江 濤，雷 健，邢 茂，楊秋鳳，葛 勤

（中國(guó)人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院藥劑科，重慶 400037）

扁平苔蘚是發(fā)生于口腔黏膜的一種非感染慢性炎癥，病損難愈，給患者造成嚴(yán)重的心理壓力［1－2］。我院研制的由赤芍、黃連、麥冬等藥材制成的中藥湯劑，具有解毒消腫、滋陰清熱等作用，臨床用于扁平苔蘚等口腔炎癥，療效較好；但湯劑口感不好，患者服藥依從性差，且水溶液久貯易酸敗，不易攜帶，應(yīng)用受到一定限制。為解決上述問(wèn)題，筆者將中藥湯劑制成膠囊。膠囊劑為固體制劑，有效期相對(duì)較長(zhǎng)，易攜帶，患者依從性較好。為保證制劑質(zhì)量，本試驗(yàn)中對(duì)口炎清膠囊的制備工藝、質(zhì)量控制和穩(wěn)定性進(jìn)行了研究。

1 儀器與試藥

1200型高效液相色譜儀儀系統(tǒng)（美國(guó)Agilent公司）；HWS24型電熱恒溫水浴鍋（上?？萍家缓阌邢薰荆?；KQ5200型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；電熱鼓風(fēng)干燥箱（重慶市永生實(shí)驗(yàn)儀器廠）；電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司）；SHH－SDT型綜合藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱（重慶市永生實(shí)驗(yàn)儀器廠）。鹽酸小檗堿（批號(hào)為110713－200911）、黃芩苷（批號(hào)為110715－201117）、芍藥苷（批號(hào)為 110736－201136）對(duì)照品，均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；黃連、黃芩、麥冬、赤芍等中藥材均購(gòu)自重慶桐君閣中藥批發(fā)有限公司，經(jīng)重慶醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院劉新教授鑒定為真品；淀粉（曲阜市藥用輔料有限公司，批號(hào)為20100201）；硬脂酸鎂（安徽山河藥用輔料有限公司，批號(hào)為110916）；口炎清膠囊（自制，批號(hào)為 20120109，20120116，20120120）；乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 制備

取處方中全部中藥材，80%乙醇提取3次，每次2 h，合并提取液，回收乙醇，濃縮，70℃烤成干浸膏。干浸膏粉碎，過(guò)80目篩，細(xì)粉加入20%淀粉，混勻，90%乙醇制成軟材，制粒，濕顆粒于60℃干燥3 h，20目篩整粒，得干顆粒。干顆粒加1%硬脂酸鎂，混合，0號(hào)膠囊填充，即得口炎清膠囊。

2.2 一般質(zhì)量控制項(xiàng)目

性狀：本品為膠囊劑，內(nèi)容物為棕紅色至棕色顆粒，氣香，味微苦。

水分測(cè)定：照 2010 年版《中國(guó)藥典（一部）》附錄ⅨH［3］中第一法（烘干法）測(cè)定。結(jié)果3批口炎清膠囊（批號(hào)分別為20120109，20120116，20120120）的含量水分別為 4.7% ，4.2% ，5.1% ，均小于9.0%，符合藥典規(guī)定。

裝量差異差異測(cè)定：照 2010 年版《中國(guó)藥典（一部）》附錄ⅠL［3］10中膠囊劑裝量差異項(xiàng)下方法測(cè)定。結(jié)果3批口炎清膠囊（批號(hào)分別為20120109，20120116，20120120）的裝量差異分別為±6.3%，±5.5%，±5.3%，均小于10%，符合藥典規(guī)定。

崩解時(shí)限測(cè)定：照 2010 年版《中國(guó)藥典（一部）》附錄Ⅻ A［3］71中崩解時(shí)限檢查法膠囊劑項(xiàng)下方法測(cè)定。結(jié)果3批口炎清膠囊（批號(hào)分別為 20120109，20120116，20120120）的崩解時(shí)限分別為 20，23，21 min，均在 30 min內(nèi)，符合藥典規(guī)定。

2.3 薄層色譜法定性鑒別

黃連：取口炎清膠囊內(nèi)容物2g，加甲醇25mL，加熱回流15min，濾過(guò)，濾液補(bǔ)加甲醇至25mL，作為供試品溶液。另取黃連對(duì)照藥材0.25 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取鹽酸小檗堿對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。再按處方比例，取缺黃連的其他各味藥材，按制備工藝加工制成陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。照薄層色譜法［3］34試驗(yàn)，吸取上述4種溶液各1μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷－乙酸乙酯－異丙醇－甲醇－水－三乙胺（3∶3.5∶1∶1.5∶0.5∶1）為展開(kāi)劑，置氨蒸氣飽和的展開(kāi)缸內(nèi)，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液、對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾，見(jiàn)圖1 A。

