詹 成(綜述） 時(shí) 雨 馬 軍 王 琳 王 群(審校）

(復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院胸外科 上海 200032)

丙酮酸激酶M2型（p KM2）入核機(jī)制和核內(nèi)作用的研究進(jìn)展

詹 成(綜述） 時(shí) 雨 馬 軍 王 琳 王 群△(審校）

(復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院胸外科 上海 200032)

傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為丙酮酸激酶M2型(pyruvate kinase M2,PKM 2)通過催化腫瘤細(xì)胞糖代謝來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長。近年來研究發(fā)現(xiàn)除了酶催化功能外,PKM2還能通過多種途徑進(jìn)入細(xì)胞核,在核內(nèi)作為蛋白激酶廣泛參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白修飾等過程。本文將就這方面的研究成果作一綜述。

丙酮酸激酶M2型(PKM2)； 細(xì)胞核； 糖酵解

丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)是細(xì)胞糖酵解途徑的關(guān)鍵酶,其催化磷酸烯醇式丙酮酸(phosphoenolpyruvate,PEP)和ADP生成丙酮酸和ATP。人體內(nèi)存在4種PK同工酶,分別為L、R、M1和M2型。其中M1型和M2型均由PKM基因編碼,通過不同的外顯子剪接方式形成,兩者僅在第378位至第434位氨基酸間有23個(gè)氨基酸不同［1］。PKM2存在二聚體和四聚體兩種分子構(gòu)象,并能互相轉(zhuǎn)化,其主要在胚胎細(xì)胞、成體干細(xì)胞中表達(dá),并且隨著胚胎分化逐漸被其他3種同工酶代替,但腫瘤細(xì)胞中PKM2表達(dá)重新升高并取代原表達(dá)的PK同工酶類型［2-3］。

腫瘤細(xì)胞即使在有氧條件下,也經(jīng)由糖酵解轉(zhuǎn)化大量葡萄糖生成乳酸,這一現(xiàn)象被稱為Warburg效應(yīng),是腫瘤細(xì)胞能量代謝最基本的改變之一。研究表明,PKM2是導(dǎo)致這一效應(yīng)的關(guān)鍵因子［4］。

傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為,PKM2在細(xì)胞質(zhì)中與其他糖酵解酶如己糖激酶、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase, LDH)等一起構(gòu)成糖酵解酶復(fù)合體［5-6］。這一空間上的鄰近關(guān)系使它可以高效催化葡萄糖經(jīng)由糖酵解生成乳酸和能量,而不是進(jìn)入線粒體進(jìn)行有氧呼吸［5,7-8］。大量糖酵解中間產(chǎn)物在細(xì)胞中積累,這些產(chǎn)物經(jīng)由多種代謝途徑用于核酸、脂類和蛋白質(zhì)等生物大分子的合成,而這些原料為快速生長增殖的腫瘤細(xì)胞所必需［5,9-10］。

近年來研究發(fā)現(xiàn),原本定位在細(xì)胞質(zhì)中的PKM2除了在能量代謝中發(fā)揮酶催化作用外,還可以通過多種途徑進(jìn)入細(xì)胞核,進(jìn)而廣泛參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白修飾等過程。

