呂思敏，于 瓊，夏海珊，崔 燎，2，吳 鐵

（1.廣東醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，廣東東莞 523808；2.廣東天然藥物研究與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東湛江 524023）

四氯化碳（CCl4）是建立肝損傷模型最常用的物質(zhì)，其作用機(jī)制與氧自由基的脂質(zhì)過(guò)氧化相關(guān)［1－2］。慢性肝病常伴有骨代謝的改變，可致肝性骨營(yíng)養(yǎng)不良及骨質(zhì)疏松等肝性骨病的發(fā)生，以骨質(zhì)疏松最為常見(jiàn)［3］。目前發(fā)現(xiàn)，不僅原發(fā)性膽汁性肝硬化可發(fā)生骨質(zhì)疏松癥，其它原因的肝臟疾病也可引起。因此，防治肝臟疾病所導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松癥日漸受到重視。

秋水仙堿是公認(rèn)的抗肝纖維化藥物，但邱永祥等［4］試驗(yàn)證明，秋水仙堿對(duì)小鼠的肝臟有損傷作用。臨床研究表明［5］，服用他汀類藥物可以升高血清骨鈣素水平。但在肝損傷后的治療中是否能夠預(yù)防骨丟失，目前還未見(jiàn)報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)旨在用小鼠建立肝損傷的動(dòng)物模型，通過(guò)Micro CT觀察骨組織結(jié)構(gòu)，以探討在肝損傷中骨丟失的狀況，并同時(shí)觀察洛伐他汀、秋水仙堿在護(hù)肝的同時(shí)是否有減少骨丟失的作用，為其應(yīng)用于肝硬化性骨病的防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 本院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的普通級(jí)昆明種小白鼠32只，體質(zhì)量（36.77±5.23）g，♀♂兼用。

1.2 藥物 四氯化碳（分析純），購(gòu)于天津市大茂化學(xué)試劑廠。實(shí)驗(yàn)時(shí)，用花生食用調(diào)和油配成體積分?jǐn)?shù)為 40%的 CCl4溶液。秋水仙堿片，批號(hào)120125，購(gòu)于西雙版納版納藥業(yè)有限責(zé)任公司；洛伐他汀片，批號(hào)20120108，購(gòu)于北京萬(wàn)生藥業(yè)有限責(zé)任公司；實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配制成混懸液。

1.3 儀器與試劑 Micro CT儀（viva CT40；SCANCO Medical AG），BioTek Synergy 2多功能酶標(biāo)儀，Eppendorf 5415R小型高速冷凍離心機(jī)，賽多利斯BT 25S電子天平。谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST／GOT）測(cè)定試劑盒、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT／GPT）測(cè)定試劑盒、總超氧化物歧化酶（T-SOD）測(cè)試盒、丙二醛（MDA）測(cè)試盒、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）測(cè)試盒、考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒均購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法 取上述小鼠隨機(jī)分為4組，每組8只，分籠飼養(yǎng)，對(duì)照組（CON）：給予花生油0.1 ml·（10 g）－1皮下注射，首劑加倍，每隔5天注射1次，于造模次日給予蒸餾水10 ml·kg－1灌胃，每日1次，連續(xù)1個(gè)月；四氯化碳組（CTC）：為肝損傷模型組，給予體積分?jǐn)?shù)為40%的CCl4花生油溶液按0.1 ml·（10 g）－1皮下注射，首劑加倍，每隔5天注射1次，注射后給予蒸餾水10 ml·kg－1灌胃，每日1次，連續(xù)1個(gè)月；洛伐他汀組（LOV）：按模型組同法給予CCl4后，按2.6 mg·kg－1給予洛伐他汀溶液灌胃，每日1次，連續(xù)1個(gè)月；秋水仙堿組（COL）：按模型組同法給予CCl4后，按0.065 mg·kg－1給予秋水仙堿溶液灌胃，每日1次，連續(xù)1個(gè)月。上述動(dòng)物飼養(yǎng)條件相同，自由進(jìn)食和飲水。每隔5天稱體重1次，均于實(shí)驗(yàn)d 30晚上禁食，禁食12 h后動(dòng)物摘眼球取血，分離血清，測(cè)定AST、ALT；剝離肝臟，制備肝勻漿，測(cè) GSH-Px、SOD、MDA；同時(shí)剝離右側(cè)脛骨，用于Micro CT檢測(cè)。

