安鳳娟　何宇新

摘要 金釵石斛是我國(guó)的名貴中藥，化學(xué)成分主要有多糖類、生物堿類和酚類等，其中多糖為主要成分之一。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，金釵石斛多糖具有調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤和抗氧化等功能，引起了眾多專家學(xué)者的廣泛關(guān)注。文中分類綜述了金釵石斛多糖的含量、結(jié)構(gòu)分析及生物活性等方面的研究工作，為金釵石斛多糖的開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供參考。

關(guān)鍵詞 金釵石斛（Dendrobium nobile Lindl.）；多糖；結(jié)構(gòu)分析；生物活性

中圖分類號(hào) S567；Q539 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2014）13-03857-06

Abstract Dendrobium nobile， is widely used in traditional Chinese and folk medicine， contains a variety of chemical constituents， such as polysaccharides， alkaloids， polyphenolsand so on. Modern pharmacological studies showed that bioactivities， such as immunomodulatory， antitumor， and antioxidant properties， have been found for Dendrobium nobile polysaccharides， which has provoked widespread concern among many experts and scholars. The recent progresses of polysaccharide from Dendrobium nobile on content， structure analysis and biological activity were summarized in this review， which can provide curtain theory for the development and application of Dendrobium nobile polysaccharides.

Key words Dendrobium nobile； Polysaccharide； Structure analysis； Biological activity

金釵石斛（Dendrobium nobile Lindl.）是蘭科（Orchidaceae）石斛屬（Dendrobium）多年生附生草本植物，是中國(guó)藥典記載的主要石斛品種之一，主要以新鮮或干燥莖入藥[1]。金釵石斛素有“千金草”之稱，馳名中外，被國(guó)際藥用植物界稱為“藥界大熊貓”，被道家稱為中華9大仙草之首[2]。在我國(guó)金釵石斛主要產(chǎn)于秦嶺以南的各個(gè)省區(qū)，主要產(chǎn)區(qū)有廣西、貴州、四川和云南等[3-6]。幾十年來(lái)，中外學(xué)者對(duì)金釵石斛的化學(xué)成分和藥理作用進(jìn)行了大量研究，發(fā)現(xiàn)金釵石斛化學(xué)成分多種多樣。以往對(duì)金釵石斛的研究主要集中在小分子成分的研究上，如酚類，菲類，倍半萜類和生物堿等，對(duì)其生物活性大分子的研究不多[7-12]。多糖類物質(zhì)是生命代謝不可缺少的重要物質(zhì)，是由多個(gè)單糖或其衍生物聚合而成的大分子活性化合物[13]。近期研究表明，金釵石斛多糖是金釵石斛的主要活性成分之一，具有抗腫瘤、抗氧化、免疫促進(jìn)和抗白內(nèi)障等活性[14-18]。筆者就金釵石斛多糖的含量、結(jié)構(gòu)分析及藥理作用等方面的研究工作進(jìn)行綜述?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 金釵石斛多糖的含量研究

金釵石斛多糖類成分含量不高[19-20]。不同器官組織、不同生長(zhǎng)期多糖含量不同，且不同生長(zhǎng)條件下，多糖含量也不盡相同，甚至加工前后多糖的含量也有很大差別。傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)認(rèn)為，金釵石斛的質(zhì)重、嚼之粘牙、味甘、無(wú)渣者為優(yōu)品，多糖含量較高[2]。包英華等采用徒手切片法對(duì)金釵石斛多糖進(jìn)行組織化學(xué)定位研究[21]，結(jié)果表明金釵石斛多糖主要分布在根的皮層薄壁細(xì)胞、莖的中部和內(nèi)部的薄壁細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和葉片皮層薄壁細(xì)胞內(nèi)。從不同器官多糖含量比較來(lái)看，2種石斛的多糖含量呈現(xiàn)莖>葉>花>根的趨勢(shì)，且相互之間存在明顯差異。吳慶生發(fā)現(xiàn)，多糖含量按此方式分布，可能是因?yàn)樘鞘强恐参锶~綠體的光合作用產(chǎn)生的，隨著光合能力逐漸減弱，糖的生成和積累也逐漸減少[23]。因而以上（梢）部為最高，藥用時(shí)首先考慮這個(gè)部位；莖下部雖枯老，但其含量并不比中部低，有的甚至更高，與中、上部呈相似分布，因此這部分藥材仍可藥用；而且其葉片中多糖含量也不低。因此，在實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)重視金釵石斛葉片的開(kāi)發(fā)利用，可提高資源的綜合利用效率[21]。

不同月份采收的金釵石斛多糖含量差異較大，無(wú)論是野生金釵石斛還是組培金釵石斛，3月份時(shí)多糖含量最低，從3月到第2年1月總體呈上升趨勢(shì)，7月份前后金釵石斛多糖的含量在稍有下降后持續(xù)升高，10月份左右含量達(dá)到最高，11月份略有降低，總體仍相對(duì)較高，12月份開(kāi)始降低[21-22]。綜合多糖和生物堿的含量變化以及生物量的因素，并結(jié)合考慮傳統(tǒng)的采收期，最佳采收期在10月到11月之間較為適宜[24]。

