崔 斌，部春迎，付 萍

單核細(xì)胞趨化因子-1(MCP-1)是趨化因子超家族的重要成員。MCP-1基因多態(tài)性與一些惡性腫瘤如乳腺癌、宮頸癌、胃癌、前列腺癌及肺癌的易感性有關(guān)[1-6]。本研究應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和DNA直接測(cè)序的方法檢測(cè)濟(jì)南地區(qū)漢族人群中MCP-1-2518位點(diǎn)基因多態(tài)性，探討MCP-1-2518位點(diǎn)基因多態(tài)性與食管癌易感性之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 收集2011年11月1日至2013年11月1日章丘市人民醫(yī)院、濟(jì)南市第三人民醫(yī)院、濟(jì)南市第四人民醫(yī)院、濟(jì)南市第七人民醫(yī)院及章丘市中醫(yī)院行胃鏡檢查或住院手術(shù)治療的食管癌202例作為病例組，所有患者均經(jīng)病理學(xué)確診為食管鱗狀細(xì)胞癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)。選取同期在章丘市人民醫(yī)院健康體檢人員265人作為健康對(duì)照組，均無(wú)腫瘤及遺傳病史。所有入組者均為漢族，無(wú)血緣關(guān)系。以問(wèn)卷形式收集研究對(duì)象的人口學(xué)資料、吸煙史、飲酒史等資料。病例組男性145例，女性57例，年齡34～82歲，平均58.1歲；對(duì)照組男性198例，女性67例，年齡35～79歲，平均57.2歲。兩組研究對(duì)象的性別和年齡差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 方法 DNA提取。抽取研究對(duì)象外周血5 ml，以EDTA抗凝，用TIANamp Genomic DNA Kit(北京天根生物技術(shù)有限公司)常規(guī)提取基因組DNA，提取過(guò)程按試劑盒說(shuō)明操作。用全基因組DNA擴(kuò)增含有MCP-1-2518位點(diǎn)的DNA片段。引物均參考文獻(xiàn)[7]設(shè)計(jì)，由上海生工生物工程公司合成。上游引物：5’-CCGAGATGTTCCCAGCACAG-3’;下游引物：5-CTGCTTTGCTTGTGCCTCTT-3’。PCR反應(yīng)體系總體積50 μl，其中包括引物各15pmol，1U Tap DNA聚合酶，2.5 mmol/L MgCl2，200mmol/L dNTP和模板DNA 0.5 μg。PCR反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性 5 min；94 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共36個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸10 min(擴(kuò)增儀為GeneAmp PCR System 9700)。擴(kuò)增片段經(jīng)純化后在ABI PRISM 3100型DNA全自動(dòng)測(cè)序儀上進(jìn)行直接測(cè)序分析(由大上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司完成。并隨機(jī)抽取部分樣本進(jìn)行DNA直接測(cè)序，以保證基因分型結(jié)果的準(zhǔn)確。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，病例組與對(duì)照組的基因型和等位基因型分布比較均采用χ2檢驗(yàn)。以非條件Logistic回歸法計(jì)算表示經(jīng)性別、年齡校正的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)的比值比(odd ratio，OR)及其95%的可信區(qū)間(confidence interval，CI)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MCP-1-2518位點(diǎn)等位基因和基因型與ESCC易感性的關(guān)系(表1) MCP-1-2518位點(diǎn)AA、AG、GG基因型在病例組中的頻率分別為18.8%、47.0%和34.2%，在對(duì)照組中為14.3%、49.4%和36.2%。MCP-1-2518的A、G等位基因頻率和AA、AG、GG基因型頻率在ESCC組和健康對(duì)照組之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05。

表1 MCP-1-2518位點(diǎn)等位基因和基因型與食管鱗狀細(xì)胞癌易感性的關(guān)系

2.2 吸煙與ESCC易感性的關(guān)系(表2) 按照吸煙習(xí)慣，我們將研究對(duì)象分為吸煙組與非吸煙兩組，吸煙者在ESCC組和健康對(duì)照組比例分別為48.02%(97/202)和49.06%(130/265)，兩組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05。分層分析表明，AA型基因頻率在ESCC吸煙組(25.8%)顯著高于健康對(duì)照吸煙組(13.1%)(χ2=8.059，P=0.018)。與GG基因型相比，攜帶AA基因型可使吸煙人群ESCC的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加3倍。而在非吸煙的患者和健康對(duì)照組中，MCP-1-2518位點(diǎn)的等位基因及基因型頻率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05。

表2 MCP-1-2518基因多態(tài)性聯(lián)合吸煙狀況與食管鱗狀細(xì)胞癌易感性的關(guān)系

3 討論

食管癌是全世界最常見(jiàn)的十大惡性腫瘤之一[8]。食管癌的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，可能是環(huán)境因素與遺傳因素相互作用的結(jié)果。但是暴露于相同環(huán)境因素下，只有很少一部分人患食管癌的事實(shí)說(shuō)明，個(gè)體是否患食管癌不但取決于環(huán)境因素，還取決于個(gè)體的遺傳易感性，這種易感性的差異在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中可能起著重要的作用。宿主體內(nèi)參與腫瘤發(fā)生的一些基因在人群中具有多態(tài)性，這些多態(tài)性基因可單獨(dú)或與環(huán)境因素相互作用決定個(gè)體對(duì)腫瘤的易感性[9]。近年來(lái)的研究表明，抑癌基因、代謝酶基因、DNA修復(fù)基因及免疫相關(guān)基因等的多態(tài)性與個(gè)體對(duì)食管癌的易感性有關(guān)。