1.5 觀察指標(biāo)及測(cè)定方法

1.5.1 小鼠體重及肝臟重量的觀察 小鼠肝臟系數(shù)的計(jì)算：肝臟系數(shù) ＝［肝臟重量（g）／小鼠體重（g）］×100%

1.5.2 血清學(xué)指標(biāo)AST、ALT活性的檢測(cè) 小鼠血樣3 000 r·min－1離心 10 min（4℃），取血清，采用比色法，用酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)，具體步驟均按試劑盒說(shuō)明書操作。

1.5.3 肝勻漿抗氧化指標(biāo)的檢測(cè) 準(zhǔn)確稱取肝臟相同部位0.2 g，用冷生理鹽水1.8 ml制備10%肝勻漿，按試劑盒說(shuō)明書分別測(cè)定SOD活性、MDA和GSH-Px水平。

1.5.4 Micro CT對(duì)小鼠脛骨骨小梁的分析［6－7］將小鼠脛骨除盡肌肉和附著組織，放入Micro CT儀，對(duì)脛骨近干骺端進(jìn)行X射線掃描。掃描條件為：電壓70 kVp，電流114μA，掃描時(shí)間為24.8 min（單層），間隔時(shí)間為200 ms，分辨率為中度（Medium）。進(jìn)行角度為180°的投射，對(duì)同一樣品掃描獲得500張不同截面的1024×1024像素的圖片，對(duì)于脛骨選取距生長(zhǎng)板遠(yuǎn)端1 mm，層厚2 mm的骨組織為興趣區(qū)域（region of interest，ROI）進(jìn)行三維重建。完成圖像二值化，選定ROI內(nèi)松質(zhì)骨進(jìn)行三維可視化呈現(xiàn)。定量分析使用其軟件（SCANCO Medical AG），分析參數(shù)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)用ˉx±s表示，多組用F檢驗(yàn)，兩兩比較用q檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠實(shí)驗(yàn)前及實(shí)驗(yàn)后的體重變化 小鼠體重各組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但有下列趨勢(shì)：對(duì)照組小鼠體重隨時(shí)間稍有增加趨勢(shì)，在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，體重比實(shí)驗(yàn)前增幅10.54%，其余各組小鼠在給予CCl4后體重下降，后逐步回升（Tab 1）。

2.2 各組小鼠實(shí)驗(yàn)后肝重量及肝指數(shù)的變化 如Tab 2所示，與對(duì)照組比較，模型組小鼠肝臟指數(shù)明顯升高，升高了約28.48%（P＜0.05）。與對(duì)照組相比，洛伐他汀組、秋水仙堿組的肝臟指數(shù)明顯升高（P＜0.05），與模型組相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

Tab1 EffectsofdrugsonbodyweightinCCl4inducedliverinjuryinmice（ˉx±s，n＝8）

Tab2 EffectsofdrugsonliverindexinCCl4induced liverinjuryinmice（ˉx±s，n＝8）

2．3 各組小鼠實(shí)驗(yàn)后血清AST和ALT活性的變化 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明（Tab3），由CCl4引起的肝損傷模型組血清AST、ALT活性比對(duì)照組明顯升高，分別升高了37.54%、97.59%（P＜0.05），差異有顯著性，提示造模成功。但洛伐他汀組、秋水仙堿組的AST和ALT活性均高于對(duì)照組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

Tab3 EffectsofdrugsonactivitiesofserumASTandALTin CCl4inducedliverinjuryinmice（ˉx±s，n＝8）

2．4 各組小鼠實(shí)驗(yàn)后肝勻漿SOD活性及GSH-Px和MDA水平的變化 如Tab4所示，與對(duì)照組比較，模型組小鼠肝勻漿中SOD活性和GSH-Px水平明顯降低，分別降低了18.48%（P＜0.05）、24.96%（P＜0.05），MDA水平明顯升高，升高了約52.63%（P＜0.05），提示造模成功。與模型組比較，洛伐他汀組、秋水仙堿組小鼠肝勻漿中GSH-Px水平均明顯增強(qiáng)，分別增加了39.74%、29.09%（P＜0.05）。洛伐他汀和秋水仙堿組小鼠肝勻漿中SOD活性、MDA水平與模型組相比，差異均無(wú)顯著性。