隨著生長(zhǎng)期的延長(zhǎng)，金釵石斛體內(nèi)水溶性多糖累積出現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)，在第1年基本達(dá)到飽和，在第2年達(dá)2.83%，為最高值，但在3年齡金釵石斛體內(nèi)水溶性多糖含量則降低到2.25%[25]。王令儀也研究了貴州赤水人工栽培的不同生長(zhǎng)期金釵石斛多糖含量，發(fā)現(xiàn)金釵石斛1、2、3年生多糖含量分別是7.74%、2.75%和2.20%[26]。金釵石斛多糖含量1年生最高，是2年生和3年生金釵石斛多糖含量的3倍，且隨著年份的延長(zhǎng)，其含量依次遞減。結(jié)合多糖和生物堿的含量變化，故金釵石斛以1年采收為最佳。

不同產(chǎn)地金釵石斛的水溶性多糖含量之間存在明顯差異，楊立昌等發(fā)現(xiàn)赤水與其他3個(gè)產(chǎn)地之間有極顯著差異（P<0.01）[25]。其中，以赤水產(chǎn)金釵石斛為最高（2.290%），合江產(chǎn)金釵石斛為最低（1.893% ）；以鮮重計(jì)算的話，則4個(gè)產(chǎn)地金釵石斛的水溶性多糖含量之間存在顯著差異（P<0.05）。水溶性多糖含量最高和最低的產(chǎn)地分別是羅甸和赤水，依次為0.365 7%和 0.277 2%。王燕燕等比較了各地區(qū)金釵石斛多糖含量，發(fā)現(xiàn)各地區(qū)金釵石斛多糖含量各不相同，其中以貴州習(xí)水所產(chǎn)金釵石斛多糖含量最高，海南東方霸王嶺下生長(zhǎng)的金釵石斛多糖含量最低[13]。還發(fā)現(xiàn)貴州的2份樣品多糖含量較其他產(chǎn)地的高，在采樣過(guò)程中，貴州習(xí)水的海拔最低，貴州赤水的海拔較其略高一些，推測(cè)海拔的高低與植物多糖的含量累積有一定的相關(guān)性。

在溫室中馴化栽培與野外栽培相比，前者具有方便、成本低、利于控制石斛生長(zhǎng)條件的優(yōu)勢(shì)。楊立昌等以貴州赤水產(chǎn)金釵石斛為試驗(yàn)材料，研究了野外栽培和溫室栽培過(guò)程中的金釵石斛體內(nèi)水溶性多糖的累積[25]。結(jié)果表明，栽培環(huán)境顯著影響水溶性多糖含量，特別是以干重計(jì)算，野外和溫室栽培條件下金釵石斛水溶性多糖含量分別為2.325 0%和2.106 7%，存在極顯著差異（P<0.01）。章金輝等發(fā)現(xiàn)，野生石斛的莖段多糖含量與組培金釵石斛沒(méi)有顯著差異，但其他器官，組培金釵石斛與野生金釵石斛的多糖含量具有顯著性差異[22]。目前隨著野生金釵石斛資源的匱乏，以組培快繁、溫室大棚種植的趨勢(shì)越來(lái)越被社會(huì)采用，因此，組培金釵石斛具有很好的開(kāi)發(fā)潛力和替代應(yīng)用的可行性。

采集后的處理方法對(duì)石斛多糖含量的影響較大，如自然曬干的金釵石斛總多糖含量降低，莖上段的多糖含量較烘干處理的下降了50.35%，根部的含量則上升了90.63%。這是由于自然曬干過(guò)程中，石斛植物仍保持著呼吸作用，需用消耗一定量的糖分來(lái)維持有機(jī)體的生理活動(dòng)，其中莖尖呼吸作用最旺盛，同時(shí)多糖在石斛植株全草的不同部位發(fā)生了運(yùn)輸和滲透平衡，直至失水死亡，這一過(guò)程可持續(xù)數(shù)月[27]。陳照榮等比較了金釵石斛干品、清炒石斛、酒炙石斛3種炮制品的多糖溶出率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)酒炙法炮制的石斛的的多糖含量明顯高于其他炮制方法[28]。因此在試劑應(yīng)用中可采用酒炙的方法預(yù)先炮制，這樣既可以節(jié)省煎煮時(shí)間，又可提高藥物的利用率，增加療效，同時(shí)還有利于石斛資源的有效利用和保護(hù)。

