周霞瑾，齊惠珍 ，王明霞 ，常 青，馬海飛

（1.河北醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院藥劑科，河北 石家莊 050011； 2.河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，河北 石家莊 050017）

氟伐他汀是臨床常用的全合成的降膽固醇藥物，大劑量可抑制不穩(wěn)定型心絞痛患者冠狀動(dòng)脈病變的炎性反應(yīng)［1］，常與降壓藥厄貝沙坦聯(lián)用，且與厄貝沙坦都經(jīng)CYP2C9代謝。有報(bào)道氟伐他汀不僅是CYP2C9的底物，當(dāng)與其他藥物聯(lián)用時(shí)，則成為CYP2C9抑制劑［2］。本試驗(yàn)中選擇氟伐他汀和厄貝沙坦作為研究藥物，擬通過(guò)研究氟伐他汀對(duì)厄貝沙坦藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的影響，探討經(jīng)同種酶代謝的藥物相互作用的規(guī)律，為臨床合理用藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器、試藥與動(dòng)物

Waters高效液相色譜儀，515泵，474熒光檢測(cè)器，Empower色譜數(shù)據(jù)工作站；ZH－2型渦旋混合器（天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠）；800型離心機(jī)（上海分析儀器廠）；梅特勒AE240型電子分析天平（瑞士）；SANYO低溫冰箱。替米沙坦標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品（美國(guó)Sigma－Aidrich公司，批號(hào)為L(zhǎng)ot No T－8949）；厄貝沙坦標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為100607－200301）；乙腈為色譜純，乙醚、二氯甲烷、磷酸為分析純，試驗(yàn)用水為多效蒸餾水；羧甲基纖維素CMCS（化學(xué)純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，批號(hào)為20050815）；氟伐他汀片（北京諾華制藥有限公司，批號(hào)為X0669，規(guī)格為每片40mg）；厄貝沙坦片（賽諾菲安萬(wàn)特＜杭州＞制藥有限公司，批號(hào)為0A020，規(guī)格為每片0.15 g）。新西蘭大白兔18只，均為雄性，體重2.5～3 kg，購(gòu)于河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)為709198，并通過(guò)河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物處置

每只籠子裝1只新西蘭大白兔，編號(hào)，稱重，進(jìn)入動(dòng)物室，經(jīng)1周以上適應(yīng)性飼養(yǎng)后，隨機(jī)分為3組，即對(duì)照組、氟伐他汀低劑量（10mg ／kg）誘導(dǎo)組和氟伐他汀高劑量（50mg ／kg）誘導(dǎo)組，每組6只。對(duì)照組（A組）灌胃給予2%羧甲基纖維素溶液每只10mL，每日1次，連續(xù)3 d，于第4天晨8：00給予厄貝沙坦（50mg／kg）的2%羧甲基纖維素溶液灌胃。氟伐他汀低劑量誘導(dǎo)組（B組）動(dòng)物前3 d給予氟伐他?。?0mg／kg）的2%羧甲基纖維素溶液灌胃，每日1次，于第4天晨8：00給厄貝沙坦（50mg／kg）的2%羧甲基纖維素溶液灌胃。氟伐他汀高劑量誘導(dǎo)組（C組）動(dòng)物前3 d給予氟伐他汀（50 mg／kg）的2%羧甲基纖維素溶液灌胃，每日1次，于第4天晨8：00給予厄貝沙坦（50mg／kg）的2%羧甲基纖維素溶液灌胃。所有動(dòng)物于灌胃厄貝沙坦的前1天晚8：00開(kāi)始禁食不禁水，厄貝沙坦的給藥劑量按人／兔體重的等效劑量換算。

1.2.2 取血方法

預(yù)先給動(dòng)物置留置針，分別于給藥前和給藥后0.25，0.5，1，1.5，2，3，5，7，9，12，24，36 h 從新西蘭大白兔的耳中動(dòng)脈取血2mL，置肝素管中，以 10000 r／min的速率離心 10 min，取上清液，放入－80℃低溫冰箱保存，用于測(cè)定厄貝沙坦的濃度。