2．5 MicroCT對(duì)小鼠脛骨骨組織結(jié)構(gòu)參數(shù)的分析

2.5.1 MicroCT測(cè)定小鼠脛骨BVF、Tb.N、Tb.Sp和Tb.Th值 如Tab5所示，模型組的骨體積分?jǐn)?shù)（BVF）、骨小梁數(shù)量（Tb.N）明顯低于對(duì)照組，分別降低了約48.01%（P＜0.05）、48.52%（P＜0.05），而骨小梁分離度（Tb.Sp）明顯高于對(duì)照組，升高了約154.54%（P＜0.05），但骨小梁厚度（Tb.Th）和對(duì)照組相比，差異無(wú)顯著性。表明小鼠脛骨的松質(zhì)骨在給予CCl4后出現(xiàn)了明顯的骨小梁體積分?jǐn)?shù)下降，骨小梁數(shù)量降低，間隙增寬，出現(xiàn)較為嚴(yán)重的結(jié)構(gòu)退變，表現(xiàn)骨質(zhì)疏松癥狀。秋水仙堿治療組的BVF值、Tb.N值明顯低于對(duì)照組（P＜0.05），Tb.Sp值明顯高于對(duì)照組（P＜0.05），Tb.Th值與對(duì)照組相比差異無(wú)顯著性，這表明秋水仙堿組骨量丟失嚴(yán)重，骨量與模型組相當(dāng)，說(shuō)明秋水仙堿對(duì)CCl4致肝損傷所引發(fā)的骨小梁減少以及結(jié)構(gòu)退變的改善作用較弱。洛伐他汀治療組的BVF、Tb.N值介于模型組與對(duì)照組之間，且數(shù)據(jù)結(jié)果更為接近對(duì)照組，Tb.Th值與對(duì)照組相比差異無(wú)顯著性，這表明兩者骨小梁量相仿，骨量增加，說(shuō)明洛伐他汀對(duì)CCl4致肝損傷所引發(fā)的骨小梁數(shù)量減少及骨小梁結(jié)構(gòu)退變的改善作用較強(qiáng)。

Tab4 EffectsofdrugsonSOD，GSH-PxandMDAinliverhomogenateinCCl4inducedliverinjuryinmice（ˉx±s，n＝8）

Tab5 ChangesofdrugsonBVF，Tb．N，Tb．SpandTb．Thof proximaltibialinCCl4inducedliverinjuryinmice（ˉx±s，n＝8）

2.5.2 MicroCT測(cè)定的小鼠脛骨TMD和Conn.D.值 如Tab6所示，模型組的組織礦物密度（TMD）值明顯低于對(duì)照組，降低了約46.51%（P＜0.05），說(shuō)明小鼠的骨密度降低，模型組的連接密度（Conn.D.）值明顯低于對(duì)照組，降低了 71.83%（P＜0.05），說(shuō)明小鼠的骨小梁網(wǎng)絡(luò)之間的連接數(shù)量較低，提示出現(xiàn)骨質(zhì)疏松癥狀。秋水仙堿治療組的Conn.D.值介于模型組與對(duì)照組之間，且數(shù)據(jù)結(jié)果更為接近模型組，但其TMD值與模型組相比差異有顯著性，增加了約88.24%（P＜0.05），說(shuō)明秋水仙堿組能增加骨量，但是連接性不好。洛伐他汀治療組的Conn.D.值介于模型組與對(duì)照組之間，數(shù)據(jù)結(jié)果更為接近對(duì)照組，且其TMD值與模型組相比差異有顯著性，增加了約196.28%（P＜0.05），說(shuō)明洛伐他汀能夠增加骨量且連接性較好。

Tab 6 Changes of drugs on TMD and Conn．D．of proximal tibial in CCl4 induced liver injury in mice（ˉx±s，n＝8）