pKM2進(jìn)入細(xì)胞核的機(jī)制早在1988年Gumińska等［11］就報(bào)道了在小鼠Ehrlich腹水瘤細(xì)胞和大鼠Morris肝癌細(xì)胞核提取物中發(fā)現(xiàn)有PKM2存在,但限于當(dāng)時(shí)研究背景和條件并未對其進(jìn)入細(xì)胞核的途徑進(jìn)行研究。2007年Hoshino等［12］用雙雜交技術(shù)尋找小鼠原B細(xì)胞系BB13在IL-3刺激下進(jìn)入細(xì)胞核的蛋白質(zhì),分別構(gòu)建了含Lex A-Gal4-目標(biāo)蛋白c DNA和Lex Ar結(jié)合序列-GFP的質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染BB13細(xì)胞。結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒中含PKM2序列時(shí),IL-3刺激導(dǎo)致細(xì)胞核內(nèi)熒光顯著增強(qiáng),這說明IL-3刺激使PKM2轉(zhuǎn)入細(xì)胞核,隨后他們通過對細(xì)胞核蛋白的Western blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了這一點(diǎn)。通過構(gòu)建含不同PKM2 cDNA片段的質(zhì)粒,Hoshino等［12］進(jìn)一步證明PKM2 C結(jié)構(gòu)域的139個(gè)氨基酸殘基是導(dǎo)致PKM2進(jìn)入細(xì)胞核能力的關(guān)鍵部分,但這部分結(jié)構(gòu)并不象傳統(tǒng)核定位序列(Nuclear localization signal,NLS)那樣富含精氨酸和賴氨酸。Hoshino等［12］通過用非受體型酪氨酸蛋白激酶2(Janus Kinase 2,JAK 2)抑制劑AG-490處理細(xì)胞,觀察到IL-3誘導(dǎo)的PKM2核轉(zhuǎn)位幾乎完全被阻滯,這說明JAK 2在IL-3刺激誘導(dǎo)PKM2進(jìn)入細(xì)胞核的過程中起著關(guān)鍵作用,但進(jìn)一步的作用機(jī)制仍不明確。

Stetak等［13］在研究生長抑素誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制時(shí),采用碘125標(biāo)記的生長抑素類似物TT-232、蛋白質(zhì)交聯(lián)劑BS3［Bis(sulfosuccinimidyl) suberate］與皮膚基底癌細(xì)胞A431提取物共同孵育,進(jìn)而通過高效液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)鑒定與TT-232相互作用的蛋白質(zhì),發(fā)現(xiàn)TT-232能與PKM2相結(jié)合。Stetak等［13］進(jìn)一步在非洲綠猴腎細(xì)胞系Cos-7中驗(yàn)證TT-232及生長抑素能否特異性地與PKM2作用,并通過熒光素報(bào)告基因、免疫熒光和Western Blot技術(shù)檢驗(yàn)PKM2在細(xì)胞內(nèi)的分布,證實(shí)生長抑素及其類似物刺激細(xì)胞致使PKM2進(jìn)入細(xì)胞核,隨后他們利用相似的技術(shù)發(fā)現(xiàn)H2O2、紫外線同樣能促使PKM2進(jìn)入細(xì)胞核。

Spoden［14］等通過酵母雙雜交技術(shù)研究與PKM2相互作用的蛋白質(zhì),發(fā)現(xiàn)PIAS3(protein inhibitor of activated STAT3)通過羧基端383-619位氨基酸構(gòu)成的底物結(jié)合結(jié)構(gòu)域與PKM2相結(jié)合。而已知PIAS3主要是作為SUMO(small ubiquitinrelated modifier)E3連接酶起作用,參與SUMO化修飾,抑制干擾素調(diào)節(jié)因子調(diào)控蛋白1(interferon regulatory factor 1)和MITT(microphthalmiaassociated transcription factor)的轉(zhuǎn)錄活性［14-16］。在骨肉瘤細(xì)胞系U-2中進(jìn)行的免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了PKM2能與PIAS3形成復(fù)合物［14］。Spoden等［14］處理U-2細(xì)胞以維持蛋白質(zhì)的SUMO化狀態(tài),隨后對細(xì)胞裂解液行免疫共沉淀實(shí)驗(yàn),檢測到在除正常PKM2條帶外的另一條帶；在未經(jīng)維持SUMO化處理的普通Western blot實(shí)驗(yàn)中,該條帶亮度大為減弱,這說明一部分PKM2確實(shí)被SUMO化修飾,但該修飾不穩(wěn)定,處在不斷變化之中。上調(diào)PIAS3表達(dá)時(shí)發(fā)現(xiàn)SUMO化的PKM2含量只有輕微升高,這說明除了PIAS3外還有其他修飾蛋白在PKM2的SUMO化中起作用［14］。在高表達(dá)PIAS3的U-2和小鼠胚胎成纖維細(xì)胞NIH3T3中,利用免疫熒光雙染技術(shù)能觀察到PIAS3主要分布于細(xì)胞核中,PKM2在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中都有分布,而在普通的U-2細(xì)胞核中未觀察到PKM2存在［14］。過表達(dá)Ring結(jié)構(gòu)域突變而無催化活性的PIAS3并不能促使PKM2進(jìn)入細(xì)胞核,這說明該結(jié)構(gòu)域在這一過程中起著重要作用［14］。