2 金釵石斛多糖的結(jié)構(gòu)分析

多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)包括單糖殘基組成、單糖殘基排列順序、相鄰糖殘基連接方式、糖鏈分支等，其對(duì)多糖發(fā)揮藥理活性有著重要的意義。蔣玉蘭等研究總結(jié)了近5年來(lái)金釵石斛均一多糖的分子量分布和單糖組成，發(fā)現(xiàn)金釵石斛的多糖往往由幾個(gè)不同分子量范圍的組分構(gòu)成，且不同分子量均一組分的單糖組成也不相同[16]。

Luo等從金釵石斛粗多糖中分離出4個(gè)組分，它們的分子量分別為136、27.7、11.8和11.4 kD，單糖組成分析表明這4個(gè)組分都主要包含甘露糖、葡萄糖、半乳糖和少量的鼠李糖、阿拉伯糖和木糖[29]。從金釵石斛莖中分離出一種新的水溶性多糖DNP（8.76×104 Da）。單糖分析表明，DNP主要由甘露糖（17.0%），葡萄糖（63.3%），半乳糖（16.5%），以及少量的鼠李糖（0.5%），阿拉伯糖（1.2%）和木糖（1.5%）組成，其摩爾比為30.8∶118.0∶31.8∶1.0∶2.8∶2.2。研究發(fā)現(xiàn)，DNP的主鏈由（1→6）Glcp，和（1→6）Galp組成，支鏈由（1→4）βGlcp和（1→4）βManp殘基組成；發(fā)現(xiàn)從金釵石斛莖中已分離出的多糖，大部分是由 （1→4） （1→6）Man，（1→3）Man，（1→4）Man或Glc，（1→4） （1→6）Man或Glc組成[3031]。

王軍輝將DNPW進(jìn)一步分離純化，獲得7個(gè)均一多糖組分DNPW1A、DNPW1B、DNPW2、DNPW3、DNPW4、DNPW5和DNPW6[32]；并采用化學(xué)（甲基化分析、高碘酸氧化Smith降解反應(yīng)、部分酸水解）與波譜學(xué)（UV、IR、GC、GCMS、ESIMS、NMR）結(jié)合的手段，對(duì)各均一多糖的一級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征。結(jié)果表明，DNPW1A是由Man、Glc和Gal組成的半乳葡甘聚糖，主鏈由 （1→6）αManp和 （1→3）αManp組成，Glcp和Galp殘基支鏈分別通過(guò)（1→6）αManp的3位和2位連接在主鏈上。DNPW4是一個(gè)主鏈由β（1→4）Glcp、β（1→6）Glcp及β（1→6）Galp組成的酸性雜多糖。DNPW6為果膠類多糖，由[→4）αGalAp （1→2）αRhap（1→]二糖重復(fù)單位構(gòu)成主鏈，DNPW6主鏈Rhap的4位存在分支，支鏈區(qū)包括半乳糖區(qū)域和葡萄甘露糖區(qū)域。

DNPW1B為均一多糖組分，分子量為7.7×105 Da。DNPW1B的比旋度[α]20D=+81.3°（c 0.3，H2O），紫外掃描結(jié)果表明DNPW1B不含肽或蛋白質(zhì)。在DNPW1B的紅外光譜中，890 cm-1處的特征峰為β吡喃型葡萄糖的吸收峰，810及870 cm-1附近無(wú)吸收峰，表明不含甘露糖。糖醛酸含量測(cè)定結(jié)果表明，DNPW1B不含糖醛酸。單糖組成分析表明，DNPW1B由葡萄糖、阿拉伯糖和半乳糖3種單糖組成其摩爾比為6.2∶3.1∶0.9。甲基化分析結(jié)果表明，組成DNPW1B的3種殘基共有6種連接方式即1Glcp，1，3 Araf ，1 Araf ，1，6Glcp ，1，4 Glcp，1，4，6 Glcp，摩爾比為0.8∶2.1∶1.0∶2.9∶1.1∶2.9。非還原末端糖殘基連接與具有分支的糖殘基連接摩爾比基本相等，表明DNPW1B已完全甲基化。三取代糖殘基的存在，表明DNPW1B具有分支結(jié)構(gòu)。DNPW1B是一個(gè)阿拉伯半乳葡聚糖，擁有[→4）βGlcp（1→6） βGlcp（1→]二糖單位的主鏈結(jié)構(gòu)，在β（1→6）Glcp的4位形成分支，支鏈由Galp和Arap殘基組成。綜上所述，DNPW1B是一個(gè)以 [→4）βGlcp（1→6） βGlcp（1→]二糖單位為主鏈的半乳阿拉伯葡聚糖，在β（1→6）Glcp的4位形成分支，支鏈由末端Galp和Araf及1，3 Araf組成。比較發(fā)現(xiàn)，DNPW1B的單糖組成比例及各糖殘基連接方式之間組成的重復(fù)結(jié)構(gòu)特征與已報(bào)道的石斛多糖都不同，是一個(gè)石斛中獲得的具有新結(jié)構(gòu)特征的多糖化合物[32-33]。