2.5.3 Micro CT測(cè)定的小鼠脛骨SMI和DA值如Tab 7所示，模型組的結(jié)構(gòu)模型指數(shù)（SMI）值明顯高于對(duì)照組，增加了61.29%（P＜0.05），說(shuō)明小鼠的骨小梁結(jié)構(gòu)形態(tài)由板狀結(jié)構(gòu)退變成桿狀結(jié)構(gòu)，呈現(xiàn)出骨質(zhì)疏松癥狀。模型組的各向異性的程度（DA）低于對(duì)照組，降低了25.48%（P＜0.05），也提示出現(xiàn)骨質(zhì)疏松癥狀。秋水仙堿治療組的DA值介于模型組與對(duì)照組之間，SMI數(shù)值接近于模型組，說(shuō)明秋水仙堿對(duì)骨小梁的板狀結(jié)構(gòu)與桿狀結(jié)構(gòu)的調(diào)整無(wú)影響。洛伐他汀治療組的DA值明顯低于模型組（P＜0.05），SMI接近于模型組，說(shuō)明洛伐他汀對(duì)骨小梁的板狀結(jié)構(gòu)與桿狀結(jié)構(gòu)的調(diào)整亦無(wú)影響。

Tab 7 Changes of drugs on SMI and DA of proximal tibial in CCl4 induced liver injury in mice（ˉx±s，n＝8）

2．6 Micro CT對(duì)小鼠脛骨ROI區(qū)的三維重建圖的分析 如Fig 1所示，通過(guò)掃描重建所得的三維圖像觀察到骨結(jié)構(gòu)形態(tài)，以及骨小梁的數(shù)量變化情況，模型組出現(xiàn)了骨小梁斷裂、變短的情況，而且在中央還出現(xiàn)了很大的間隙，這表明CCl4致肝損傷后能夠誘導(dǎo)骨質(zhì)疏松的產(chǎn)生。而洛伐他汀組、秋水仙堿組骨小梁的形態(tài)結(jié)構(gòu)、緊密程度介于對(duì)照組與模型組之間，但洛伐他汀組的骨小梁較秋水仙堿的更為緊密，且間隙較小，表明洛伐他汀對(duì)于CCl4致肝損傷所引發(fā)的骨質(zhì)疏松癥狀有更好的保護(hù)作用。

3 討論

3.1 四氯化碳可誘導(dǎo)小鼠肝損傷并出現(xiàn)骨質(zhì)疏松本實(shí)驗(yàn)用體積分?jǐn)?shù)為40%的CCl4花生油對(duì)小鼠進(jìn)行皮下注射，5 d 1次，連續(xù)1個(gè)月，從血清學(xué)指標(biāo)以及肝勻漿的抗氧化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，說(shuō)明CCl4對(duì)肝細(xì)胞具有明顯的破壞作用，故在本實(shí)驗(yàn)條件下，用CCl4染毒小鼠造成肝損傷的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型是成功的。CCl4是目前用于誘導(dǎo)肝損傷的經(jīng)典物質(zhì)，其機(jī)制是CCl4進(jìn)入機(jī)體后，在肝內(nèi)代謝生成三氯甲基和氯甲基自由基，從而啟動(dòng)脂質(zhì)過(guò)氧化作用，進(jìn)而破壞肝細(xì)胞的膜性結(jié)構(gòu)。三氯甲基自由基還能抑制鈣泵的活性，使胞內(nèi)鈣離子濃度升高，造成肝細(xì)胞受損［8］。