Yang等［17-18］利用免疫熒光方法發(fā)現(xiàn),在人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87/EGFR、U251中,表皮生長因子(epidermal growth factor,EGF)刺激致使PKM2在細(xì)胞核中積聚,并在人前列腺癌細(xì)胞DU145、人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231中驗(yàn)證了這一點(diǎn)。Yang等［17］分別用EGFR、磷酸肌醇3激酶、Src、JNK、MEK(MAP-kinase kinase)/ERK(extracellular regulated protein kinases)抑制劑處理細(xì)胞以阻斷EGFR、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT/PKB)、c-Src,c-Jun和ERK 1/2的磷酸化,觀察對EGF刺激所致的PKM2核轉(zhuǎn)位的影響,證實(shí)EFGR及下游ERK 1/2的激活對PKM2進(jìn)入細(xì)胞核起關(guān)鍵作用。Yang等［17］還證實(shí)了ERK2通過其富含酸性氨基酸的結(jié)構(gòu)域和谷氨酸天冬氨酸口袋組成的對接槽(docking groove)與PKM2第429位異亮氨酸和第431位亮氨酸組成的結(jié)構(gòu)相特異性結(jié)合,兩者結(jié)合促進(jìn)ERK 2對PKM2第37位的絲氨酸磷酸化；隨后,多肽脯氨?；樂串悩?gòu)酶PIN 1［protein interacting with NIMA(never in mitosis A)-1］結(jié)合PKM2第37位磷酸化的絲氨酸和第38位的脯氨酸,催化PKM2該部分的順反異構(gòu),PIN1調(diào)控輸入蛋白importinα5與PKM2第399位和400位的精氨酸相結(jié)合,并最終運(yùn)輸PKM2進(jìn)入細(xì)胞核［17］。

pKM2在細(xì)胞核內(nèi)的作用Ignacak等［19］采用親和層析提取大鼠Morris肝癌細(xì)胞核PKM2,并測定飽和底物情況下PKM2的活性,研究發(fā)現(xiàn)組蛋白H1和賴氨酸能明顯降低PKM2催化PEP生成丙酮酸的速率,組蛋白H1或賴氨酸能接受PEP所攜帶的高能磷酸基團(tuán),而精氨酸或組氨酸不具備這一能力。結(jié)合既往研究結(jié)果,Ignacak等［19］認(rèn)為PKM2能發(fā)揮蛋白激酶的作用,把PEP上的磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移到組蛋白H1上富含賴氨酸的ε氨基上,通過組蛋白H1的磷酸化在DNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄中發(fā)揮重要作用。

Hoshino等［12］在BB13細(xì)胞系通過轉(zhuǎn)染含NLS-PKM2 cDNA質(zhì)粒來促進(jìn)PKM2進(jìn)入細(xì)胞核中,結(jié)果發(fā)現(xiàn)單獨(dú)轉(zhuǎn)染對BB13細(xì)胞的生長無顯著影響,但當(dāng)在培養(yǎng)液中加入EGF時(shí),細(xì)胞核中的PKM2增加顯著促進(jìn)細(xì)胞生長,這說明核內(nèi)的PKM2能與EGF協(xié)同發(fā)揮促細(xì)胞增殖的作用［12］。