DNPW2是一個(gè)部分乙?；陌肴楦事镀暇厶?，主鏈由β（1→4）Glcp、β（1→6）Glcp及β（1→4）Manp組成，其中部分β（1→4）Glcp及β（1→4）Manp的6位連接有末端Galp。DNPW2為均一多糖組分，分子量為18 kDa。DNPW2的比旋光度[α]20D=+81.6°。糖醛酸含量測(cè)定結(jié)果表明，DNPW2不含糖醛酸。GC分析表明DNPW2主要由葡萄糖、甘露糖和半乳糖（摩爾比為6.1∶2.9∶2.0），以及少量的阿拉伯糖組成，DNPW2所有的糖殘基都為D構(gòu)型。甲基化分析結(jié)果表明，主要組成DNPW2的3種殘基共有6種連接方式即2，3，4，6Me4Galp，2，3，6Me3Manp，2，3Me2Manp，2，3，4Me3Glcp，2，3，6Me3Glcp，2，3Me2Glcp，摩爾比為2.0∶1.9∶0.9∶1.3∶4.0∶1.1，以及少量的2，3，5Me3Araf。結(jié)果表明，DNPW2具有分支結(jié)構(gòu)。非還原末端殘基的摩爾比約等于該分支殘基的摩爾比，這表明DNPW2已完全甲基化。綜上所述，DNPW2是一個(gè)部分乙?；陌肴楦事镀暇厶牵麈溣搔拢?→4）Glcp、β（1→6）Glcp及β（1→4）Manp組成，其中部分β（1→4）Manp的2位被乙?；鶊F(tuán)取代，β（1→4）Glcp及β（1→4）Manp的6位連接有末端Galp[32，34]。

DNPW3為阿拉伯半乳聚糖，主鏈由β（1→3） Galp組成，在其4位連接Arap和Rhap殘基支鏈。DNPW3為均一多糖組分，分子量為71 kDa。DNPW3的比旋光度[α]20D=+19.6°（c 0.5，H2O）。紫外掃描結(jié)果表明，DNPW3在280 nm處無(wú)吸收，不含肽或蛋白質(zhì)。GC分析表明DNPW3主要由半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖組成，其摩爾比為3.1∶1.1∶1.0，以及少量的阿拉伯糖。DNPW3的鼠李糖、阿拉伯糖殘基是L構(gòu)型，半乳糖殘基是D構(gòu)型。糖醛酸含量測(cè)定結(jié)果表明，DNPW3不含糖醛酸。甲基化分析結(jié)果表明，主要組成DNPW3的3種殘基共有4種連接方式即2，3，5Me3Arap，2，3Me2Rhap，2，4，6Me3Galp，2，6Me2Galp，摩爾比為0.9∶1.1∶2.0∶1.1。非還原末端殘基的摩爾比約等于該分支殘基的摩爾比，這表明DNPW3已完全甲基化。綜上所述，DNPW3為阿拉伯半乳聚糖，主鏈由β（1→3）Galp組成，在Galp的4位形成分支，支鏈由Arap和Rhap殘基組成。顯然DNPW3的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與已報(bào)道的石斛多糖都不同，是1個(gè)石斛中獲得的具有新結(jié)構(gòu)特征的多糖化合物[32，35]。

果膠多糖DNPW5為均一多糖組分，分子量為4.6×105 Da。DNPW5的比旋光度[α]20D=-12.1°（c 0.5，H2O）。紫外掃描結(jié)果表明，DNPW3在280 nm處無(wú)吸收，說(shuō)明不含肽或蛋白質(zhì)。DNPW5的紅外光譜中，1 720 cm-1附近有弱吸收峰，表明DNPW5含有糖醛酸或乙?；?。間羥基聯(lián)苯法測(cè)定它含有14.2%糖醛酸。TLC分析表明DNPW5包含甘露糖（11.0%），葡萄糖（28.8%），半乳糖（29.2%），木糖 （2.1%），鼠李糖 （14.9%）和半乳糖醛酸（13.9%）。GC分析表明DNPW5主要由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、鼠李糖和半乳糖醛酸組成，摩爾比為3.1∶8.1∶8.2∶0.6∶4.2∶3.9。其中半乳糖醛酸中有21%以甲酯形式存在且乙?；窟_(dá)到6.9%。試驗(yàn)結(jié)果表明，DNPW5是RGII的多糖，以2糖重復(fù)單位[→4GalAp（1→2） Rhap1→]為主鏈，在Rhap的4位和Manp的3位存在分支。Rhap的4位存在側(cè)鏈，包含β（1→4）Glcp，β（1→6）Manp，β（1→6）Galp及末端Galp。1，3，4GalAp的3位連接著Xylp。側(cè)鏈被進(jìn)一步取代，Manp的3位被末端和β（1→6）Glcp殘基取代，Galp的3位被末端和β（1→6）Galp取代[32，36]。