Fig 1 Three-dimensional reconstruction scheme of ROI area for mice tibial

與對(duì)照組相比，模型組的 BVF、Tb.N、TMD、Conn.D.、DA值明顯降低，而Tb.Sp、SMI明顯升高，說(shuō)明骨小梁大量丟失，間隙增寬，骨密度降低，出現(xiàn)嚴(yán)重的結(jié)構(gòu)退變，而且骨小梁結(jié)構(gòu)形態(tài)由板狀結(jié)構(gòu)退變成桿狀結(jié)構(gòu)，表明CCl4致肝損傷后的小鼠出現(xiàn)骨質(zhì)疏松癥狀。肝性骨病是臨床常見(jiàn)的疾病，該病常常發(fā)生于原發(fā)性膽汁淤積性肝硬化、慢性活動(dòng)性肝炎、酒精性肝硬化以及肝移植，引起骨密度減少、骨質(zhì)疏松等骨代謝異常。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，用CCl4對(duì)小鼠造成肝損傷的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型造成了骨質(zhì)疏松，其骨量的丟失可能與肝受損不能合成某些蛋白或是細(xì)胞因子有關(guān)。因?yàn)楦螕p傷不能代償時(shí)，對(duì)體內(nèi)許多激素、細(xì)胞因子、有毒物質(zhì)等的代謝都有影響，從而影響到骨代謝。肝損傷時(shí)，單核細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞過(guò)度分泌IL-1、IL-6、TNF-α等細(xì)胞因子，這些因子可共同促進(jìn)破骨細(xì)胞形成，使骨吸收增強(qiáng)，影響骨重建，從而誘導(dǎo)骨丟失［9］。另外，肝功能異常引起維生素D、鈣磷代謝異常，使骨形成減少，影響骨代謝［10］。陶坤明等［11］提出，由膽汁淤積導(dǎo)致的高膽紅素血癥損傷成骨細(xì)胞的增殖能力，亦會(huì)導(dǎo)致骨質(zhì)疏松。也有研究報(bào)道［12］，骨銅和骨鎂增加，抑制成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的功能，降低骨的轉(zhuǎn)換率而導(dǎo)致骨質(zhì)疏松。

3.2 秋水仙堿抗肝纖維化作用及對(duì)骨密度的影響本實(shí)驗(yàn)用CCl4造成小鼠肝損傷，給予秋水仙堿后雖能升高GSH-Px水平，但未能降低血清AST、ALT活性，從試驗(yàn)結(jié)果可以看出，本次實(shí)驗(yàn)秋水仙堿用藥后對(duì)小鼠肝損傷沒(méi)有明顯的保護(hù)作用。關(guān)于秋水仙堿是否有抗肝纖維化作用一直存在著爭(zhēng)議，多數(shù)研究報(bào)道秋水仙堿有抗肝纖維化的作用。但秋水仙堿與細(xì)胞中微管蛋白結(jié)合，阻止其聚合，亦可使微管解聚，從而抑制細(xì)胞的增殖、分化和物質(zhì)運(yùn)輸傳遞，使肝細(xì)胞受損［4］，因此，未能產(chǎn)生明顯的抗肝纖維化作用。本實(shí)驗(yàn)周期為30 d，用CCl4造成小鼠肝損傷，實(shí)驗(yàn)結(jié)果未能看出秋水仙堿具有保肝作用，可能因?yàn)镃Cl4用量不足，不足以顯示細(xì)胞毒作用；亦可能是由于試驗(yàn)周期短的緣故，本實(shí)驗(yàn)為應(yīng)激反應(yīng)，肝損傷處于前期，未惡化成為肝纖維化，而秋水仙堿未能發(fā)揮明顯的保護(hù)作用。

本試驗(yàn)中，秋水仙堿治療組的BVF值明顯低于對(duì)照組，TMD值比模型組明顯增加，說(shuō)明秋水仙堿能增加骨量，但是連接性不好，這表明秋水仙堿對(duì)肝損傷后的骨量丟失無(wú)明顯的保護(hù)作用，可能是因?yàn)閷?shí)驗(yàn)中秋水仙堿未能降低轉(zhuǎn)氨酶的活性，所以未能體現(xiàn)出其有抗骨丟失的作用。秋水仙堿的LD50較低，過(guò)量則會(huì)對(duì)骨髓和肝臟有損害。另有試驗(yàn)證明［4］，秋水仙堿通過(guò)影響GSH系統(tǒng)和細(xì)胞巰基的穩(wěn)態(tài)，使細(xì)胞對(duì)藥物更為敏感。