1.2.3 血漿樣品處理［3］

取血漿400μL，置10mL具塞玻璃離心管中，精密加入內(nèi)標(biāo)工作液 40 μL（5 μg／mL），渦旋混勻 15 s，加入 100 μL 磷酸溶液（1mol／L），渦旋 30 s，使其酸化，加入乙醚 － 二氯甲烷（7 ∶3）［4］混合液 5mL 提取，渦旋振蕩 5 min，離心（1500 r／min）5 min，取有機(jī)層4.5mL于潔凈干燥具塞玻璃離心管中，加入200μLNaOH溶液（0.05 mol／L），渦旋震蕩 3 min，離心 （1500 r／min）5 min，于－80℃低溫冰箱中冷凍15min，棄去上層未凍有機(jī)相，待下層融化后，用微量取樣器取150μL于1mL的Ephendroff管中，加入 100μL 磷酸溶液（0.2mol／L）酸化，渦旋混勻 30 s，進(jìn)樣 50 μL分析。

1.2.4 色譜條件［3］

色譜柱：Diamonsil C18柱（200 mm ×4.6 mn，5μm）；流動(dòng)相：水－乙腈（57∶43），三乙胺0.1%，磷酸調(diào)節(jié) pH至3.00；流速：1.0mL／min；柱溫：室溫；熒光檢測(cè)波長(zhǎng)：激發(fā)波長(zhǎng)為254 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為 371 nm［5］。內(nèi)標(biāo)物：替米沙坦；進(jìn)樣量：50 μL。在該色譜條件下，替米沙坦和厄貝沙坦的保留時(shí)間分別為4.2 min和6.0 min，分離效果良好，空白血漿的內(nèi)源性物質(zhì)對(duì)藥物和內(nèi)標(biāo)物無(wú)干擾。

1.2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備［3］

用空白血漿將質(zhì)量濃度為100μg／mL的厄貝沙坦貯備液配制成質(zhì)量濃度為 5，2，1，0.5，0.2，0.1，0.05 μg／mL 的系列標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液。精密量取替米沙坦內(nèi)標(biāo)溶液（5μg／mL）40μL置10 mL具塞玻璃離心管中，分別加入400μL上述系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液，按2.3項(xiàng)下方法進(jìn)行處理，用高效液相色譜（HPLC）－熒光檢測(cè)法測(cè)定，以厄貝沙坦峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值（Y）為縱坐標(biāo)、厄貝沙坦質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y＝0.0032＋0.192X（r＝0.9996）。結(jié)果表明，在0.05～5μg／mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，厄貝沙坦峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值與血漿中厄貝沙坦?jié)舛瘸柿己镁€性關(guān)系，厄貝沙坦的最低檢測(cè)限為0.023μg／mL，其日內(nèi)RSD為3.21%，日間RSD為 4.37%（n＝5）。

1.2.6 藥代動(dòng)力學(xué)分析

每只新西蘭大白兔的血漿厄貝沙坦?jié)舛戎稻肈ASVersion 3.0（Bontz Inc.，北京，中國(guó)）藥代動(dòng)力學(xué)軟件進(jìn)行智能化數(shù)據(jù)處理，模擬血藥濃度－時(shí)間曲線，并計(jì)算非房室模型統(tǒng)計(jì)矩參數(shù)，Cmax和Tmax為實(shí)測(cè)值。分析采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料采用，多組比較采用方差分析（ANOVA），P＜0.05時(shí)再用Dunnett檢驗(yàn)，Tmax采用秩和檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

各組的平均血藥濃度－時(shí)間曲線見(jiàn)圖1。各組的血藥濃度－時(shí)間數(shù)據(jù)經(jīng)DAS 3.0軟件處理后的非房室模型統(tǒng)計(jì)矩參數(shù)見(jiàn)表1。經(jīng)單因素方差分析，與A組比較，氟伐他汀低劑量（10mg／kg）誘導(dǎo)對(duì)厄貝沙坦的藥代動(dòng)力學(xué)無(wú)影響；氟伐他汀高劑量（50mg／kg）誘導(dǎo)，厄貝沙坦的主要藥代參數(shù)0～36 h藥時(shí)曲線下面積（AUC0～36），0 ～ ∞ 藥時(shí)曲線下面積（AUC0～∞），0 ～ ∞ 平均駐留時(shí)間（MRT0～∞）雖有變化，但經(jīng)單因素方差分析均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，氟伐他汀高劑量（50mg ／kg）誘導(dǎo)組的半衰期 （t1／2）和 0 ～36 h 平均駐留時(shí)間（MRT0～36）顯著延長(zhǎng)（P＜ 0.05），且表觀清除率（CL）顯著降低（P＜0.05）。

圖1 血藥濃度－時(shí)間曲線

表1 各組口服厄貝沙坦的非房室模型藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)（ ± s，n＝6）

表1 各組口服厄貝沙坦的非房室模型藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)（ ± s，n＝6）

