(bào)道, 如楊桂娟等[10]研究了溫度對(duì)小球藻生長和溶氧量的影響, 表明在 25℃時(shí), 小球藻生長速度與溶氧量的增長速度達(dá)到最大。杜宇等[11]報(bào)道了小球藻在低鹽環(huán)境中有較快的生長速度。Rai, et al.[12]發(fā)現(xiàn)酸性pH會(huì)抑制營養(yǎng)物NO3+、NH4+的吸收和硝酸還原酶活性進(jìn)而影響其生長。趙娜等[13]研究了不同pH條件下Cr6＋對(duì)小球藻生長的毒性效應(yīng), 發(fā)現(xiàn)Cr6+在藻的最適生長pH條件下毒性最小。張桂艷等[14,15]研究了不同理化因子對(duì)小球藻生長速率、生物量和油脂產(chǎn)量的影響, 發(fā)現(xiàn)溫度、鹽度和 pH的影響表現(xiàn)為在適宜生長的條件下油脂含量提高。De-Bashan, et al.[16]研究發(fā)現(xiàn)氮的吸收取決于小球藻的生長情況。這些研究都說明研究適宜小球藻生長的環(huán)境因子是很有必要的。但以上研究僅局限于單因子的研究, 不能考察影響因子之間的互作或協(xié)同效應(yīng), 也沒有建立起可用于預(yù)測的模型。本研究采用中心復(fù)合設(shè)計(jì)和響應(yīng)曲面分析法,擬研究溫度、鹽度和 pH對(duì)小球藻生長的聯(lián)合效應(yīng),考察溫度、鹽度和pH的一次、二次效應(yīng)及互作效應(yīng),建立相應(yīng)的回歸模型, 并通過模型優(yōu)化找到最優(yōu)因子組合, 為其進(jìn)一步的生產(chǎn)培養(yǎng)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料及培養(yǎng)方法

試驗(yàn)用小球藻: 采用廣東海洋大學(xué)藻種室提供的小球藻(Chlorella sp. CHX-1)。小球藻保種于 f/2液體培養(yǎng)基, 4℃冰箱。

培養(yǎng)方法: 小球藻經(jīng)長時(shí)間保存其活力會(huì)下降,故正式試驗(yàn)前應(yīng)先進(jìn)行活化培養(yǎng)。先將小球藻接種于f/2培養(yǎng)基培養(yǎng)4d進(jìn)行活化。每天搖瓶5—6次, 防止藻細(xì)胞下沉或附壁。培養(yǎng)溫度25 , ℃ 光照40 μmol/ (m2·s), 光暗比 12h∶12h。將進(jìn)入對(duì)數(shù)期的藻種離心、洗凈后接入裝有50 mL f/2培養(yǎng)液[17]的100 mL錐形瓶, 使初始OD值在0.1—0.2。置于GZX-150C光照培養(yǎng)箱內(nèi)在不同溫度下進(jìn)行一次性培養(yǎng)(控溫精度0.1 ), ℃ 中間不更換培養(yǎng)液。用NaCl調(diào)節(jié)藻液鹽度, 1 mol/L的NaOH和1 mol/L的HCl調(diào)節(jié)藻液pH, 并每隔4h監(jiān)測一次水體pH變化, 用Tris-HCl緩沖液校正, 以保證試驗(yàn)過程中 pH變化不超過±0.2。每天搖動(dòng)錐形瓶兩次(09:00和17:00), 隨機(jī)調(diào)換錐形瓶的位置使受光均勻。藻種接種及培養(yǎng)過程中, 均嚴(yán)格遵循無菌操作。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用中心復(fù)合法試驗(yàn)設(shè)計(jì)(Central composite design, CCD)研究溫度、鹽度和pH對(duì)小球藻生長的聯(lián)合效應(yīng)。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果, 本試驗(yàn)中溫度范圍為16—34 , ℃ 鹽度范圍為(15—45)‰, pH范圍為6.0—9.0。溫度(T)、鹽度(S)和pH在上述范圍內(nèi)各取5個(gè)水平, 各因子水平的編碼值分別是–1.68179、–1、0、1、1.68179。整個(gè)試驗(yàn)共計(jì)20個(gè)溫度、鹽度和pH三因子交叉組合(表1), 其中因子點(diǎn)數(shù)為8個(gè), 軸點(diǎn)數(shù)6個(gè), 星號(hào)臂α= ±1.68179, 中心點(diǎn)數(shù)為6。每個(gè)因子點(diǎn)和軸點(diǎn)組合重復(fù)3次(表1)。為消除系統(tǒng)誤差, 所有因子組合均隨機(jī)安排。