3.3 洛伐他汀護(hù)肝作用及預(yù)防骨質(zhì)疏松的作用本研究中，洛伐他汀雖能升高GSH-Px活性，但血清AST、ALT活性未發(fā)生改變，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，洛伐他汀用藥后對(duì)肝損傷沒(méi)有明顯影響。他汀類藥物有一定肝臟毒性，可引起肝酶升高，但小劑量洛伐他汀對(duì)肝臟是安全的［13］。洛伐他汀治療組的TMD值與模型組相比差異有顯著性，這說(shuō)明洛伐他汀能夠增加骨量且連接性較好，表明洛伐他汀對(duì)肝損傷導(dǎo)致的骨丟失有明顯的保護(hù)作用。洛伐他汀對(duì)CCl4致肝損傷后骨量丟失的保護(hù)作用較秋水仙堿好，不僅洛伐他汀治療組BVF、Conn.D.、TMD值更為接近對(duì)照組，而且Tb.N、Tb.Th值比秋水仙堿的大，Tb.Sp值比秋水仙堿的小，表明洛伐他汀能使骨小梁數(shù)量增加，骨小梁厚度增大，骨小梁分離度變小，抗骨丟失效果優(yōu)于秋水仙堿。洛伐他汀能夠增加骨密度，可能是因?yàn)橛写俟切纬勺饔煤停ɑ颍┮种乒俏兆饔?。洛伐他汀是新型調(diào)節(jié)血脂及抗動(dòng)脈粥樣硬化藥，有報(bào)道［5］發(fā)現(xiàn)他汀類藥物可以增強(qiáng)骨形態(tài)發(fā)生蛋白的表達(dá)，具有成骨潛能。也有研究［14］發(fā)現(xiàn)，洛伐他汀可以抑制骨髓基質(zhì)干細(xì)胞向脂肪細(xì)胞分化，而促進(jìn)其向成骨細(xì)胞分化。亦有報(bào)道［15］，他汀類藥物通過(guò)抑制HMG-CoA還原酶活性等相關(guān)途徑，誘導(dǎo)成骨細(xì)胞分化，促進(jìn)成骨因子表達(dá)，促進(jìn)骨質(zhì)吸收來(lái)刺激骨形成，和（或）抑制骨吸收來(lái)增加骨密度。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)小鼠皮下注射CCl4，成功建立肝損傷的動(dòng)物模型，且骨丟失嚴(yán)重，出現(xiàn)明顯的骨質(zhì)疏松癥狀。對(duì)肝損傷后骨代謝的改變，通過(guò)Micro CT的結(jié)果分析，秋水仙堿組能增加骨量但是連接性不好，表明秋水仙堿對(duì)肝損傷后的骨量丟失無(wú)明顯的保護(hù)作用。洛伐他汀BVF、TMD、Conn.D.值等表明洛伐他汀能增加骨量且連接性較好，對(duì)肝損傷導(dǎo)致的骨丟失有明顯的保護(hù)作用。而且Tb.N、Tb.Th、Tb.Sp值顯示洛伐他汀能使骨小梁數(shù)量增加，骨小梁厚度增大，骨小梁分離度變小，表明洛伐他汀對(duì)于CCl4造成肝損傷后的抗骨丟失的作用強(qiáng)于秋水仙堿。另外，本實(shí)驗(yàn)觀察到洛伐他汀、秋水仙堿用藥后，洛伐他汀及秋水仙堿對(duì)小鼠的保肝作用并不明顯，可能由于小鼠皮下注射CCl4藥物劑量不足，或是試驗(yàn)周期短等的原因所致，有待下一步進(jìn)行探討。

參考文獻(xiàn)：

［1］ Chen SR，Zou L Y，Li L，Wu T.The protective effect of glycyrrhetinic acid on carbon tetrachloride-induced chronic liver fibrosis in mice via upregulation of nrf2［J］.PLoS One，2013，8（1）：e53662.

［2］ Li L，Li W，Kim Y H，Lee Y W.Chlorella vulgaris extract ameliorates carbon tetrachloride-induced acute hepatic injury in mice［J］.Exp Toxicol Pathol，2013，65（1－2）：73－80.

［3］ 黃 英，楊顏茹.丙型肝炎后肝硬化與骨質(zhì)疏松的臨床研究［J］.吉林醫(yī)學(xué)，2012，33（23）：4938－9.

［3］ Huang Y，Yang Y R.Clinical study of hepatitis C cirrhosis and osteoporosis［J］.Jilin Med J，2012，33（23）：4938－9.

［4］ 邱永祥，阮 明，賈鳳蘭，等.秋水仙堿對(duì)小鼠肝臟的損傷作用［J］.毒理學(xué)雜志，2005，19（2）：131－3.

［4］ Qiu Y X，Yuan M，Jia F L，et al.The toxic effect of colchicine on the liver of mice［J］.J Toxicol，2005，19（2）：131－3.