麥冬：取口炎清內(nèi)容物1 g，加鹽酸0.5mL、水10mL，加熱煮沸5min，放冷，三氯甲烷提取3次，每次7mL，分取三氯甲烷液，濃縮至1mL，作為供試品溶液。另取麥冬對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。取缺麥冬的其他各味藥材，按制備工藝加工制成陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－丙酮（4∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至墨綠色斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液無(wú)干擾，見(jiàn)圖1 B。

黃芩：取本品3 g，加水40mL，超聲30min，加乙醚振搖提取2次，每次50mL，棄乙醚液，剩余溶液用乙酸乙酯振搖提取3次，每次40mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取黃芩對(duì)照藥材0.5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取缺黃芩的其他各味藥材，按制備工藝加工制成陰性樣品溶液，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯 －丙酮 －醋酸 －水（10∶4∶5∶3）為展開(kāi)劑，預(yù)平衡30min，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液無(wú)干擾，見(jiàn)圖1 C。

圖1 薄層色譜圖

2.4 芍藥苷含量測(cè)定［4－6］

2.4.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：HypersilODS柱（150mm×4.6mm，10μm）；流動(dòng)相：乙腈 －0.1%磷酸溶液（13∶87）；檢測(cè)波長(zhǎng)：229 nm；流速：1mL ／min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20μL。理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)大于3000。

2.4.2 溶液制備

精密稱取芍藥苷對(duì)照品12.5mg，置25mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。取口炎清浸膏粉2 g，精密稱定，置50mL容量瓶中，加40mL甲醇超聲處理30min，冷卻至室溫，加甲醇至刻度，振搖，過(guò)濾，即得供試品溶液。取缺赤芍的其他各味藥材，80%乙醇提取3次，每次2 h，合并提取液，濃縮，70℃烤成干浸膏，粉碎，按供試品溶液制備方法制備缺赤芍的陰性對(duì)照品溶液。

2.4.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：取2.4.2項(xiàng)下3種溶液，分別進(jìn)樣20μL，按擬訂色譜條件依法進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果陰性對(duì)照品溶液對(duì)芍藥苷的測(cè)定無(wú)干擾，見(jiàn)圖2。

圖2 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：精密吸取0.5 g／L芍藥苷對(duì)照品溶液0.1，0.5，1.5，2.5，4.5mL，置 5mL 容量瓶中，甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度分別為 0.05，0.15，0.25，0.35，0.45 g／L 的溶液。分別吸取20μL，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X）、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y＝13997X－52.45（r＝0.9999）。結(jié)果表明，芍藥苷質(zhì)量濃度在0.05～0.45 g／L范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密吸取芍藥苷對(duì)照品溶液20μL，按擬訂色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定，結(jié)果芍藥苷峰面積的RSD為0.75%（n＝6）；連續(xù)測(cè)定4 d，結(jié)果芍藥苷峰面積的RSD為0.68%（n＝6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取口炎清浸膏粉5份，依法制備供試品溶液，精密吸取20μL，按擬訂色譜條件測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果芍藥苷峰面積的RSD為1.15%（n＝5），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液20μL，按擬訂色譜條件，于 0，2，4，8，24 h 時(shí)進(jìn)樣，依法測(cè)定并記錄峰面積。結(jié)果芍藥苷峰面積的RSD為0.88%（n＝5），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：取已知芍藥苷含量的口炎清浸膏粉0.1 g共9份，分別置10mL容量瓶中，分別加入0.5 g／L的對(duì)照品溶液1.0，1.2，1.5mL，制成低、中、高 3 種質(zhì)量濃度，分別精密吸取 20μL，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。2.4.4 含量測(cè)定

表1 芍藥苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

分別取3批口炎清膠囊，依法制備樣品溶液，按擬訂色譜條件，精密吸取樣品溶液20μL，進(jìn)樣測(cè)定芍藥苷含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.5 穩(wěn)定性考察［7］

2.5.1 影響因素試驗(yàn)