表1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與相應(yīng)結(jié)果Tab. 1 Experimental design and results

1.3 生長測定

取小球藻藻液, 用分光光度計(jì)測其在680 nm下的光密度值(OD680)[18,19], 以光密度值代表藻的生長情況。每天定時(shí)取樣測定, 每組設(shè)3個(gè)重復(fù)。接種后1—5d, 藻液OD值快速增長, 第6天, 增長速率明顯減緩, 6d以后OD值變化很小。所以, 用培養(yǎng)前6d的平均生長速率表示各種培養(yǎng)條件下的小球藻的比生長速率。比生長速率(Specific growth rate, SGR)根據(jù)普通生物學(xué)通用的計(jì)算公式[14]計(jì)算得到:

其中, K表示小球藻比生長速率; NT為時(shí)間T的OD值; N0是初始時(shí)的OD值; T為培養(yǎng)時(shí)間, 試驗(yàn)期T為6d。

1.4 數(shù)據(jù)處理

以溫度、鹽度和pH三因子為自變量, 小球藻比生長速率為因變量, 建立小球藻比生長速率和溫度、鹽度、pH之間的回歸方程模型為:

式中, Y為響應(yīng)變量(小球藻比生長速率); β0為常數(shù); β1、β2、β3分別代表溫度、鹽度和pH的一次效應(yīng); β3、β4、β5分別代表溫度與鹽度間、溫度與pH間、鹽度與pH間的互作效應(yīng); β6、β7、β8分別代表溫度、鹽度和pH的二次效應(yīng); ε為殘差, 并假定其服從均值為0的正態(tài)分布。采用ANOVA方法檢驗(yàn)?zāi)Ｐ偷娘@著性, 并給出幾種決定系數(shù)以輔助確定模型的擬合優(yōu)度。采用SAS (v9.13)軟件中的 RSM 模塊對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析, 模型中的各項(xiàng)效應(yīng)采用最小二乘法進(jìn)行估計(jì)并采用F統(tǒng)計(jì)量進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。各因子對(duì)生長的影響可通過等高線圖展示。顯著水平設(shè)定為0.05。

2 結(jié)果

對(duì)應(yīng)于各個(gè)溫度、鹽度和pH組合的生長結(jié)果如表1所示。由于每個(gè)因子點(diǎn)與軸點(diǎn)重復(fù)了3次, 故給出了生長數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)差; 而為進(jìn)行模型的失擬檢驗(yàn)及估計(jì)、降低純誤差, 本研究設(shè)置中心點(diǎn)次數(shù)為6,無需再設(shè)重復(fù)組, 因此沒有給出標(biāo)準(zhǔn)差。從結(jié)果看,由于試驗(yàn)中采取了嚴(yán)格控制因子波動(dòng)范圍的措施,數(shù)據(jù)的精度較高。

2.1 模型檢驗(yàn)

通過對(duì)模型進(jìn)行方差分析(表2)可見, 方程模型極顯著(P<0.01), 失擬檢驗(yàn)結(jié)果顯著(P<0.05), 可能是極小的純誤差造成的, 而非模型不恰當(dāng)。

表2 模型充分性的方差分析Tab. 2 Analysis of variance for the adequacy of the model

2.2 模型建立

對(duì)系數(shù)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)結(jié)果表明(表3), 溫度、鹽度與pH的一次效應(yīng)、二次效應(yīng)對(duì)小球藻比生長速率影響極顯著(P<0.01), 溫度與鹽度、pH中任意一因子間的互作效應(yīng)對(duì)小球藻比生長速率影響顯著(P<0.05), 鹽度與 pH間的互作效應(yīng)對(duì)小球藻比生長速率影響不顯著(P>0.05)。由于表3中的系數(shù)估計(jì)值都是以編碼值的形式給出, 故可以直接比較各因子效應(yīng)的大小。由表3可見, 溫度、鹽度與pH對(duì)小球藻比生長速率的影響度大小依次為: 溫度>pH>鹽度。

對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行二次多元回歸擬合, 根據(jù)試驗(yàn)得出的小球藻比生長速率與溫度、鹽度和pH之間的(即非編碼)回歸方程為:

該模型決定系數(shù) R2為 0.9759, 矯正決定系數(shù)Adj.R2為0.9542, 預(yù)測決定系數(shù)Pred.R2為0.8367。由于本研究采用的試驗(yàn)設(shè)計(jì)具有正交性, 因而上述模型方程中那些不顯著的項(xiàng)可直接剔除而不必重新估計(jì)各項(xiàng)系數(shù)。

