張倩　解成喜

摘要 [目的]優(yōu)化超聲提取法和雙水相體系相結(jié)合提取一枝蒿總生物堿的工藝，對(duì)一枝蒿總生物堿抗氧化活性進(jìn)行研究。[方法]采用丙醇-硫酸銨雙水相體系與超聲波集成提取一枝蒿中總生物堿，以酸性染料比色法測(cè)定含量；通過考察對(duì)·OH清除和O2-·抑制能力來評(píng)價(jià)一枝蒿總生物堿抗氧化能力。[結(jié)果]一枝蒿總生物堿最佳的提取條件為：硫酸銨用量8 g，丙醇用量25 ml，醇水比0.60∶1條件下超聲提取60 min；在此條件下，一枝蒿中的總生物堿平均提取量0.436 mg/g。當(dāng)總生物堿濃度為200 μg/ml時(shí)，對(duì)·OH清除率達(dá)到67.65%，對(duì)O2-·抑制率達(dá)30.92%。[結(jié)論]該方法建立了一枝蒿總生物堿提取的最佳工藝，發(fā)現(xiàn)總生物堿具有良好的抗氧化活性。

關(guān)鍵詞 超聲波；雙水相；總生物堿；一枝蒿；抗氧化活性

中圖分類號(hào) S567 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2014）13-03851-03

Abstract [Objective] To optimize the extraction process of total alkaloids from Artemisia rupestris by ultrasonic coupled with aqueous two phase system， to study antioxidant activity of total alkaloids. [Methods] Total alkaloids was extracted from Artemisia rupestris using propanolaqueous ammonium sulfate two phase system coupled with ultrasonic and the concentration of total alkaloids was determined with acid dye colorimetric method. Antioxidant activities were evaluated by capacity of total alkaloids for clearing ·OH and controlling O2-·. [Results] The optimum condition was 8.0 g ammonium sulfate， 25 ml propanol， 0.60∶1 propanol/water ratio， 60 min of extraction， 0.436 mg/g extraction rate of total alkaloids. When the concentration of total alkaloids was 200 μg/ml， the scavenging rate of ·OH was 67.65%， and the suppression ratio of O2-· was 30.92%. [Conclusion] The optimum extraction process of total alkaloids from Artemisia rupestris was obtained and the total alkaloids have good antioxidant activity.

Key words Ultrasonic； Aqueous twophase； Total alkaloids； Artemisia rupestris； Antioxidant activity

一枝蒿系菊科為多年生草本植物，藥用全草，具有清熱解毒、抗過敏、利膽和解蛇毒等功效，用于治療消化不良、腹胃脹痛、蛇咬傷、蕁麻疹、感冒發(fā)燒和肝炎等疾病[1]。生物堿是生物體內(nèi)一類重要的含氮的有機(jī)化合物，其大多數(shù)具有生物活性，是許多藥用植物的有效成分[2]。雙水相具有操作簡(jiǎn)便、條件溫和、提取率高、有機(jī)溶劑易于回收等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物、醫(yī)藥、生物以及金屬離子分離等領(lǐng)域[3-6]。試驗(yàn)將超聲提取與雙水相分離技術(shù)集成，將超聲良好的提取作用與雙水相體系的分離作用相結(jié)合，采用超聲集成雙水相體系的提取一枝蒿總生物堿，優(yōu)化出一枝蒿總生物堿的最佳提取工藝，并以酸性染料比色法測(cè)定其含量，對(duì)一枝蒿總生物堿進(jìn)行體外抗氧化活性研究，以期為一枝蒿開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1

研究對(duì)象。一枝蒿，用蒸餾水洗凈后自然陰干，粉碎后過篩備用。

1.1.2

主要儀器。AL204電子天平，購自梅特勒-托利多儀器有限公司；KQ5200B超聲波儀，購自昆山市超聲儀器有限公司；T6新世紀(jì)紫外可見分光光度計(jì)，購自北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，購自上海亞榮生化儀器廠。

1.1.3

主要試劑。鹽酸小檗堿，購自中國藥品生物藥品生物制品檢定所；正丙醇、硫酸銨、三氯甲烷、甲醇、濃氨水、磷酸氫二鈉、檸檬酸、溴百里香草酚藍(lán)，硫酸亞鐵、過氧化氫、鄰二氮菲、磷酸二氫鈉、Tris-HCl緩沖溶液（pH 8.2）和焦性沒食子酸均為分析純，市售。

1.2 方法

1.2.1

標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備。稱取鹽酸小檗堿20 mg，用適量無水甲醇溶解，移入250 ml容量瓶中配制成濃度為0.08 mg/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液。將0.08 mg/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液配制成濃度分別為8、16、32、64和80 μg/ml的鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.2

線性關(guān)系的考察。分別準(zhǔn)確移取濃度為8、16、32、64和80 μg/ml的鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0 ml于25 ml具塞試管中，加入pH=7.6的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液10.0 ml、溴百里香草酚藍(lán)溶液2.0 ml以及三氯甲烷10 ml，劇烈搖試管2 min，移至分液漏斗中靜置90 min，在波長417 nm處測(cè)定吸光值。以吸光度A為縱坐標(biāo)，鹽酸小檗堿質(zhì)量濃度C（μg/ml）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，計(jì)算回歸方程為：Y=0.005 16X+0.081 27，R=0.999 5，線性范圍在8～80 μg/ml內(nèi)線性良好。

1.2.3

新疆一枝蒿總生物堿提取液的制備與測(cè)定。準(zhǔn)確稱取一枝蒿粉末1.000 g于硫酸銨和丙醇雙水相體系中，在一定條件下超聲提取，抽濾后將提取液于分液漏斗中靜置分層，取上層丙醇提取層旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得濃縮液，用鹽酸調(diào)節(jié)濃縮液pH為2～3，靜置過夜，過濾后再用濃氨水調(diào)節(jié)pH為9～10后，用30 ml三氯甲烷分3次萃取，取三氯甲烷萃取層旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去三氯甲烷，用無水甲醇溶解后定至10 ml容量瓶中。準(zhǔn)確移取樣品提取液1.0 ml于25 ml具塞試管中按上述操作測(cè)定吸光度，并計(jì)算總生物堿含量。

1.2.4

單因素試驗(yàn)。以鹽用量、丙醇用量、醇水比、超聲時(shí)間4個(gè)因素進(jìn)行單因素試驗(yàn)。單因素試驗(yàn)因素水平見表1。

3 結(jié)論

試驗(yàn)采用超聲集成雙水相體系提取一枝蒿總生物堿，考察了鹽用量、丙醇用量、醇水比和提取時(shí)間對(duì)一枝蒿總生物堿提取量的影響。正交試驗(yàn)確定了新疆一枝蒿總生物堿的最佳提取工藝條件為硫酸銨用量8 g、丙醇用量25 ml、醇水比0.60∶1，超聲提取60 min；在此條件下的總生物堿的平均提取率為0.436 mg/g。體外抗氧化活性研究表明，一枝蒿總生物堿具有一定清除·OH和抑制O2-·能力。當(dāng)一枝蒿總生物堿濃度為200 μg/ml時(shí)，·OH清除率為67.65%，對(duì)·O2-抑制率達(dá)30.92%。試驗(yàn)采用超聲波集成丙醇-硫酸銨雙水相體系萃取一枝蒿總生物堿，具有分離操作簡(jiǎn)單、條件溫和、成本低和污染小等優(yōu)點(diǎn)。

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