3 金釵石斛多糖的生物活性

3.1 免疫調(diào)節(jié)作用 陳志國(guó)等研究了金釵石斛水溶性粗多糖（DNCP）和粗多糖的脫蛋白樣品（DNPP）對(duì)小鼠脾細(xì)胞的增殖的影響，發(fā)現(xiàn)DNCP和DNPP在體外一定濃度下均能明顯促進(jìn)小鼠脾細(xì)胞的增殖，且隨著濃度的增高其對(duì)脾淋巴細(xì)胞的增殖作用越強(qiáng)，兩者存在正比例關(guān)系[37]。DNCP和DNPP（25和50 mg/L）可顯著提高ConA誘導(dǎo)小鼠的T淋巴細(xì)胞增殖和LPS誘導(dǎo)小鼠的B淋巴細(xì)胞的增殖（P<0.01）。相同的劑量（25或50 mg/L）下，DNCP對(duì)小鼠脾細(xì)胞增殖的效力均高于DNPP （P>0.05）[31]。

王軍輝等發(fā)現(xiàn)DNPW1B對(duì)Con A誘導(dǎo)的脾T淋巴細(xì)胞和LPS誘導(dǎo)的脾B淋巴細(xì)胞的體外增殖具有顯著的促進(jìn)作用，且促進(jìn)作用隨著DNPW1B濃度的增加而加大，呈現(xiàn)劑量依賴性關(guān)系。當(dāng)添加的 DNPW1B為200 μg/ml時(shí)，T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的增殖率分別為對(duì)照的6.3與4.6倍[33]。

Wang等研究了不同濃度的多糖的樣品（DNPW、DNPW2、DNPW3、HDNPW2和HDNPW3）對(duì)脾的T和B淋巴細(xì)胞的影響[34-35]。研究結(jié)果表明，DNPW、DNPW2、DNPW3、HDNPW2可顯著促進(jìn)脾的T和B淋巴細(xì)胞的增殖（P<0.05），并且隨著多糖的濃度的增加淋巴細(xì)胞增殖作用增強(qiáng)。然而，HDNPW2、HDNPW3在低劑量時(shí)對(duì)體外淋巴細(xì)胞增殖沒(méi)有影響，且在高劑量時(shí)對(duì)體外淋巴細(xì)胞增殖的效果極微。構(gòu)效關(guān)系表明，DNPW2的分支對(duì)其免疫活性的增強(qiáng)的表達(dá)不重要， 而DNPW3的分支對(duì)其免疫活性增強(qiáng)的表達(dá)是極其重要的。

Wang等還發(fā)現(xiàn)DNPW5顯示出對(duì)T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞顯著的免疫增強(qiáng)活性，其分支和乙酰基是非常重要的免疫學(xué)活性的表達(dá)[36]。構(gòu)效關(guān)系的研究表明，果膠無(wú)支鏈的區(qū)域具有低的活性，并且高度支化的區(qū)域具有較高的活性。

李小瓊等發(fā)現(xiàn)金釵石斛多糖干預(yù)LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞后，TNFα和NO分泌減少，而金釵石斛多糖濃度越高，TNFα、NO的分泌、iNOS活性及TNFα mRNA、iNOS mRNA表達(dá)下降越明顯（P<0.05）[38]；表明金釵石斛多糖可通過(guò)抑制TNFα、NO的產(chǎn)生發(fā)揮抗炎作用，其可能的機(jī)制與金釵石斛多糖抑制小鼠腹腔臣噬細(xì)胞TNFα mRNA、iNOS mRNA的表達(dá)有關(guān)，這為金釵石斛的臨床應(yīng)用奠定了一定的理論基礎(chǔ)。

張俊青等觀察了不同濃度的石斛多糖（0.025、0.250和2.500 mg/L）對(duì)細(xì)胞激活的影響[39]，發(fā)現(xiàn)LPS刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞后MTS檢測(cè)吸光度明顯升高，NO含量、TNFα和IL6 mRNA及其蛋白表達(dá)均明顯升高，與正常組比較有顯著性差異（P<0.01）；石斛多糖3個(gè)劑量組對(duì)LPS誘導(dǎo)的NO釋放具有改善作用（P<0.05）。研究結(jié)果顯示，石斛多糖能明顯抑制LPS所誘導(dǎo)的大腦皮質(zhì)Ac內(nèi)NO的釋放，提示其可能是金釵石斛抗炎作用的主要有效成分。

3.2 抗氧化作用 金釵石斛多糖在體外具有一定的清除-OH和氧自由基的能力，在體內(nèi)能顯著提高正常小鼠血清和肝組織中SOD、GSHPx的活性，并明顯降低正常小鼠肝組織中MDA水平，說(shuō)明石斛多糖具有顯著的抗氧化作用[31，40]。