MCP-1定位于17q11，2-21.1，屬于CC細(xì)胞因子家族，由CCL2基因編碼。MCP-1的主要功能是：趨化單核/巨噬細(xì)胞；趨化和激活嗜堿性粒細(xì)胞，使其釋放組胺參與免疫調(diào)節(jié)；參與細(xì)胞的生長(zhǎng)、代謝和凋亡過(guò)程；在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中主要通過(guò)募集腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞、促進(jìn)腫瘤血管生成、調(diào)節(jié)腫瘤免疫、直接作用于腫瘤細(xì)胞等促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展。MCP-1基因調(diào)控區(qū)序列5’端存在兩處位點(diǎn)的基因多態(tài)性-297A/T6和-2518G/A。MCP-1多態(tài)性可導(dǎo)致其轉(zhuǎn)錄水平或表達(dá)水平的改變，從而決定了個(gè)體的差異性，在不同的環(huán)境因素作用下，可以表現(xiàn)出對(duì)疾病的不同易感性。目前許多研究已經(jīng)證實(shí)MCP-1多態(tài)性與前列腺癌、肺癌的發(fā)病相關(guān)[5-6]。

本研究結(jié)果顯示，MCP-1-2518位點(diǎn)基因型及等位基因分布在ESCC組和健康對(duì)照組無(wú)明顯差異。根據(jù)吸煙狀況分層分析發(fā)現(xiàn)，MCP-1-2518的AA型基因頻率在ESCC吸煙組(25.8%)顯著高于健康對(duì)照吸煙組(13.1%)，與GG基因型相比，攜帶AA基因型可使吸煙人群ESCC的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加3倍。此結(jié)果與楊磊等[5]報(bào)道的攜帶AA基因型可增加吸煙人群患非小細(xì)胞肺癌風(fēng)險(xiǎn)相類(lèi)似。而在非吸煙的患者和健康對(duì)照組中，MCP-1-2518位點(diǎn)的等位基因及基因型頻率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說(shuō)明AA型基因可增加吸煙者患ESCC的風(fēng)險(xiǎn)，AA型基因的過(guò)量表達(dá)可能與吸煙所誘導(dǎo)的代謝改變相互作用，從而影響ESCC的易感性。此結(jié)果與Vazquez-Lavista等[10]報(bào)道的攜帶AA型基因可增加膀胱腫瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相類(lèi)似。

綜上所述，MCP-1-2518位點(diǎn)的多態(tài)性基因型和等位基因不單獨(dú)影響ESCC的發(fā)生和發(fā)展，MCP-1-2518位點(diǎn)的AA基因型可增加吸煙人群ESCC易感性。MCP-1-2518位點(diǎn)基因多態(tài)性分析可作為預(yù)測(cè)吸煙人群ESCC易感性的分子指標(biāo)之一。

參考文獻(xiàn)：

[1] Loberg RD，Day LL，Harwood J，et al.CCL2 is a potent regulator of prostate cancer cell migration and proliferation[J].Neoplasia, 2006, 8(7): 578-586.

[2] Davidson B,Goldberg I Gotlieb WH,et al.Macrophage infiltration and angiogenesis in cervical squamous cell carcinoma-clinicopathologic correlation[J].Acta Obste Gynecol Scand,1999,78(3):240-244.

[3] Ghilardi G1,Biondi ML,La Torre A,et al.Breast cancer progression and host polymorphisms in the chemokine system: role of the macrophage chemoattractant protein-1 (MCP-1) -2518 G allele[J].Clin Chem,2005,51(2):452-456.

[4] Kuroda T,Kitadai Y,Tanaka S,et al.Monocyte chemoattractant protein-1 transfection induces angiogenesis and tumorigenesis of gastric carcinomain nude mice via macrophage recruitment[J].Clin Cancer Res,2005,11(21):7629-7636.

[5] 楊磊, 時(shí)廣利, 宋長(zhǎng)興, 等.中國(guó)北方地區(qū)漢族人群MCP-1基因多態(tài)性與肺癌相關(guān)性研究[J].結(jié)核病與胸部腫瘤,2012,(4):266-269

[6] Cai Z,Chen Q,Chen J,et al.Monocyte chemotactic protein 1 promotes lung cancer-induced bone resorptive lesions in vivo[J].Neoplasia, 2009 Mar; 11(3):228-236.

[7] Dyment DA,Sadovnick AD,Ebers GC.Genetics of multiple sclerosis[J].Hum Mol Genet,1997,6(10):1693-1698.

[8] 張思維,陳萬(wàn)青,雷正龍,等.中國(guó)腫瘤登記地區(qū)2008年惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析[J].中國(guó)腫瘤, 2012, 21(1): 1994-2013.

[9] Cheung WY,Liu G.Genetic variations in esophageal cancer risk and prognosis[J].Gastroenterol Clin North Am, 2009,38(1):75-91,viii.

[10] Vazquez-Lavista LG,Lima G,Gabilondo F,et al.Genetic association of monocyte chemoattractant protein 1(MCP-1)-2581 polymorphism in Mexican patients with transition cell carcinoma of the bladder[J].Urology,2009,74(2): 414-418.