高溫試驗(yàn)：取口炎清膠囊（批號(hào)為20120109），置平皿中，60℃恒溫箱中放置10 d時(shí)，于第5，10天時(shí)取樣，測(cè)定水分、崩解時(shí)限、芍藥苷含量。高濕度試驗(yàn)：取口炎清膠囊（批號(hào)為20120109），置平皿中，在25℃ 、相對(duì)濕度（75±5）%的恒濕密閉容器中放置10 d，于第5，10天時(shí)取樣，測(cè)定水分、崩解時(shí)限、芍藥苷含量。強(qiáng)光照射試驗(yàn)：取口炎清膠囊（批號(hào)為20120109），置平皿中，放在裝有日光燈的光照箱內(nèi)，于照度（4500±500）lx條件下放置10 d，于第5，10天時(shí)取樣，觀察性狀，測(cè)定水分、崩解時(shí)限、芍藥苷含量。結(jié)果在上述試驗(yàn)條件下口炎清膠囊內(nèi)容物為棕紅色至棕色顆粒，氣香，味微苦，其他檢查項(xiàng)目均符合要求，見(jiàn)表3。2.5.2 加速試驗(yàn)

表2 口炎清膠囊中芍藥苷含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）

表3 口炎清膠囊的影響因素試驗(yàn)結(jié)果

取 3批口炎清膠囊（批號(hào)分別為 20120109，20120116，20120120），模擬臨床用藥包裝（口服藥用高密度聚乙烯瓶，鋁箔封口，瓶?jī)?nèi)放干燥劑），在溫度（40±2）℃ 和相對(duì)濕度（75±5）%條件下放置6個(gè)月，在試驗(yàn)第0，1，2，3，6個(gè)月末分別取樣，測(cè)定水分、崩解時(shí)限、芍藥苷含量。結(jié)果口炎清膠囊內(nèi)容物為棕紅色至棕色顆粒，氣香，味微苦，其他檢查項(xiàng)目均符合要求，見(jiàn)表4。

表4 口炎清膠囊的加速試驗(yàn)和長(zhǎng)期試驗(yàn)結(jié)果

2.5.3 長(zhǎng)期試驗(yàn)

取 3批口炎清膠囊（批號(hào)分別為 20120109，20120116，20120120），模擬臨床用藥包裝（口服藥用高密度聚乙烯瓶，鋁箔封口，瓶?jī)?nèi)放干燥劑），在溫度（25 ±2）℃，相對(duì)濕度（60 ±10）%條件下放置 12 個(gè)月，分別于 0，3，6，9，12 個(gè)月時(shí)取樣，測(cè)定水分、崩解時(shí)限、芍藥苷含量。結(jié)果口炎清膠囊內(nèi)容物為棕紅色至棕色顆粒，氣香，味微苦，其他檢查項(xiàng)目均符合要求，見(jiàn)表4。

3 討論

藥材產(chǎn)地影響藥材的品質(zhì)，藥材品質(zhì)直接影響制劑的質(zhì)量，產(chǎn)地不同的藥材有效成分含量均有差異［8－9］。同一產(chǎn)地的藥材，也會(huì)因采收時(shí)間、貯藏、運(yùn)輸?shù)炔煌?，質(zhì)量差異很大［9－10］。因此，在制訂制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，首先需對(duì)藥材質(zhì)量進(jìn)行嚴(yán)格控制，保證藥材符合2010年版《中國(guó)藥典》的有關(guān)規(guī)定，這是保證制劑質(zhì)量的先決條件。

黃芩的鑒別首先參考2010年版《中國(guó)藥典（一部）》黃芩項(xiàng)下的薄層色譜鑒別方法，但由于本方為復(fù)方制劑，成分復(fù)雜，樣品點(diǎn)樣困難，色譜斑點(diǎn)分離不好，背景干擾較大。因此，通過(guò)多次試驗(yàn)，不斷摸索提取方法，調(diào)節(jié)展開(kāi)條件及顯色方法，結(jié)果所用方法分離良好，斑點(diǎn)清晰，簡(jiǎn)便易行，重復(fù)性好，可作為該制劑的定性質(zhì)量控制方法。

本試驗(yàn)比較了多種流動(dòng)相，如乙腈－0.02moL／L磷酸二氫鈉、乙腈－0.1%磷酸、乙腈－水、甲醇－水、乙腈－0.5%三乙胺水、甲醇－0.4%磷酸、甲醇－0.05moL／L磷酸二氫鉀的分離效果。結(jié)果，乙腈－0.1%磷酸的分離效果最為理想，芍藥苷色譜峰的保留時(shí)間適當(dāng)，分離度高，重現(xiàn)性好。

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