洪 銳，孫圓圓，金景玉，蘇雪慧，文今福，金松南

2，3-吲哚醌（2，3-indolinedione，isatin，ISA）為吲哚類衍生物，又名靛紅，是近年發(fā)現(xiàn)存在于人和動物體內(nèi)的一種內(nèi)源性活性物質(zhì)，且廣泛存在于海洋生物如龍蝦和十字花科植物中［1－2］。基礎(chǔ)及臨床研究表明，ISA在人體不同器官和體液中均有分布［3－5］。研究表明，ISA使動物產(chǎn)生類似焦慮的行為，并且在焦慮和緊張的狀態(tài)下，心臟、腦、血漿中其水平會升高［6－8］。然而，目前ISA對胸主動脈舒縮功能的調(diào)控作用及機制尚不十分清楚。因此，本研究利用離體血管環(huán)實驗?zāi)Ｐ?，探討ISA對大鼠離體胸主動脈舒收縮功能的影響及機制，為心血管疾病的防治提供新的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 動物：♂Sprague-Dawley大鼠，由山東省濟寧魯抗公司提供，體質(zhì)量250～300 g，在自然環(huán)境下飼養(yǎng)，自由飲水進食。試劑：2，3-吲哚醌、苯腎上腺素、乙酰膽堿、L-NAME及ODQ均購自Sigma公司。儀器：HSS-1B恒溫循環(huán)水浴槽（成都儀器廠）；BL-420E生理信號記錄儀（成都泰盟科技有限公司產(chǎn)品）。

1.2 大鼠離體胸主動脈血管環(huán)張力測定 大鼠斷頭處死，取出胸主動脈，剪成長約3 mm的血管環(huán)樣本，置于盛有6 ml Krebs-Henseleit（K-H）液的恒溫浴槽（36.5～37.5）℃內(nèi)，一端固定，另一端經(jīng)張力換能器通過BL-420E生物機能實驗系統(tǒng)記錄張力變化。先將血管張力值從零逐步提高至1 g，穩(wěn)定后以1μmol·L－1的苯腎上腺素（phenylephrine，PE）引起血管收縮為100%，觀測不同濃度藥物對大鼠離體胸主動脈血管環(huán)舒縮功能的影響。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 采用Prism 3.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，數(shù)據(jù)以ˉx±s表示，多組數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析。

2 結(jié)果

2．1 α1腎上腺素受體活性對ISA調(diào)節(jié)大鼠胸主動脈舒縮功能的影響 PE預(yù)處理后，ISA濃度依賴性地誘導(dǎo)大鼠胸主動脈收縮，與PE預(yù)處理組相比，無PE時ISA不能引起大鼠胸主動脈收縮（P＜0.01），見Tab 1。

2．2 內(nèi)皮完整性對ISA調(diào)節(jié)大鼠胸主動脈舒縮功能的影響PE預(yù)處理后，與內(nèi)皮完整血管相比，去內(nèi)皮血管中ISA的縮血管效應(yīng)消失，在30、100、300、1 000μmol·L－14個濃度點，P＜0.01（Tab 1）。

2．3 一氧化氮合酶和可溶性鳥苷酸環(huán)化酶抑制劑對ISA調(diào)節(jié)大鼠胸主動脈舒縮功能的影響 與PE預(yù)處理組比較，一氧化氮合酶抑制劑L-NAME（10μmol·L－1）和可溶性鳥苷酸環(huán)化酶抑制劑 ODQ（10μmol·L－1）預(yù)處理后，均能阻斷ISA的縮血管效應(yīng)（P＜0.01），見Tab 1。

2．4 ISA對ACh舒血管效應(yīng)的影響 用 ISA（100μmol·L－1）預(yù)處理20 min后，再加 PE，觀測 ACh（0.001～1μmol·L－1）舒血管效應(yīng)。結(jié)果顯示，與對照組相比，ISA預(yù)處理組明顯減弱 ACh舒血管效應(yīng)，在 0.01、0.03、0.1μmol·L－13個濃度點，P＜0.01（Tab 2）。

3 討論

ISA是在動、植物及人體內(nèi)廣泛存在的內(nèi)源性活性物質(zhì)［11］，具有抗氧化［1］、抗癌［2］、調(diào)節(jié)腦內(nèi)乙酰膽堿和多巴胺的平衡［9－10］等多種藥理活性。機體處于緊張狀態(tài)時，ISA水平明顯升高至正常的3～6倍［8］。但是，鮮有報道ISA對血管胸主動脈舒縮功能的影響。本實驗結(jié)果顯示，PE存在下，ISA濃度依賴性地誘導(dǎo)大鼠胸主動脈收縮，而無PE時，ISA不能引起大鼠胸主動脈收縮。

Tab 2 Effects of isatin on ACh-induced vasorelaxation in endothelium-intact aortic rings（ˉx±s，n＝6）

眾所周知，血管內(nèi)皮與血管舒縮功能關(guān)系密切。本實驗結(jié)果顯示，去除胸主動脈內(nèi)皮后，ISA誘導(dǎo)的縮血管效應(yīng)明顯減弱，表明PE存在下ISA對大鼠胸主動脈的收縮效應(yīng)是主要通過其血管內(nèi)皮途徑來實現(xiàn)的。NO-cGMP信號通路在血管舒縮功能的調(diào)控中發(fā)揮重要作用［12］。以往的研究發(fā)現(xiàn)，激活NO-cGMP信號通路的藥物有利于血管舒張，而抑制NO-cGMP信號通路的藥物則促進血管收縮［12］。本實驗選用一氧化氮合酶抑制劑L-NAME和鳥苷酸環(huán)化酶抑制劑ODQ處理后，觀察了ISA的血管效應(yīng)。結(jié)果顯示，上述兩種阻斷劑均可抑制ISA對大鼠胸主動脈的收縮效應(yīng)。提示ISA對大鼠離體胸主動脈的收縮效應(yīng)與抑制NO-cGMP信號通路有關(guān)。已知副交感神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿（acetylcholine，ACh）舒血管效應(yīng)主要是通過內(nèi)皮細(xì)胞NO釋放而實現(xiàn)的。本實驗結(jié)果顯示，ISA預(yù)處理明顯減弱ACh舒血管效應(yīng)，推測ISA通過抑制ACh誘導(dǎo)的NO而減弱ACh舒血管效應(yīng)。

綜上所述，本研究觀察到在PE存在下，高濃度的ISA可引起胸主動脈的收縮效應(yīng)。此時，ISA主要通過抑制NO-cGMP信號通路和減弱ACh舒血管途徑，發(fā)揮其對胸主動脈舒縮功能的調(diào)控作用。

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