Luo等在初步的體外活性試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)DNP對(duì)ABTS自由基表現(xiàn)出較高自由基清除活性（78.00%），尤其在2.0 mg/ml時(shí)清除活性近似于維生素C[30]。DNP在各濃度點(diǎn)對(duì)羥基自由基的清除效果都弱于維生素C，但在0.5 mg/ml時(shí)清除活性近似于維生素C（50.09%～60.02%）。但DNP 在每個(gè)濃度點(diǎn)對(duì)DPPH自由基表現(xiàn)出非常低的自由基清除活性，且比維生素C低得多。因此，DNP對(duì)DPPH自由基清除無(wú)顯著作用。綜上所述，DNP可作為一種新的潛在的抗氧化劑。

Luo等還發(fā)現(xiàn)純化的多糖對(duì)ABTS自由基清除能力隨濃度增加而增加。此外， DNP42對(duì)ABTS自由基表現(xiàn)出較高的自由基清除活性近似于維生素C[41]。在2.0 mg/ml時(shí)DNP4 2的清除能力最強(qiáng)，達(dá)到82.6%（P<0.05）。ABTS自由基清除能力為維生素C>DNP42> DNP21>DNP31>DNP11。這些結(jié)果表明，DNP42對(duì)ABTS自由基具有較強(qiáng)的清除活性，并應(yīng)作為潛在的抗氧化劑DNP42對(duì)羥基自由基清除活性比DNP11、DNP21和DNP31強(qiáng)（P<0.05），但在 0.1～2.0 mg/ml的范圍內(nèi)大大低于維生素C。DNP11、DNP21和DNP31對(duì)DPPH自由基表現(xiàn)出非常低的自由基清除活性。而在1.0 mg/ml時(shí) DNP4 2的作用稍強(qiáng)（38%），但是比維生素C低得多（95%）。

賓捷等發(fā)現(xiàn)金釵石斛多糖能有效抑制自然衰老小鼠體內(nèi)MDA的升高，使機(jī)體受自由基攻擊程度減低，清除自由基的能力增強(qiáng)，抑制和延緩自由基反應(yīng)[42]。同時(shí)能增加老齡小鼠體內(nèi)抗氧化劑SOD、GSHPx的活性水平。綜上所述，金釵石斛能有效抑制體內(nèi)過(guò)多的自由基及提高體內(nèi)抗氧化酶的活力。金釵石斛對(duì)老齡小鼠具有抗氧化作用，表明金釵石斛多糖的抗衰老與抗氧化有關(guān)[26]。

3.3 抗腫瘤活性 從金釵石斛的水提物分離出四種水溶性多糖（DNP11、DNP21、DNP31和DNP42）。腫瘤抑制和免疫調(diào)節(jié)活性的評(píng)價(jià)顯示，NP42在2.5 mg/ml時(shí)抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)率可達(dá)67.01%。DNP42能顯著增加免疫指標(biāo)，并大力促進(jìn)IL2、TNFα和IFNγ的分泌（P<0.01），同時(shí)也降低MDA濃度血清（P<0.01）。 DNP42可作為一種潛在的抗腫瘤新藥。研究人員認(rèn)為抗腫瘤的活性是由于 DNP42優(yōu)良的增強(qiáng)免疫和抗氧化活性[29，31]。

Wang等對(duì)金釵石斛多糖的抗腫瘤活性進(jìn)行了研究。體內(nèi)活性試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)DNPW有31.3%的抑制生物活性[43]。對(duì)DNPW進(jìn)一步分離純化后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)DNPW1和DNPW3對(duì)Sarcoma180腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)出顯著更高的抗腫瘤活性，抑制率分別為65.3%和61.2%。DNPW2和DNPW4與DNPW表現(xiàn)出類似的抗腫瘤活性，抑制率分別為33.7%和33.4%。對(duì)于DNP W5和DNPW6的抗腫瘤活性數(shù)據(jù)都在體內(nèi)表現(xiàn)出非常低的抗腫瘤活性，抑制率分別10.3%和8.7%。

體外活性試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，所有多糖都表現(xiàn)出對(duì)HL60白血病細(xì)胞的生長(zhǎng)有較強(qiáng)的抑制作用，特別是，DNPW1和DNP W3在200 μg/ml時(shí)顯著呈現(xiàn)超過(guò)80%的高抑制率。MTT試驗(yàn)結(jié)果表明，金釵石斛多糖是有效的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑，相較于貼壁的HepG2腫瘤細(xì)胞，對(duì)懸浮HL60腫瘤細(xì)胞的增殖表現(xiàn)出選擇性高的抗腫瘤活性。綜上所述，DNPW1和DNPW3可作為潛在的抗白血病資源，也可被視為一種有效的抗腫瘤天然源。

