許 倩，李靖紅，麻瑞芹，張鴻英，黃國英，滕愛蘭

（甘肅省第二人民醫(yī)院，甘肅 蘭州 730000）

毛細支氣管炎是嬰幼兒時期常見的下呼吸道感染性疾病，僅見于2歲以下的嬰幼兒，多數(shù)為6個月以內(nèi)的嬰兒。臨床以咳嗽、喘憋為主要表現(xiàn)，容易發(fā)生心力衰竭及呼吸衰竭等并發(fā)癥。具有特應(yīng)質(zhì)或過敏體質(zhì)者，毛細支氣管炎可出現(xiàn)反復(fù)喘息發(fā)作，且容易發(fā)展成哮喘，其發(fā)病機制尚未完全清楚，目前認為免疫失衡在發(fā)病過程中起重要作用[1]，其中T細胞亞群及細胞因子可能在發(fā)病中起主要作用。本研究通過檢測毛細支氣管炎患兒血清T細胞亞群及IFN-γ、IL-6，探討其與毛細支氣管炎患兒喘息的相關(guān)性及發(fā)病中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2012年10月—2013年5月本科收治的毛細支氣管炎患兒36例為毛細支氣管炎組。所有患兒均為首次感染性喘息發(fā)作,符合《諸福棠實用兒科學》第7版的診斷標準[2]，男21例，女 15 例；年齡 3～20 個月，平均年齡（8.19±4.96）個月；體重6.5～13.5 kg，平均 8.9 kg；病程 6～19 天，平均 9 天。排除支氣管炎、嬰幼兒哮喘和先天性心臟病等。正常對照組為門診健康體檢兒童30例，其中男17例，女13例；年齡4～22個月，平均年齡（8.63±3.66）個月；體重 3.9～11.0 kg，平均 6.9 kg；無過敏性疾病史，近兩周無呼吸道感染。兩組在性別、年齡上無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），具有可比性。本研究取得入選對象監(jiān)護人知情同意。

1.2 檢測方法

毛細支氣管炎組患兒入院診斷明確后于次日清晨空腹采集頸靜脈血4 m l，正常對照組在取得家長同意后空腹采集頸靜脈血4ml，分別為靜脈肝素抗凝血和非抗凝血各2ml?？鼓糜跈z測T細胞亞群，方法為免疫熒光流式細胞技術(shù)（六色流式細胞儀，美國BD公司）檢測血清CD3+T、CD3+CD4+T、CD3+CD8+T，試劑盒由衛(wèi)生部武漢生物制品研究所提供。非抗凝血2 ml，于3 500 r/min離心10分鐘，分離血清后置于-20℃冰箱保存待檢，用于集中檢測IFN-γ和IL-6，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定血清IFN-γ和IL-6，試劑盒由深圳晶美生物有限公司提供，所有檢測均嚴格按試劑盒說明書進行。

1.3 統(tǒng)計學處理

2 結(jié)果

（1）毛細支氣管炎組和正常對照組T細胞亞群系列水平比較，毛細支氣管炎組CD3+CD4+T、CD3+CD8+T與正常對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；毛細支氣管炎組CD3+T、CD3+CD4+T/CD3+CD8+T與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表 1。

表1 兩組T細胞亞群系列水平比較（±s）

表1 兩組T細胞亞群系列水平比較（±s）

組別 人數(shù)毛細支氣管炎組正常對照組36 30 tP--CD3+T（%）63.63±6.89 48.75±12.03 2.155 0.034 CD3+CD4+T（%）39.41±8.43 37.10±8.07 0.359 0.721 CD3+CD8+T（%）21.58±6.37 22.63±6.93 0.676 0.501 CD3+CD4+T/CD3+CD8+T 1.93±0.647 1.72±0.764 1.871 0.029

（2）毛細支氣管炎組和正常對照組IFN-γ、IL-6水平比較，毛細支氣管炎組IFN-γ降低，IL-6增高，與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表 2。

表 2 兩組 IFN-γ、IL-6 水平比較（±s，mg/L）

表 2 兩組 IFN-γ、IL-6 水平比較（±s，mg/L）

組別 人數(shù)毛細支氣管炎組正常對照組36 30 tP--IFN-γ 67.36±31.29 99.74±15.37 3.211 0.026 IL-6 135.67±56.32 78.25±20.12 2.157 0.018

3 討論

毛細支氣管炎是嬰幼兒期的呼吸道病毒感染性疾病，也是嬰幼兒住院的主要原因，目前被國內(nèi)外廣泛關(guān)注，其主要由呼吸道合胞病毒（RSV）引起。毛細支氣管炎的臨床表現(xiàn)主要為喘憋，認為其機制與免疫功能紊亂有關(guān)。淋巴細胞及其亞群的檢測是判斷機體細胞免疫水平的重要指標。

