(貴州省遵義市食品藥品檢驗所，貴州 遵義 563000)

八味和胃口服液由五靈脂、竹茹、延胡索(醋制)、木香、五味子、甘草、麥冬、沙參八味等組方[1]。有養(yǎng)陰和胃、理氣止痛的功效，適用于胃陰虛證導(dǎo)致的胃中嘈雜、胃脘隱痛、口燥咽干、大便干結(jié)。該制劑原質(zhì)量標(biāo)準中延胡索乙素含量測定采用紫外分光光度法[2]，受其溶液顏色影響，干擾較大。為了有效控制該制劑的質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜法(HPLC)法測定延胡索乙素的含量，該方法操作簡便、準確、重復(fù)性好，可為八味和胃口服液質(zhì)量標(biāo)準的提升提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent 1260型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)；ABS-204型電子天平(梅特勒-托利多儀器公司)。延胡索乙素對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號為110726-201109)；八味和胃口服液(貴州百花醫(yī)藥股份有限公司，批號分別為130301，130302，130303)；陰性樣品(自制)；乙腈為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Eclise Plus C18柱(100mm×4.6mm，3.5μm)；流動相:乙腈-用三乙胺調(diào)節(jié)pH至6.0的0.1%磷酸溶液(40∶60)；流速:1.0mL/min；檢測波長:280nm；柱溫:30℃。理論板數(shù)按延胡索乙素峰計應(yīng)不低于3000。在此條件下，色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

稱取延胡索乙素對照品12.55 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，取5 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。精密量取本品20 mL，試液調(diào)節(jié)(pH=10～11)，用乙醚100 mL水浴回流提取2次，每次15 min，合并乙醚液，低溫蒸干，將殘渣用甲醇溶解移入10 mL容量瓶中，定容至刻度，濾過，取續(xù)濾液，用微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。按處方工藝制備缺延胡索藥材的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學(xué)考察

干擾試驗:分別吸取陰性對照品溶液、對照品溶液及供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀。結(jié)果供試品溶液色譜中，延胡索乙素峰保留時間與對照品峰的保留時間一致，陰性無干擾。色譜圖見圖1。

線性關(guān)系考察:精密吸取對照品溶液 2，5，10，15，20 μL，按擬訂色譜條件進樣，測定峰面積，以對照品質(zhì)量濃度(X，μg/mL)為橫坐標(biāo)、峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)進行線性回歸，得回歸方程 Y=10.270 X-3.014 6，r=0.999 8(n=5)。結(jié)果表明，延胡索乙素質(zhì)量濃度在5.02～50.2 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗:取同一對照品溶液，連續(xù)進樣6次，每次10 μL，測定延胡索乙素的峰面積。結(jié)果峰面積平均值為256.5，RSD為0.9%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:精密吸取同一供試品溶液，分別于0，4，8，12，16，24 h時進樣測定峰面積。結(jié)果延胡索乙素峰面積的RSD為0.80%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗:取同一批(批號為130303)樣品，依法平行制備6份供試品溶液，按擬訂色譜條件依法進樣測定。結(jié)果樣品中延胡索乙素的平均含量為12.34 μg/mL，RSD為1.4%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗:精密量取已知延胡索乙素含量(12.34 μg/mL)的樣品10 mL(批號為130303)共6份，精密分別加入延胡索乙素對照品溶液5 mL，按供試品溶液制備方法制備溶液，按擬訂色譜條件依法進樣測定峰面積，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 延胡索乙素加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取樣品3批，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測定峰面積，按外標(biāo)法以峰面積計算樣品含量。結(jié)果批號為130301，130302，130303的樣品中延胡索乙素含量為15.2，12.3，12.5μg/mL(n=3)。

3 討論

在200～400 nm波長范圍內(nèi)，對延胡索乙素對照品溶液進行光譜掃描。結(jié)果延胡索乙素最大吸收波長為282 nm，故選擇測定波長為280 nm。

考察了乙腈-水、甲醇-水、乙腈-0.1%磷酸溶液、甲醇-0.1%磷酸溶液為流動相溶劑系統(tǒng)并調(diào)節(jié)不同pH進行考察[3-5]。結(jié)果表明，乙腈-用三乙胺調(diào)節(jié)pH至6.0的0.1%磷酸溶液(40∶60)為流動相，延胡索乙素色譜峰峰形較好，與其他峰能完全達到分離效果。

在試驗過程中，分別考察了以乙醚作提取溶劑，超聲提取30min和回流提取2次[6-7]的樣品測定結(jié)果，結(jié)果表明，乙醚回流提取2次效果較好。同時考察了回流提取2次(每次10，15，20 min)的提取效果，結(jié)果表明，回流提取15 min，提取2次，提取較完全。因此，采用乙醚回流提取2次，每次15 min。

參考文獻：

[1]WS-60000(B-1000)-2002，國家藥品監(jiān)督管理局藥品標(biāo)準(試行)[S].

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:130-131，525.

[3]李延雪，蘇玉娟，宋寶鵬.HPLC法測定元胡止痛片中延胡索乙素的含量[J].中國藥事，2006，20(9):544-545.

[4]楊天展.高效液相色譜法測定胃得康散中延胡索乙素的含量[J].時珍國醫(yī)國藥，2000，11(1):31-32.

[5]鄭 琴，郝偉偉，楊 明.HPLC同時測定止痛膠囊中2種生物堿的含量[J].中成藥，2007，29(12):1 791-1 794.

[6]王 捷，龍 禹，焦愛軍，等.HPLC測定安神養(yǎng)血口服液中3種生物堿延胡索乙素、鉤藤堿和異鉤藤堿含量[J].中成藥，2010，32(2):231-235.

[7]盧耀文，楊中林.延胡索乙素提取工藝優(yōu)選研究[J].中成藥，2008，30(8):1 247-1 249.