另一研究發(fā)現(xiàn)，金釵石斛水提物對(duì)HelaS3和HepG2細(xì)胞有不同程度的抑制作用，且在所選濃度范圍內(nèi)成良好的劑量依賴性和時(shí)間依賴性，形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果驗(yàn)證了其抑瘤作用[44]。

鄭斯卓等[45]在體外培養(yǎng)人白血病K562細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)金釵石斛多糖可抑制K562細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡，且隨劑量和時(shí)間的增加效果增強(qiáng)；金釵石斛多糖可使BCRABL融合基因表達(dá)量下降，且隨多糖濃度增加和作用時(shí)間延長(zhǎng)mRNA表達(dá)量下降明顯。金釵石斛多糖能直接抑制K562細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡，其可能機(jī)制與金釵石斛多糖抑制K562細(xì)胞中BCRABL融合基因mRNA的表達(dá)有關(guān)。金釵石斛多糖可誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡，且這種促凋亡的效應(yīng)隨著濃度和時(shí)間的增加而增加。金釵石斛多糖可有效抑制BCR/ABL融合基因，并隨濃度和作用時(shí)間的延長(zhǎng)，抑制效果增強(qiáng)，由此可以推斷金釵石斛多糖可能通過(guò)抑制BCR/ABL融合基因的表達(dá)來(lái)誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡，從而達(dá)到抗腫瘤效果。

3.4 抗白內(nèi)障 金釵石斛對(duì)眼科疾病有明顯的治療作用。其多糖具有較好的抗糖性白內(nèi)障作用，可下調(diào)iNOS基因的表達(dá)，明顯抑制NOS的活性，減少NO的產(chǎn)生，從而減輕氧化損傷作用，達(dá)到抗白內(nèi)障作用。體外研究表明，金釵石斛的總生物堿和粗多糖均有一定的抗白內(nèi)障作用，而總生物堿的作用優(yōu)于粗多糖[19，46-47]。

王軍輝在抗白內(nèi)障活性試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，金釵石斛水提粗多糖及各均一多糖組分都對(duì)鏈脲佐菌素（STz）誘導(dǎo)的糖尿病性白內(nèi)障有一定的延緩作用，但各多糖處理組之間差異較大，以粗多糖與DNPW1A處理組的效果最好，呈劑量依賴性[32]。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，粗多糖與DNPW1A處理組大鼠晶體混濁程度明顯低于模型及其他多糖處理組，體重增加幅度在150%～190%，血糖下降了25%以上，晶體各清除氧自由基酶活性及GSH含量明顯高于STZ模型組，膜脂過(guò)氧化指標(biāo)MDA與H2O2、蛋白質(zhì)氧化損傷產(chǎn)物、糖基化終產(chǎn)物等含量明顯低于STZ模型組。

龍艷等采用體外構(gòu)建氧化損傷白內(nèi)障模型的方法，對(duì)金釵石斛總生物堿和粗多糖的抗白內(nèi)障作用進(jìn)行探討[48]。發(fā)現(xiàn)模型組可溶性蛋白含量顯著低于正常對(duì)照組，而各用藥組可顯著緩解可溶性蛋白的減少，生物堿高劑量組尤其明顯；同時(shí)，金釵石斛的提取物總生物堿和粗多糖均可提高晶狀體GSH含量及SOD活性，同時(shí)降低MDA活性，即通過(guò)提高晶狀體抗氧化能力而達(dá)到抑制白內(nèi)障的作用。石斛具有抗白內(nèi)障的作用早已被證實(shí)。研究發(fā)現(xiàn)，金釵石斛的兩種藥效部位（總生物堿和粗多糖）在體外可通過(guò)減輕晶狀體的氧化損傷而抑制白內(nèi)障的進(jìn)程，且總生物堿的效果優(yōu)于粗多糖[49]。

3.5 其他作用 李向陽(yáng)等觀察了金釵石斛多糖對(duì)Wistar大鼠高脂血癥和肝臟脂肪變性的影響，發(fā)現(xiàn)金釵石斛多糖能明顯降低高脂血癥Wistar大鼠血清中總膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白含量（P<0.05），使高密度脂蛋白水平明顯升高（P<0.05），并具有改善高脂血癥Wistar大鼠肝臟脂肪變性的作用[50]。綜上所述，金釵石斛多糖對(duì)高脂血癥大鼠血脂代謝異常具有調(diào)節(jié)作用，能夠有效減輕高脂血癥大鼠肝臟組織的脂肪變性。金釵石斛多糖能有效降低高脂血癥大鼠血清中TC、TG和LDLC的含量，升高血清中HDLC的含量，降低肝臟指數(shù)，降低肝臟組織中MDA的含量和升高SOD的活性，并具有減輕高脂血癥大鼠肝臟脂肪變性作用。