2.3 響應(yīng)曲面分析

從圖1、圖2、圖3可以看出, 當(dāng)保持溫度、鹽度和 pH三個(gè)因子中的任何一個(gè)因子為最佳條件不變時(shí), 隨著其他兩個(gè)因子的升高, 小球藻的比生長速率均呈先上升后下降的趨勢。圖1、圖2和圖3的等高線圖清晰的顯示了隨著這三個(gè)因子變化, 小球藻的比生長速率存在最佳范圍。

表3 回歸方程系數(shù)及95%置信區(qū)間估計(jì)Tab. 3 Coefficient estimate and 95% confidence intervals

圖1 溫度和鹽度對(duì)小球藻比生長速率影響的等高線圖Fig. 1 Contour plot of the combination effects of temperature and salinity on the growth rate of Chlorella sp. CHX-1

圖2 溫度和pH對(duì)小球藻比生長速率影響的等高線圖Fig. 2 Contour plot of the combination effects of temperature and pH on the growth rate of Chlorella sp. CHX-1

2.4 優(yōu)化

本研究中得到的模型方程有很高的擬合度和預(yù)測能力, 根據(jù)Montgomery, et al.[20]的方法對(duì)小球藻比生長速率的模型方程進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果顯示, 溫度、鹽度和pH的最優(yōu)組合為26.7 /25.5℃ ‰/7.3, 此時(shí)小球藻的比生長速率達(dá)到最大值 0.69, 滿意度為0.999。為了進(jìn)一步驗(yàn)證響應(yīng)曲面優(yōu)化條件的可靠性,按所得最優(yōu)條件進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn), 所得比生長速率為0.70, 與理論預(yù)測值基本相符, 說明模型優(yōu)化條件合理有效。

圖3 鹽度和pH對(duì)小球藻比生長速率影響的等高線圖Fig. 3 Contour plot of the combination effects of salinity and pH on the growth rate of Chlorella sp. CHX-1

3 討論

3.1 溫度對(duì)小球藻生長的影響

溫度通過影響藻類光合作用與呼吸作用強(qiáng)度來影響其生長發(fā)育, 對(duì)經(jīng)濟(jì)微藻的生長速率及生化組成造成顯著影響[21—23], 是影響藻類生長發(fā)育的重要環(huán)境因素。本試驗(yàn)研究結(jié)果顯示, 溫度的一次效應(yīng)對(duì)小球藻比生長速率影響極顯著(P<0.01), 溫度的效應(yīng)大于鹽度、pH的效應(yīng), 與一些學(xué)者的研究發(fā)現(xiàn)[24,25]相一致。等高線圖(圖1和圖2)顯示, 在16—25℃溫度范圍內(nèi)小球藻比生長速率呈上升趨勢, 在29.5—34℃內(nèi)呈下降趨勢。與楊桂娟等[10]和吳松[26]提出的適宜溫度范圍一致。在一定溫度范圍內(nèi), 溫度較低時(shí),細(xì)胞膜的運(yùn)輸和呼吸代謝功能會(huì)受到影響,致使延遲期增加。但隨著溫度升高, 酶活性增強(qiáng), 生長速率加快[27]。只有在適宜溫度范圍內(nèi), 藻類才會(huì)生長最快。有學(xué)者[14]證實(shí)在 15—35℃溫度范圍內(nèi),小球藻的比生長速率呈先上升后下降的趨勢。

3.2 鹽度對(duì)小球藻生長的影響

鹽度主要是調(diào)節(jié)微藻細(xì)胞胞內(nèi)外的滲透壓, 影響微藻光合速率、葉綠素含量和一些代謝活動(dòng)[28]。本試驗(yàn)研究結(jié)果顯示, 鹽度的一次效應(yīng)對(duì)小球藻比生長速率影響極顯著(P<0.01), 與Cho, et al.[24]的研究結(jié)果相符。等高線圖(圖1和圖3)顯示, 在(15—30)‰的鹽度范圍內(nèi)小球藻比生長速率呈上升趨勢, 在(30—45)‰內(nèi)呈下降趨勢。金偉[29]指出鹽度對(duì)單細(xì)胞藻生長的影響呈拋物線型, 鹽度過高或過低都不利于藻的生長, 這與圖1和圖3中的趨勢相似。江靈芝等[30]研究發(fā)現(xiàn)蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)在(15—45)‰鹽度范圍均可以正常生長, 以及韓志國等[31]報(bào)道小球藻(Chlorella minutissima)在鹽度15‰開始出現(xiàn)較典型的生長曲線, 在(20—50)‰鹽度范圍內(nèi)均呈現(xiàn)典型的生長曲線, 與本試驗(yàn)得出的鹽度范圍一致。