Stetak等［13］利用表面等離子共振(surface plasmon resonance technology)等技術(shù)發(fā)現(xiàn)生長抑素及其類似物對PKM2的作用并不會影響PKM2的酶活性,同樣使用轉(zhuǎn)染含NLS-PKM2基因質(zhì)粒的方法促進(jìn)PKM2進(jìn)入Cos-7細(xì)胞核,觀察到細(xì)胞凋亡,與生長抑素的作用類似,而轉(zhuǎn)染PKM2同工酶PKM1的對照組未發(fā)生細(xì)胞凋亡。這一實(shí)驗(yàn)過程中未觀察到caspase-3激活,采用廣譜caspase抑制劑處理細(xì)胞也不能抑制細(xì)胞凋亡,這說明核PKM2并非通過經(jīng)典的caspase途徑促進(jìn)細(xì)胞凋亡［13］。Stetak等［13］將突變后喪失酶活性的PKM2 (第294位的賴氨酸突變?yōu)榈鞍彼?轉(zhuǎn)入細(xì)胞核,同樣能觀察到其促進(jìn)凋亡的作用,這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證明了核內(nèi)PKM2的作用不依賴于酶活性。

Lee等［20］利用GST株層析和質(zhì)譜技術(shù)研究小鼠畸胎瘤細(xì)胞P19中與八聚轉(zhuǎn)錄因子4(octamerbinding transcription factor 4,Oct-4)POU DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域相互作用的蛋白質(zhì)時(shí),發(fā)現(xiàn)并通過免疫共沉淀技術(shù)在人腎上皮細(xì)胞293T中進(jìn)一步驗(yàn)證了PKM2與Oct-4的特異性結(jié)合,隨后通過對純化的PKM2和Oct-4進(jìn)行細(xì)胞外共同孵育及Western blot檢測,證明兩者直接結(jié)合而不需其他蛋白介導(dǎo)。對PKM2與Oct-4不同片段的研究證實(shí),PKM2包含C結(jié)構(gòu)域的307～531位氨基酸和Oct-4的POU結(jié)構(gòu)域是兩者結(jié)合的關(guān)鍵部位［20］。Lee等［20］通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)染上調(diào)PKM2和Oct-4在COS-7細(xì)胞和293T細(xì)胞中的表達(dá),并通過免疫熒光雙染技術(shù)觀察到小部分PKM2和全部Oct-4定位在細(xì)胞核中,兩者在細(xì)胞核內(nèi)存在互相作用的可能；隨后在Oct-4表達(dá)上調(diào)的COS-7細(xì)胞和HeLa細(xì)胞中,通過比較上調(diào)PKM2表達(dá)與對照組含Oct-4結(jié)合位點(diǎn)與熒光報(bào)告基因質(zhì)粒的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)PKM2使Oct-4的轉(zhuǎn)錄活性增加了2.5倍。

Luo等［21-22］通過同位素標(biāo)記和定量質(zhì)譜的方法發(fā)現(xiàn)PKM2與HIF-1α相互結(jié)合,對缺氧培養(yǎng)的He La細(xì)胞核提取物行免疫共沉淀實(shí)驗(yàn),證實(shí)核PKM2與HIF-1α特異性結(jié)合。GST柱層析實(shí)驗(yàn)證實(shí)PKM2能結(jié)合HIF-1α多個(gè)不同的結(jié)構(gòu)域,其中包含575～786位的負(fù)調(diào)節(jié)HIF-1α轉(zhuǎn)錄活性的結(jié)構(gòu)域［21-22］。Luo等［21-22］在He La細(xì)胞核肝癌細(xì)胞Hep3B中轉(zhuǎn)染融合了缺氧反應(yīng)元件(hypoxia response element,HRE)和熒光報(bào)告基因的質(zhì)粒,隨后通過病毒轉(zhuǎn)染上調(diào)PKM2表達(dá),發(fā)現(xiàn)熒光顯著增強(qiáng),而敲除PKM2則明顯降低HIF-1的轉(zhuǎn)錄活性,這兩個(gè)過程中并不伴隨HIF-1α或HIF-1β表達(dá)的變化,這說明核PKM2通過增強(qiáng)HIF-1的活性發(fā)揮作用。PKM2能結(jié)合HIF-1α轉(zhuǎn)錄活性結(jié)構(gòu)域并促進(jìn)HIF-2活性,這一功能與PKM2的酶活性無關(guān),而PKM1沒有促進(jìn)HIF活性的作用［21-22］。進(jìn)一步研究證實(shí),脯氨酸羥化酶3(prolyl hydroxylase 3,PHD3)羥化PKM2第405位和第408位的脯氨酸,促進(jìn)PKM2與HIF-1α的結(jié)合,進(jìn)而促進(jìn)HIF-1α與HRE的結(jié)合,并且PKM2募集組蛋白乙?；竝300乙?；M蛋白第9位的酪氨酸,最終促進(jìn)下游基因如LDH-A、丙酮酸脫氫酶激酶1、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)等的轉(zhuǎn)錄［21-22］。Luo等［21-22］還發(fā)現(xiàn)PKM基因第一內(nèi)含子反義鏈上包含HRE元件,并證明HIF顯著促進(jìn)PKM2表達(dá),這樣就形成了一個(gè)循環(huán)促進(jìn)的機(jī)制。

