武朝松

引言：本文利肝散為水飛薊和絞股藍(lán)等組成的中成藥，具有疏肝利膽，清熱解毒，具有保肝、利膽、瀉下、利尿的功效。本標(biāo)準(zhǔn)對其粉末建立了顯微鑒別標(biāo)準(zhǔn)；以水飛薊賓對照品為對照，建立了薄層鑒別標(biāo)準(zhǔn)。參考《中華人民共和國藥典》2010年版一部水飛薊項下，以水飛薊賓為對照品建立了薄層鑒別方法。

利肝散為水飛薊和絞股藍(lán)等組成的中成藥，具有疏肝利膽，清熱解毒，具有保肝、利膽、瀉下、利尿的功效。本標(biāo)準(zhǔn)對以水飛薊賓對照品為對照，建立了薄層鑒別標(biāo)準(zhǔn)；參考《中華人民共和國藥典》2010年版一部水飛薊項下，以水飛薊賓為對照品建立了薄層鑒別方法具體如下文。

一、儀器和試藥

（一）儀器：

（二）對照品：水飛薊賓（批號：110856-2011，供含量測定用）由中國藥品生物制品檢定所提供。

（三）試藥：各試劑均使用分析純；聚酰胺薄膜（薄層層析用，浙江省臺州市路橋四甲生化塑料廠出品）；薄層硅膠板G（青島海洋化工廠分廠，批號20140203）；

二、制劑中水飛薊的薄層鑒別

《中國藥典》2010版一部水飛薊項下收載了水飛薊薄層鑒別方法。本研究參考藥典條件，以硅膠G板為固定相進(jìn)行制劑中水飛薊賓薄層色譜研究。研究表明，藥典條件下水飛薊賓薄層斑點顯色清晰度較差，且其特征斑點穩(wěn)定性差，顯色后不同時間色譜差異大。鑒于水飛薊中主要含有黃酮類，本試驗采用聚酰胺薄膜作為薄層固定相，預(yù)試表明對照品和制劑中主要色譜斑點顯色清晰。為此，本研究以聚酰胺薄膜為固定相，從以下幾個方面，對制劑中水飛薊薄層鑒別方法進(jìn)行了考察。

（一）對照品制備方法：參考《中國藥典》2010年版第一部水飛薊薄層鑒別項下對照品制備方法，制備每1ml含1mg的水飛薊賓溶液，作為對照品溶液。

（二）供試品液制備方法： 在實驗過程中，參考《中國藥典》第一部水飛薊薄層鑒別項下供試品制備方法，表明該方法能有效的提取樣品中水飛薊賓成分。最終確定供試液的制備方法為：取本品粉末1g，加乙醚20ml，加熱回流30分鐘，濾過，棄去乙醚液，藥渣揮盡乙醚，加甲醇20ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。

（三）顯色劑選擇：由于水飛薊賓為一種黃酮類化合物，因此以5%三氯化鋁乙醇溶液為顯色劑，顯色清晰后，在365nm下觀察熒光斑點。

（四）展開劑的考察：

分別考察了以下幾個系統(tǒng)：甲苯-甲酸乙酯-甲酸；環(huán)己烷-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇；環(huán)己烷-甲酸乙酯-甲酸；甲苯-甲酸乙酯-甲醇-甲酸，其中比較好的展開劑是①甲苯-甲酸乙酯-甲醇-甲酸（30：13：10：2），因此對此條件進(jìn)行優(yōu)化。

（五）展開環(huán)境條件的耐用性試驗考察：

1.飽和與否考察

對選定的展開劑進(jìn)行了飽和與否的考察，表明不飽和條件下水飛薊賓特征斑點有拖尾，因此建議在展開前飽和15分鐘（圖1）。

2. 利肝散 （批號：20140501） （5?l）

3. 利肝散 （批號：20140502） （5?l）

4. 利肝散 （批號：20140503） （5?l）

5. 利肝散陰性（缺水飛薊藥材）

6. 水飛薊賓對照品 （2?l）

薄層板：聚酰胺薄膜預(yù)制板（100×100mm）

展開劑：甲苯-甲酸乙酯-甲醇-甲酸（30：13：10：2）

展開方式與展距：上行展開9cm；

相對濕度：50%

顯色劑：5%三氯化鋁乙醇溶液

檢視：置365nm紫外燈下檢視

2.展開溫度考察

對選定的展開劑進(jìn)行了4℃～8℃（冰箱）、15℃（冷水浴）、25℃（空調(diào)室）、35℃（烘箱）的溫度考察，結(jié)果表明，在溫度4～35℃下，均可實現(xiàn)水飛薊賓斑點的分離，其中以15℃、25℃為其最佳展開溫度。（圖2）

（六）點樣方式和點樣量考察

本試驗點樣方式為條狀點樣。

本實驗對照品點樣量為2?l，供試品點樣量為5?l，在此條件下，斑點顯色清晰，分離度好。

綜上所述，本制劑水飛薊藥材薄層鑒別條件為：室溫下，在45%～65%濕度條件下，采用條狀點樣，飽和15分鐘后，上行展開10cm。

三、結(jié)論與討論

本制劑對水飛薊賓薄層色譜研究采用聚酰胺薄膜作為薄層固定相，對照品和制劑中主要色譜斑點顯色清晰。對選定的展開劑進(jìn)行了飽和15分鐘，在溫度為15～25℃、濕度為45%～65%的相對濕度下分離效果最佳。

參考文獻(xiàn)

[1]《中華人民共和國藥典》2010年版一部.國家藥典委員會.

[2]中藥薄層色譜分析技術(shù)與應(yīng)用.中國醫(yī)藥科技出版社.

[3]常用中藥薄層色譜鑒定.化學(xué)工業(yè)出版社.

（作者單位：四川省三星堆制藥有限公司）