劉學(xué)武 方大雨 關(guān)永明

馬鈴薯（Solanurn tuberosurn），茄科、茄屬作物，作為一種蔬菜，深受人們的喜愛。目前在我國(guó)的栽培面積大約有500多萬公頃，已經(jīng)成為世界上栽培面積最大的國(guó)家，但在其繁殖過程中退化問題比較嚴(yán)重，癥狀是葉片卷縮，產(chǎn)量降低，實(shí)驗(yàn)研究表明，病毒浸染是其退化的根源。因此生產(chǎn)脫毒種薯成了在馬鈴薯生產(chǎn)過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，常用的馬鈴薯脫毒技術(shù)是莖尖組織培養(yǎng)，下面介紹一下馬鈴薯的莖尖脫毒技術(shù)。

1 取材

進(jìn)行脫毒培養(yǎng)的材料，可以直接從大田取。一般當(dāng)苗高約15厘米時(shí)，將頂端切下6～8厘米，去掉下面2片葉，在切口處涂上生根激素后，把切條植入一個(gè)口徑為10厘米、內(nèi)裝有消毒營(yíng)養(yǎng)土的花盆中，然后用玻璃燒杯罩上，保持10天。然后將其轉(zhuǎn)入生長(zhǎng)箱中，光照3 000～

4 000Lx，每天光照16小時(shí)。兩周后去掉頂芽，以促使腋芽的生長(zhǎng)。當(dāng)腋芽長(zhǎng)出約1～2厘米時(shí)，折下腋生枝，用于消毒，接種。

2 消毒及接種

一般來說，莖尖分生組織由于彼此重疊的葉原基的嚴(yán)密保護(hù)，只要仔細(xì)解剖，不進(jìn)行表面消毒也能得到無菌的外植體，但分生組織不帶菌，并不等于包在它外面的葉片及其下部的莖段不帶菌，將外植體從超凈臺(tái)外面的空間拿進(jìn)去可能會(huì)帶進(jìn)一些菌。因此，在切取外植體之前仍需對(duì)莖芽進(jìn)行表面消毒。常用的消毒方法是，先剝?nèi)ゴ笕~片，用自來水沖洗干凈，在75%酒精中浸泡30秒鐘左右，用1%～3%次氯酸鈉或5%～7%的漂白粉溶液消毒10～20分鐘（或用0.1%HgCl2消毒數(shù)分鐘），最后用無菌水沖洗材料4～5次。

接種時(shí)，先把解剖顯微鏡置于超凈工作臺(tái)，然后把莖芽置于解剖鏡下，左手用一把鑷子將它按住，右手用解剖針將葉片和葉原基剝掉。當(dāng)形似一個(gè)閃亮半圓球的頂端分生組織充分暴露出來后，用鋒利的長(zhǎng)頸刀片將分生組織切下來，一般以0.2～0.3毫米，帶1～2個(gè)葉原基為好，然后再用刀片將其接種到培養(yǎng)基上。

3 培養(yǎng)

能否培養(yǎng)成功，關(guān)鍵之一是培養(yǎng)基。經(jīng)過多次實(shí)踐表明，MS基本培養(yǎng)基不論在成苗率還是脫毒率上都是最好的。除了MS基本培養(yǎng)基外，“More”、“Kassanis”作為基本培養(yǎng)基的效果也比較好，總之，提高培養(yǎng)基中銨鹽和鉀鹽濃度，有利于莖尖成活。另外在培養(yǎng)基中添加一定量的GA，能促進(jìn)莖尖的生長(zhǎng)。不過注意加入GA后生長(zhǎng)加快，但當(dāng)長(zhǎng)到4～5毫米后生長(zhǎng)便停止了，除非有高濃度的鉀和銨。細(xì)胞分裂素類物質(zhì)為6BA，濃度為0.5mg/L左右。常用的生長(zhǎng)素類為NAA，濃度范圍為0.1～1.0mg/L。當(dāng)新稍長(zhǎng)2～3厘米時(shí)，轉(zhuǎn)至生根培養(yǎng)基（MS基本培養(yǎng)基或MS基本培養(yǎng)基加NAA0.1～0.5mg/L）。

另外在培養(yǎng)中注意培養(yǎng)的環(huán)境條件，培養(yǎng)溫度為23～25℃，每天光照16小時(shí)，濕度為70%～80%。

4 病毒鑒定

馬鈴薯病毒鑒定的方法主要有指示植物法、癥狀鑒定法。馬鈴薯的病毒指示植物有千日紅（Gorphren globosa）和一種藜屬植物Chenopodium amaranticolor。具體方法為：從被檢植株上取下葉片，置于等容積（W/V）

的緩沖液（0.1mol/L磷酸鈉）中，研成勻漿。在指示植物的葉片上撒上少許600號(hào)金剛砂，然后將被檢植物的葉汁液涂于其上，并稍加摩擦，以使指示植物葉表面細(xì)胞受到浸染，但又不要損傷葉片。約5分鐘后，用水輕輕洗去接種葉片上的殘余汁液。如果一周后表現(xiàn)病毒病癥狀，則說明被檢再生植株沒有脫除病毒，否則就是脫除了病毒。

5 無毒材料的保存

一個(gè)無病毒品種需經(jīng)過脫毒與檢測(cè)兩個(gè)方面的處理才可以獲得，因而代價(jià)很高。但無病毒植株并沒有獲得額外的抗病性，它還可能被同一病毒或不同病毒感染。為此，應(yīng)該將無毒原種種在溫室或防蟲罩內(nèi)滅過菌的土壤里，以防止蚜蟲傳毒及各種條件下的機(jī)械傳播。在大規(guī)模繁殖這些植株時(shí)，應(yīng)該把它們種植在田間隔離區(qū)內(nèi)，或采用春播早留種和夏播留種的方法，也可以把經(jīng)過莖尖脫毒處理的無病毒植株再通過離體培養(yǎng)進(jìn)行繁殖與保存。