Gao等［23］在過表達(dá)PKM2的人結(jié)腸癌細(xì)胞SW620中采用芯片技術(shù)分析其他基因表達(dá)的變化,發(fā)現(xiàn)MEK 5表達(dá)較對照組升高了6倍,在SW620和SW480細(xì)胞中敲除PKM2可以導(dǎo)致MEK 5表達(dá)顯著降低。在多個(gè)細(xì)胞系中的研究發(fā)現(xiàn),核PKM2、MEK 5與細(xì)胞增殖速度相關(guān),敲除MEK 5可以抑制PKM2上調(diào)對細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用,但不抑制PKM2的表達(dá),這說明MEK5在核PKM2促進(jìn)細(xì)胞增殖過程中起著重要作用［23］。進(jìn)一步研究證明,核PKM2在生理?xiàng)l件下能以PEP而不是ATP為底物,通過磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子3(signal transducers and activators of transcription 3,Stat 3)第705位上的酪氨酸,促進(jìn)Stat3與MEK 5啟動(dòng)區(qū)域結(jié)合,進(jìn)而促進(jìn)MEK5的轉(zhuǎn)錄,這一磷酸化過程中不伴隨常見的磷酸化Stat3的蛋白激酶JAK 2和c-Src表達(dá)的變化［23］。Gao等［23］通過凝膠過濾層析技術(shù)發(fā)現(xiàn)核PKM2主要以二聚體形式存在,通過構(gòu)建第399位的精氨酸突變?yōu)楣劝彼岬腜KM2,干擾PKM2各亞基間的連接以維持二聚體狀態(tài)的PKM2。與正常的PKM2及PKM1比較發(fā)現(xiàn),二聚體PKM2能更有效地磷酸化Stat3,說明主要是二聚體PKM2發(fā)揮蛋白激酶的作用,而PKM1沒有磷酸化Stat3的作用。Stat3可競爭性結(jié)合突變型PKM2的ADP結(jié)合位點(diǎn),而過表達(dá)突變型PKM2能顯著上調(diào)細(xì)胞核內(nèi)的PKM2含量、Stat3磷酸化、MEK 5表達(dá)和細(xì)胞增殖［23］。