3.3 pH對(duì)小球藻生長的影響

pH值能改變微藻體內(nèi)相關(guān)酶的結(jié)構(gòu)狀態(tài)和活性、培養(yǎng)液中碳源的存在形式以及各種金屬復(fù)合物的溶解度, 從而影響微藻生長及脂肪酸的含量[12—15]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示, pH的一次效應(yīng)對(duì)小球藻比生長速率影響極顯著(P<0.01), 等高線圖(圖2和圖3)顯示, pH為6.0—7.5時(shí)小球藻比生長速率呈上升趨勢, 7.5—9.0時(shí)呈下降趨勢, 與趙娜等[13]研究結(jié)果相符。在生長過程中, 小球藻會(huì)因自身生理代謝活動(dòng)調(diào)節(jié)生活環(huán)境的pH[19,32], 小球藻喜歡弱堿性(pH7.2—8.2), 但在弱酸性(pH5.8—6.8)的水中也能生活和繁殖[33]。吳松[26]報(bào)道小球藻適宜生長的酸堿度為pH6—8左右, Matusiak, et al.[34]報(bào)道小球藻適宜生長的pH為7.0—8.0, 與本試驗(yàn)結(jié)果相似。

3.4 溫度、鹽度和pH對(duì)小球藻生長的互作效應(yīng)

以往的研究多集中于單因子[13—15]對(duì)小球藻生長的獨(dú)立影響, 因而這些研究不能考察多因子間的互作影響, 還有一些采用正交實(shí)驗(yàn)[24,25]。當(dāng)因子之間存在互作效應(yīng)時(shí), 對(duì)該交互作用的分析比單獨(dú)分析因素的主效應(yīng)重要得多[20]。目前僅見Cho, et al.[24]采用雙因素方差分析法, 得出溫度和鹽度的互作效應(yīng)對(duì)小球藻比生長速率影響極顯著。本試驗(yàn)采用復(fù)合設(shè)計(jì), 對(duì)溫度、鹽度、pH的互作效應(yīng)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。結(jié)果表明, 溫度與鹽度的互作效應(yīng)以及溫度與 pH的互作效應(yīng)對(duì)小球藻比生長速率影響顯著(P<0.05)。原因可能是溫度升高或降低均會(huì)影響小球藻體內(nèi)酶的活性, 而此變化會(huì)影響小球藻滲透壓調(diào)節(jié)和酸堿平衡。但實(shí)驗(yàn)結(jié)果中鹽度與 pH的互作效應(yīng)對(duì)小球藻的比生長速率影響不顯著(P>0.05), 造成此結(jié)果的原因可能是, 滲透壓和酸堿平衡的調(diào)節(jié)是兩個(gè)獨(dú)立的過程, 不存在關(guān)聯(lián)。

3.5 優(yōu)化

本研究表明, 溫度、鹽度和pH的二次效應(yīng)對(duì)小球藻的比生長速率影響均極顯著(P<0.01), 溫度、鹽度、pH與小球藻比生長速率之間呈曲線關(guān)系。從圖1、圖2和圖3可見, 小球藻的生長存在峰值, 即當(dāng)溫度、鹽度和pH組合不恰當(dāng)時(shí), 小球藻生長量會(huì)降低。從實(shí)際生產(chǎn)看, 確定溫度、鹽度、pH的最優(yōu)組合對(duì)提高小球藻產(chǎn)量具有現(xiàn)實(shí)意義。以上引用文獻(xiàn)均未發(fā)現(xiàn)溫度、鹽度及 pH的二次效應(yīng)。本試驗(yàn)是基于可靠模型, 根據(jù)Montgomery, et al.[20]的方法對(duì)模型方程進(jìn)行優(yōu)化, 結(jié)果顯示, 當(dāng)溫度、鹽度和 pH的組合為 26.7 /25.5℃ ‰/7.3時(shí), 小球藻的比生長速率達(dá)到最大值0.69, 滿意度高達(dá)0.999。本試驗(yàn)的研究結(jié)果是基于可靠的模型, 而以前的研究均未建立起可靠的模型, 故本試驗(yàn)結(jié)果更可靠, 且與楊桂娟等[10]、吳松[26]報(bào)道的最適溫度, 韓志國[31]、Sultana, et al.[35]報(bào)道的最適鹽度以及王子敬[36]等報(bào)道的最適pH接近。Mayo, et al.[37]使用混合培養(yǎng)基培育普通小球藻的最適溫度值(32.4℃), Ertit, et al.[38]報(bào)道的 pH(8.0), 與本試驗(yàn)結(jié)果相差很大。有資料證實(shí)藻種[23]、培養(yǎng)基[14,21]、光照強(qiáng)度及光暗周期[18,25]等都會(huì)影響藻的生長。所以很可能是藻株、培養(yǎng)基等生長體系和培養(yǎng)環(huán)境的不同造成了最適溫度、鹽度和pH的不同。