T淋巴細胞是體內(nèi)重要的免疫細胞，在胸腺中發(fā)育成熟后進入外周血。T淋巴細胞介導(dǎo)的細胞免疫在機體免疫應(yīng)答和免疫調(diào)節(jié)方面起著核心作用。根據(jù)T淋巴細胞不同的表面標記和功能可分為CD3+T、CD3+CD4+T和CD3+CD8+T亞群。T細胞亞群中CD3+T是所有T淋巴細胞的表面標志，是機體細胞免疫的基礎(chǔ)；CD3+CD4+T細胞又稱輔助性/誘導(dǎo)性T淋巴細胞Th，Th細胞通過釋放多種細胞因子輔助B細胞和效應(yīng)T細胞活化，促進體液和細胞免疫，調(diào)節(jié)機體的免疫功能[3]；Th1和Th2是Th細胞的兩個亞群，Th1細胞主要分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α等炎癥因子，在抗細胞內(nèi)病原體（病毒、細菌及寄生蟲等）感染中發(fā)揮重要作用；Th2細胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-6和IL-10等炎癥因子，能激活B淋巴細胞合成IgE和IgG，介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答、過敏性和感染性疾病，在拮抗細胞外病原體（如細菌、寄生蟲）、B細胞增殖分化以及哮喘病等方面具有重要作用。此外，還可通過負性調(diào)節(jié)機制抑制Th1細胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，當它們維持在一定平衡狀態(tài)時，機體行使生理防御、自身穩(wěn)定和免疫監(jiān)視的免疫功能。一旦平衡狀態(tài)被打破，出現(xiàn)Th1或Th2增多，表現(xiàn)為Th細胞向Th1或Th2偏移，稱之為Th1或Th2優(yōu)勢狀態(tài)。CD3+CD8+T細胞又稱抑制性/殺傷性T淋巴細胞Ts，Ts細胞直接損傷靶細胞，抑制免疫功能[4]。Th、Ts細胞在功能上相互誘導(dǎo)、相互制約，形成T細胞網(wǎng)絡(luò)，對機體正常免疫功能的維持有重要的調(diào)節(jié)作用。正常情況下CD3+CD4+T/CD3+CD8+T比值維持動態(tài)平衡，是反映免疫系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的重要指標，一旦失去平衡，可以導(dǎo)致機體免疫功能紊亂而致病[5]。

Roe等[6]認為在毛細支氣管炎中，CD3+CD4+T細胞和CD3+CD8+T細胞可能被誘導(dǎo)產(chǎn)生編程性細胞死亡，導(dǎo)致急性毛細支氣管炎患兒外周血中淋巴細胞一過性減少。毛細支氣管炎的臨床主要表現(xiàn)類似哮喘樣發(fā)作，結(jié)合哮喘發(fā)病機制，認為其機制與免疫功能紊亂有關(guān)。研究報道毛細支氣管炎患者CD3+CD4+T/CD3+CD8+T比值增高[7]。本研究中，毛細支氣管炎組CD3+CD4+T、CD3+CD8+T與正常對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），CD3+T 百分比增高，CD3+CD4+T/CD3+CD8+T比值高于正常對照組（P＜0.05），差異有統(tǒng)計學意義，表明在毛細支氣管炎急性感染期存在T細胞亞群紊亂，這與國內(nèi)某些研究中發(fā)作期哮喘患兒外周血T細胞亞群有類似變化[8]的結(jié)論相同。

毛細支氣管炎的發(fā)病機制是一個復(fù)雜的病理過程，與病毒直接引起的細胞病理改變、免疫反應(yīng)以及個體遺傳差異性等的共同作用有關(guān)[9]，其中免疫學機制是致病的重要過程，有研究顯示，毛細支氣管炎和兒童哮喘可能存在著相同或相似的免疫學發(fā)病機制[10]。T淋巴細胞Th1/Th2亞群比例和功能失衡是哮喘的重要免疫發(fā)病機制，表現(xiàn)為Th1細胞功能低下，Th2細胞功能亢進。目前很多實驗顯示，在毛細支氣管炎的發(fā)病過程中，Th1/Th2處于失衡狀態(tài)，Th2類細胞因子表達和釋放增加，Th1類細胞因子相對受抑制，使毛細支氣管炎患兒體內(nèi)呈現(xiàn)Th2優(yōu)勢免疫應(yīng)答[11]。呼吸道合胞病毒所致毛細支氣管炎患者IFN-γ明顯降低，而IL-6升高[12]。本研究結(jié)果亦顯示，毛細支氣管炎患兒發(fā)病時IFN-γ低于正常對照組（P＜0.05），而IL-6水平高于正常對照組（P＜0.05），差異有統(tǒng)計學意義，與 Bueno SM 等報道相符。提示RSV毛細支氣管炎急性感染期發(fā)生細胞免疫失調(diào)，即Th1細胞功能受到抑制，Th2細胞功能亢進。

IL-6是B細胞產(chǎn)生抗體所必需的分化因子，可促進B細胞分化，且輔助Th2細胞產(chǎn)生IL-4，IL-4在IgE產(chǎn)生中起關(guān)鍵作用，并可促進IgE合成分泌亢進。IFN-γ由吞噬細胞和活化的Th1細胞分泌，調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，最重要的是誘導(dǎo)Th0細胞向Th1轉(zhuǎn)化，通過抑制IL-4的產(chǎn)生而對抗Th2細胞的功能。因此，毛細支氣管炎患兒Th細胞功能紊亂是導(dǎo)致患兒發(fā)生喘息的免疫學機制。

Puthothu等[13]認為，RSV毛細支氣管炎的發(fā)生、發(fā)展與Th1/Th2細胞的免疫失衡有關(guān)，在RSV感染過程中，伴隨疾病進展，Th2細胞反應(yīng)占優(yōu)勢，而在疾病恢復(fù)期Th1細胞反應(yīng)占主導(dǎo)。嬰幼兒嚴重的RSV感染更易發(fā)展為哮喘，而在哮喘的發(fā)病機制中Th2細胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)占主導(dǎo)[14]。

本研究結(jié)果表明，毛細支氣管炎患兒T淋巴細胞亞群比例改變及其分泌的細胞因子IFN-γ和IL-6的變化，提示毛細支氣管炎患兒存在免疫功能異常，為毛細支氣管炎患兒臨床免疫治療提供了理論依據(jù)。

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