［5］ 曹國(guó)龍，王天兵.洛伐他汀對(duì)尾懸吊大鼠骨量及其骨髓基質(zhì)干細(xì)胞增殖、分化的影響［J］.中國(guó)組織工程研究，2012，16（36）：6674－8.

［5］ Cao G L，Wang T B.Effects of lovastatin on bone mass and the differentiation and proliferation of bone marrow stromal cells in tailsuspended rats［J］.J Clin Rehab Tiss Eng Res，2012，16（36）：6674－8.

［6］ Follet H，F(xiàn)arlay D，Bala Y，et al.Determinants of microdamage in elderly human vertebral trabecular bone［J］.PLoSOne，2013，8（2）：e55232.

［7］ 王 軍，畢 龍，白建萍，等.顯微CT與組織切片技術(shù)在骨形態(tài)計(jì)量研究中的比較［J］.中國(guó)矯形外科雜志，2009，17（5）：381－4.

［7］ Wang J，Bi L，Bai JP，et al.Comparative study of micro-CT and histological section in bone morphometry［J］.Orthoped J China，2009，17（5）：381－4.

［8］ 韓 泳，王 玉，崔燕芒，趙 燕.黃芩素對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用［J］.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2013，29（6）：883－4.

［8］ Han Y，Wang Y，Cui Y M，Zhao Y.The hepatoprotective effects of Baicalein on CCl4-induced acute liver injury in mice［J］.Chin Pharmacol Bull，2013，29（6）：883－4.

［9］ 楊顏茹，郭 強(qiáng)，段惠春.IL-6、TNT-α、1，25二羥維生素 D3以及骨密度測(cè)定在酒精性肝硬化骨質(zhì)疏松中的臨床應(yīng)用價(jià)值［J］.甘肅醫(yī)藥，2013，32（3）：163－6.

［9］ Yang Y R，Guo Q，Duan H C.The clinical value of interleukin-6，tumor necrosis factor-α，1，25 dihydroxyvitamin D3 determination in alcoholic cirrhosis osteoporosis［J］.Gansu Med J，2013，32（3）：163－6.

［10］王 翔，薛雁山.肝硬化性骨質(zhì)疏松癥及其CT評(píng)價(jià)研究［J］.國(guó)際醫(yī)學(xué)放射學(xué)雜志，2009，32（5）：457－62.

［10］Wang X，Xue Y S.Osteoporosis in patients with liver cirrhosis：evaluation with computed tomography［J］.Int JMed Radiol，2009，32（5）：457－62.

［11］陶坤明，姚定康.原發(fā)性膽汁性肝硬化并發(fā)骨質(zhì)疏松的研究進(jìn)展［J］.國(guó)際消化病雜志，2009，29（1）：55－7.

［11］Tao K M，Yao D K.Progress in the study of osteoporosis in primary biliary cirrhosis［J］.Int J Dig Dis，2009，29（1）：55－7.

［12］鄒麗宜，吳 鐵.小鼠肝硬化導(dǎo)致骨丟失及人參莖葉皂苷的防治作用［J］.藥學(xué)學(xué)報(bào)，2001，36（12）：886－90.

［12］Zou L Y，Wu T.Liver cirrhosis induced bone loss in mice and the effect of Ginsenosides［J］.Acta Pharm Sin，2001，36（12）：886－90.

［13］張淑花.小劑量洛伐他汀對(duì)肝臟影響研究［J］.包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，24（2）：144－5.

［13］Zhang SH.Study on the effect of a small dose of lovastatin on the liver［J］.J Baotou Med Coll，2008，24（2）：144－5.

［14］Li X，Cui Q，Kao C，et al.Lovastatin inhibits adipogenic and stimulates osteogenic differentiation by suppressing PPARγ2 and increasing Cbfa1／Runx2 expression in bone marrow mesenchymal cell cultures［J］.Bone，2003，33（4）：652－9.

［15］薛昊罡，冷 冰.辛伐他汀治療骨質(zhì)疏松的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展［J］.中國(guó)老年學(xué)雜志，2010，30（24）：3836－7.

［15］Xue H G，Leng B.Experimental research progress of simvastatin in the treatment of osteoporosis［J］.Chin J Gerontol，2010，30（24）：3836－7.