注：與 A組比較，*P＜0.05。

藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)表觀分布容積（V ／L，kg）半衰期（t1／2，h）0 ～ 36 h 平均駐留時(shí)間 （MRT0～36，h）0～∞平均駐留時(shí)間（MRT0～∞，h）0～36h藥時(shí)曲線下面積（AUC0～36，μg·h／mL）0 ～∞藥時(shí)曲線下面積（AUC0～∞，μg·h／mL）表觀清除率（CL／L，kg／h）達(dá)峰時(shí)間（T max，h）峰濃度（C max，μg／mL）A組B組C組68.10±49.564.52±2.055.14±1.356.13±1.629.88±9.0710.23±8.9911.48±8.371.34±0.222.38±2.5624.31±12.422.74±0.772.86±0.824.17±2.727.69±3.218.69±3.056.43±2.330.67±0.203.58±1.7036.31±22.358.73±2.65*8.31±2.38*10.86±4.3219.35±7.5020.49±7.722.79±1.15*0.89±0194.48±2.80

3 討論

厄貝沙坦不需經(jīng)生物轉(zhuǎn)化就能發(fā)揮藥理作用，但有試驗(yàn)證明其確實(shí)經(jīng) CYP2C9氧化代謝［2］。氟伐他汀是第 1個(gè)全合成的HMG－CoA還原酶抑制劑，其消除主要經(jīng)CYP2C9代謝為N－去異丙基丙酸、5－羥基氟伐他汀和6－羥基氟伐他汀，氟伐他汀還被證明是CYP2C9酶的抑制劑［2］。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，氟伐他汀低劑量（10mg／kg）誘導(dǎo)組對(duì)厄貝沙坦的藥代動(dòng)力學(xué)無(wú)影響，而高劑量（50mg ／kg）誘導(dǎo)組顯著延長(zhǎng)了厄貝沙坦的t1／2（P＜ 0.05），說(shuō)明氟伐他汀抑制厄貝沙坦的代謝，且與劑量相關(guān)。氟伐他汀屬親水性化合物，且在腸道具有高滲透性，因此口服后在小腸廣泛、迅速吸收［2］試驗(yàn)設(shè)計(jì)氟伐他汀與厄貝沙坦服用時(shí)間相差12 h以上故不會(huì)對(duì)厄貝沙坦的吸收產(chǎn)生影響。P－gp底物唯一的特性是親脂性，氟伐他汀為親水性化合物，故推測(cè)氟伐他汀不是P－gp底物，也有試驗(yàn)證實(shí)氟伐他汀不影響P－gp介導(dǎo)的轉(zhuǎn)運(yùn)［6－7］，氟伐他汀對(duì)厄貝沙坦的吸收無(wú)影響。故推測(cè)氟伐他汀對(duì)厄貝沙坦藥代動(dòng)力學(xué)的影響與抑制CYP2C9有關(guān)。

氟伐他汀的生物利用度很低，源于其首過(guò)效應(yīng)，服用劑量的60% 被 CYP2C9 代謝［2］。Siekmeier 等［8］觀察到 10 mg 速釋膠囊的絕對(duì)生物利用度為（29±18）%。多次口服或單劑量口服劑量超過(guò)20mg時(shí)，生物利用度增加，峰濃度（Cmax）和AUC均不成比例地明顯增加。并認(rèn)為這一結(jié)果可能因?yàn)槎啻慰诜蛟黾觿┝繒r(shí)，肝臟上的轉(zhuǎn)運(yùn)體或代謝酶達(dá)到了飽和，部分藥物逃逸了肝臟首關(guān)代謝，導(dǎo)致進(jìn)入血液循環(huán)的藥量增加。本試驗(yàn)結(jié)果與此研究結(jié)果一致，高劑量氟伐他汀影響厄貝沙坦的代謝。與對(duì)照組相比，其CL顯著降低（P＜0.05），這一結(jié)果與MRT0～36顯著延長(zhǎng)一致。考慮CYP2C9酶具有飽和性，氟伐他汀通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性與CYP2C9酶結(jié)合而抑制影響厄貝沙坦的代謝。

總之，氟伐他汀高劑量時(shí)通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性抑制CYP2C9酶而影響厄貝沙坦的藥代動(dòng)力學(xué)，顯著延長(zhǎng)其t1／2和MRT，并且顯著降低其CL。因此，臨床上厄貝沙坦與氟伐他汀聯(lián)用時(shí)，尤其氟伐他汀劑量較大時(shí)，要進(jìn)行監(jiān)測(cè)，必要時(shí)調(diào)整厄貝沙坦的給藥間隔。

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