3.6 模型的建立及其意義

響應(yīng)曲面法是通過響應(yīng)曲面分析得到擬合度較高的模型方程, 并通過模型對(duì)試驗(yàn)指標(biāo)進(jìn)行可靠的預(yù)測[20]。然而國內(nèi)外關(guān)于環(huán)境因子對(duì)藻類生長影響的研究, 大多采用單因子[13—15,23]或正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法[24,25]。只針對(duì)環(huán)境因子的幾個(gè)孤立的水平點(diǎn)進(jìn)行分析, 極少數(shù)地建立了單因子線性回歸方程[24],但無法對(duì)小球藻比生長速率進(jìn)行連續(xù)預(yù)測。本研究首次建立了二次多元曲線回歸模型, 回歸方程的決定系數(shù)R2高達(dá)0.9759, 表明模型的擬合度很高。Cho, et al.[24]建立的小球藻生長模型相關(guān)系數(shù)R2≤0.97,顯然本模型擬合度更高。模型失擬檢驗(yàn)結(jié)果顯著(P<0.05), 可能是極小的純誤差造成的(表2), 而非模型不恰當(dāng)。然上述研究者的模型方程都沒有進(jìn)行失擬檢驗(yàn), 無法判定其恰當(dāng)性。更重要的是, 本研究中還給出了模型的預(yù)測能力, 預(yù)測R2為0.8367, 表明能可靠預(yù)測到不同溫度、鹽度和pH條件下小球藻的比生長速率。其他的模型方程均沒有給出此值,因而無法確定其預(yù)測能力。

本試驗(yàn)建立了溫度、鹽度和 pH對(duì)小球藻比生長速率影響的模型, 得出了溫度、鹽度和pH最優(yōu)組合, 為小球藻的培養(yǎng)生產(chǎn)提供了理論基礎(chǔ)。藻的生長離不開光照和氮、磷等營養(yǎng)元素, 在一般情況下,光照強(qiáng)度和培養(yǎng)基中的不同營養(yǎng)鹽及其濃度都對(duì)小球藻的生長有明顯影響, 然本試驗(yàn)并未考慮, 優(yōu)化小球藻生長條件還需要進(jìn)一步探討。

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COMBINED EFFECTS OF TEMPERATURE, SALINITY AND pH ON THE SPECIFIC GROWTH RATE OF CHLORELLA

LIU Jia-Hui, YANG Hong-Shuai and WANG Hui
(Fisheries College, Guangdong Ocean University, Zhanjiang 524088, China)

By using central composite design, the join effects of water temperature (16—34 ℃), salinity [(15—45)‰], and pH (6.0—9.0) on the growth of Chlorella sp. CHX-1 were examined in this study. The results showed that the linear and quadratic effects of temperature, salinity and pH on the specific growth rate (SGR) of Chlorella were significant (P<0.01). The interactive effect of temperature and salinity, interactive effect of temperature and pH were significant (P<0.05), but the interaction between salinity and pH was not significant (P>0.05). The effect of temperature on the SGR was greater than that of pH, which in turn was greater than that of salinity. Through response surface methodology, a model equation about the relationship of the growth rate to the three factors was established, with the R2, Adj.R2as highly as 0.9759 and 0.9542, suggesting that the fitting capability of the model was satisfactory. The Pred.R2reached to 0.8367, demonstrating that the model could be practicably applied for prediction. Through the optimization of the reliable model, the SGR reached its maximum (0.69) when the 3-factor combination was 26.7 ℃/ 25.5‰/7.3, with the desirability value being 0.999. These experimental results could offer theoretical reference for the production of the Chlorella.

Chlorella; Temperature; Salinity; pH; Specific growth rate; Response surface method

S968.41+9

A

1000-3207(2014)03-0446-08

10.7541/2014.63

2013-09-11;

2014-02-23

廣東省教育廳工程中心建設(shè)項(xiàng)目(GCZX-A0909); 國家星火計(jì)劃(2011GA780001)資助

劉加慧(1989—), 女, 河北邯鄲人; 碩士研究生; 主要從事海洋經(jīng)濟(jì)動(dòng)物發(fā)育生物學(xué)研究。E-mail: 13226267636@163.com

王輝(1966—), 男, 博士生導(dǎo)師; E-mail: whh524@sina.com