Yang等［18］在U87/EGFR細(xì)胞中采用sh RNA敲除PKM2,極大降低了細(xì)胞在基礎(chǔ)狀態(tài)和在EGF刺激下的增殖速度,并且顯著阻斷了EGF對周期素D1(Cyclin D1)和c-Myc表達(dá)的促進(jìn)作用,而周期素D1和c-Myc是β-catenin重要的下游因子。Yang等［18］采用熒光素報(bào)告基因、免疫共沉淀和染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)證明,敲除PKM2可抑制EGF誘導(dǎo)的β-catenin激活,阻礙β-catenin與周期素D1編碼基因CCN D1(coding for cyclin D1)與c-Myc啟動(dòng)子區(qū)域相結(jié)合,并抑制β-catenin與轉(zhuǎn)錄因子TCF4相結(jié)合；敲除PKM2不能阻斷Wnt 1或Wnt 3A對β-catenin轉(zhuǎn)錄活性的促進(jìn)作用,說明核PKM2在EGF誘導(dǎo)的β-catenin激活中發(fā)揮重要作用,但這一作用并非經(jīng)Wnt通路實(shí)現(xiàn)。隨后,Yang等［18］通過多種技術(shù)證實(shí)在EGF刺激下,EGFR下游因子c-Src轉(zhuǎn)入細(xì)胞核,磷酸化β-catenin第333位的酪氨酸,進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞核內(nèi)PKM2與β-catenin相結(jié)合,兩者的結(jié)合及復(fù)合體與CCN D1啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)合并不依賴于PKM2的酶活性。核PKM2結(jié)合在CCN D1啟動(dòng)子區(qū)域,直接從PEP轉(zhuǎn)移磷酸基團(tuán)磷酸化附近組蛋白H3第11位的蘇氨酸,這一作用需要PKM2的酶活性［24］。組蛋白H3在該位置的磷酸化修飾促使其與組蛋白脫乙酰化酶3(histone deacetylase,HDA C3)分離,從而促進(jìn)組蛋白H3第9位的酪氨酸乙酰化,進(jìn)而促進(jìn)周期素D的轉(zhuǎn)錄［24］。核PKM2促進(jìn)β-catenin與c-Myc啟動(dòng)區(qū)域相結(jié)合,進(jìn)而促進(jìn)c-Myc下游基因如葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體1(glucose transporter 1,GLU T1)、LDH-A等的表達(dá),甚至通過多聚嘧啶序列結(jié)合蛋白(polypyrimidine tract binding protein,PTB)促進(jìn)PKM2本身的選擇性剪接［17］。另外,β-catenin下游因子DDK1(Dickkopf 1)也是核PKM2發(fā)揮作用的途徑之一［18］。對人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和臨床病例標(biāo)本的研究證實(shí),核PKM2能促進(jìn)細(xì)胞增殖、細(xì)胞從G1期轉(zhuǎn)入S期、細(xì)胞Warburg效應(yīng)、腫瘤形成并與臨床分期及預(yù)后緊密相關(guān)［17-18,24］。

結(jié)語對于PKM2進(jìn)入細(xì)胞核的機(jī)制及其在細(xì)胞核內(nèi)的作用,近年來的研究已有較大進(jìn)展。PKM2本身含有NLS序列,在多種因素作用下轉(zhuǎn)入細(xì)胞核內(nèi)。細(xì)胞核內(nèi)的PKM2主要發(fā)揮蛋白激酶的作用,修飾多種重要的轉(zhuǎn)錄因子,調(diào)節(jié)它們的活性和下游基因的表達(dá),在不同條件下發(fā)揮促進(jìn)或抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用。但在PKM2進(jìn)入細(xì)胞核并發(fā)揮作用的過程中仍然有許多未知環(huán)節(jié),有待進(jìn)一步的研究明確。

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A review of the mechanism of pyruvate kinase M2ˊs nuclear translocation and its function in nucleus

ZHAN Cheng,SHI Yu,MA Jun,WANG Lin,WANG Qun△
(Department of Thoracic Surgery,Zhongshan Hospital,Fudan University,Shanghai,200032,China)

Conventional views states that the pyruvate kinase M2(PKM2)enhances the growth of cancer cells via catalying glucose metabolism.However,many recent studies have reaveled that PKM2 can be translocated into nucleus where it functions more vitally than catalying though a variety of ways.As a protein kinase,PKM2 widely participants in transciptional regulation and protein modification in the nucleus.These literatures will be briefly recapitulated in this review.

pyruvate kinase M2(PKM2)； nucleus； glucolysis

Q 493.4

B

10.3969/j.issn.1672-8467.2014.01.024

2012-12-28；編輯：王蔚)

高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金(20110071120066)；吳階平醫(yī)學(xué)基金(320.6750.12300)

△Corresponding author E-mail：wang.qun64@gmail.com

*This work was supported by Doctoral program Foundation of Institutions of Higher Education of China(20110071120066)and WU Jie-ping Medical Foundation(320.6750.12300).