李菲等觀察金釵石斛多糖和生物堿對(duì)正常小鼠及腎上腺素性高血糖小鼠血糖的影響[51]。金釵石斛多糖和生物堿對(duì)腎上腺素引起的高血糖小鼠有明顯的降血糖作用，但對(duì)正常小鼠血糖無(wú)明顯影響。研究結(jié)果表明，金釵石斛多糖和生物堿均能顯著降低腎上腺素所致小鼠血糖升高，可能機(jī)制是抑制肝糖元分解和肌糖元酵解，促進(jìn)外周組織對(duì)葡萄糖的攝取和利用，從而降低血糖。

陶鳳研究發(fā)現(xiàn)，金釵石斛明顯性降低血糖、糖化血紅蛋白、血尿素、24 h尿白蛋白水平、腎臟指數(shù)、增加肌酐清除率、減輕系膜的擴(kuò)張和基底膜的增厚，從而表明金釵石斛水提物有可能通過(guò)降低血糖延緩糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展[52]。這也證實(shí)了金釵石斛水提物能通過(guò)降低血糖、抑制非酶糖基化和氧化應(yīng)激的發(fā)生，改善糖尿病大鼠腎功能、減輕其病理變化，從而延緩糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展，為探討金釵石斛對(duì)糖尿病腎保護(hù)作用機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。

金徽發(fā)現(xiàn)金釵石斛水煎劑能減少大鼠血清中AGE的生成，下調(diào)腎組織中受體蛋白R(shí)AGE的含量，可能的機(jī)理是其降低血糖減少糖基化反應(yīng)進(jìn)程及其修飾生物大分子導(dǎo)致蛋白質(zhì)理化性質(zhì)改變，易被酶降解使其含量減少，或蛋白非酶糖基化反應(yīng)減輕，從而對(duì)DM大鼠的腎臟起到了積極的保護(hù)作用[53]。金釵石斛通過(guò)抑制蛋白非酶糖基化來(lái)保護(hù)DM大鼠腎臟的機(jī)制可能是因?yàn)榻疴O石斛具有降血糖和抗氧化作用，對(duì)高血糖誘導(dǎo)的AGE形成具有一定的抑制。因此使AGE生成量減少，血液中AGE的含量降低，從而減少AGE在腎小球系膜及基膜的沉積；另外，金釵石斛提取物可以降低DM大鼠血清中AGE的水平，也可能對(duì)AGERAGE具有直接抑制作用，使得AGE與RAGE相互作用所介導(dǎo)的細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)、細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)改變、激活核轉(zhuǎn)錄因子等一系列反應(yīng)減少，從而減緩了腎小球及血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷。

張艷磊等研究認(rèn)為，金釵石斛多糖FDP1可以抑制高糖誘導(dǎo)下的HBZY1細(xì)胞總抗氧化能力的下降、ROS生成的增加；并能夠促進(jìn)Nrf2的核移位，并能增加其表達(dá)量，使更多處于激活狀態(tài)的Nrf2蛋白參與到提高機(jī)體自身對(duì)于氧化還原穩(wěn)態(tài)的反饋調(diào)節(jié)[54]。其可以上調(diào)其下游NADPH醌氧化物還原酶等大部分抗氧化物酶與抗氧化分子，參與對(duì)氧化應(yīng)激的抑制，保護(hù)細(xì)胞正常的代謝運(yùn)行，為金釵石斛多糖對(duì)于糖尿病腎病的防御保護(hù)的作用機(jī)制提供一定的理論基礎(chǔ)。

Pan等比較了4種石斛多糖的降血糖和抗氧化作用，發(fā)現(xiàn)除鼓槌石斛多糖（DCP）外，霍山石斛多糖（DHP）、鐵皮石斛多糖（DOP）及金釵石斛多糖（DNP），均能夠顯著降低四氧嘧啶糖尿病小鼠的FBG和GSP，并能夠增加血清胰島素水平，從而達(dá)到降血糖作用[55]。降血糖能力DHP >DNP>DOP。組織病理學(xué)觀察證實(shí)，DHP、DOP和DNP有干預(yù)胰腺組織損傷的能力。超氧化物歧化酶的測(cè)定，肝腎過(guò)氧化氫酶，丙二醛和L谷胱甘肽水平顯示DHP、DOP和DNP對(duì)四氧嘧啶誘導(dǎo)的氧化損傷有保護(hù)作用，且DHP效果最佳。四種石斛多糖的降血糖和抗氧化作用存在顯著差異，可能是四種石斛多糖的理化性質(zhì)不同。

4 小結(jié)與展望

野生金釵石斛資源日益匱乏，積極開(kāi)發(fā)組培金釵石斛，對(duì)野生石斛資源的保護(hù)能起到積極的推動(dòng)作用，而且其低廉的價(jià)格也能滿足普通大眾的需求。并深入研究金釵石斛多糖成分的作用機(jī)制和構(gòu)效關(guān)系，為多糖成分的應(yīng)用提供進(jìn)一步的科學(xué)依據(jù)，具有重要的理論意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。

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