張永兵，丁金美，何 娟

（1.泰州市環(huán)境監(jiān)測中心站，江蘇 泰州 225300；

2.江蘇省環(huán)境保護(hù)土壤有機(jī)污染物監(jiān)測重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇泰州 225300）

索氏提取 －固相萃取 －高效液相色譜法測定土壤中異丙隆

張永兵1，2，丁金美1，2，何 娟1，2

（1.泰州市環(huán)境監(jiān)測中心站，江蘇 泰州 225300；

2.江蘇省環(huán)境保護(hù)土壤有機(jī)污染物監(jiān)測重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇泰州 225300）

用索氏提取 －固相萃取 －HPLC方法測定土壤中異丙隆。利用正交實(shí)驗(yàn)分析影響索氏提取回收率的4種因素，其顯著性順序：提取溶劑的類型 ＞提取溶劑的比例 ＞提取溫度 ＞提取時(shí)間。最佳索氏提取條件：溫度 80℃，提取時(shí)間 8h，提取溶劑及比例 V正己烷∶V丙酮＝1∶3。方法檢測限 0.18 μg／kg，定量檢測下限0.90 μg／kg，回收率73.0%～89.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 ＜5%。

異丙??；索氏提??；固相萃??；高效液相色譜；土壤；測定

異丙隆是 1972年德國 Hoechst公司研制并推廣使用的脲類除草劑，主要適用于小麥、玉米、花生、棉花、水稻等作物防除禾本科雜草及大多數(shù)闊葉雜草［1～3］。由于這類物質(zhì)對(duì)人和動(dòng)物有很高的毒性［4～9］，歐盟規(guī)定飲用水中的的除草劑含量不得大于0.1μg／L。歐盟法規(guī)規(guī)定單個(gè)苯脲類農(nóng)藥在水中的殘留量不得大于 0.1μg／L，茶葉中異丙隆最大殘留限量 （MRL）標(biāo)準(zhǔn)為0.1mg／kg［10～12］。目前關(guān)于異丙隆殘留檢測報(bào)道多見于食品和水體，對(duì)于土壤中異丙 隆 殘 留分 析 的報(bào) 道 較少［13～16］。因此，建立索氏提取 －固相萃取 －高效液相色譜法測定土壤中異丙隆，為土壤管理與保護(hù)提供科學(xué)依據(jù)，對(duì)于農(nóng)產(chǎn)品安全生產(chǎn)具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 儀器材料

Waters 2695 高效液相 色 譜 儀；Waters 2996DAD檢測器；Waters Symmetry C18液相色譜柱250mm×4.6mm，5μm （美國沃特世科技有限公司）。CNWBOND Florisil SPE小柱 （上海安譜科學(xué)儀器有限公司）；LabTech EG20A PLUS電熱板（美國萊伯泰科公司）；異丙隆標(biāo)準(zhǔn)品 （純度99%），Sigma公司。正己烷、丙酮、二氯甲烷、乙腈和乙酸乙酯（色譜級(jí)）：百靈威公司。無水硫酸鈉 （分析純），石英砂 （化學(xué)純）：北京通廣精細(xì)化工公司。

1.2 提取方法

按照土壤監(jiān)測技術(shù)規(guī)范 （HJ／T 166－2004）采集和保存土壤樣品，土壤樣品采集于泰州市周邊的某農(nóng)田。實(shí)驗(yàn)時(shí)取土壤樣品2份，1份用于測定水分 （HJ613－2011），1份用于異丙隆的測定。取10.0g土壤樣品研磨后與 10.0g無水硫酸鈉混勻，再加入100ml提取溶劑于索氏提取器提取4h，收集提取液，常溫下用微弱氮?dú)獯蹈?，再加?ml正己烷震蕩溶解。

1.3 固相萃取

將5ml待凈化提取液加入到 SPE小柱中，用3ml正己烷淋洗，再用5ml二氯甲烷∶丙酮 （體積比1∶1）洗脫，收集洗脫液，常溫下氮?dú)鉂饪s，近干后加甲醇定容至1.0ml，待HPLC檢測。

1.4 色譜條件

流動(dòng)相：A乙腈，B水，80%A和20%B等梯度洗脫，速度1.0ml／min。紫外245nm，接收波長430nm，柱溫35℃。

2 結(jié)果與分析

2.1 索氏提取優(yōu)化

用正交設(shè)計(jì) L9（34）實(shí)驗(yàn)確定溶劑類型、溶劑比例、提取溫度和提取時(shí)間等四因素對(duì)索氏提取的影響，每個(gè)因素均取3個(gè)水平。溶劑類型：正己烷／丙酮、正己烷／二氯甲烷、正己烷／乙酸乙酯；溶劑比例：1∶1，1∶2，1∶3；提取溫度為60℃、70℃和80℃；提取時(shí)間：4h、6h和8h。按照實(shí)驗(yàn)部分中的方法進(jìn)行分析，影響索氏提取顯著性順序?yàn)椋禾崛∪軇┑念愋?＞提取溶劑的比例 ＞提取溫度＞提取時(shí)間 （見表1）。最佳索氏提取條件：溫度80℃，提取時(shí)間 8h，提取溶劑及比例 V正己烷∶V丙酮＝1∶3。

2.2 定性定量研究

本研究中，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留時(shí)間進(jìn)行未知色譜峰的定性分析；以外標(biāo)法定量，即通過比較所測樣品溶液與標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液中各組分的峰面積來定量，標(biāo)準(zhǔn)色譜圖見圖1。依次配制 0.01mg／L、0.02mg／L、0.05mg／L、0.08mg／L、0.10mg／L異丙隆標(biāo)準(zhǔn)溶液，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性相關(guān)系數(shù) r＝0.9992，回歸方程：y＝1371.53x－7.61。

表1 異丙隆的正交實(shí)驗(yàn)方案、極差和回收率

2.3 檢出限與定量限

依據(jù)美國 EPA SW－846中規(guī)定的方法檢出限，分別在7份10.0 g石英砂中加入10 μl 10.0 μg／L標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按照本方法處理，計(jì)算其標(biāo)準(zhǔn)偏差S，MDL＝S×t（n－1，0.99），連續(xù)分析7個(gè)空白加標(biāo)樣品，在 99%置信區(qū)間，7個(gè)分析值偏差均很小，此時(shí)，t（6，0.99）＝3.143，其中t（n－1，0.99）為置信度為99%、自由度為n－1時(shí)的t值，n為重復(fù)分析樣品數(shù)，得到本方法檢測限0.18 μg／kg，定量檢測下限 ［（LOQ）＝5MDL］是0.9 μg／kg。

2.4 精密度與加標(biāo)回收

依次向7份某農(nóng)田同點(diǎn)位同批次10g研磨后土壤樣品中加入 1.00～2.50 μg／kg異丙隆標(biāo)準(zhǔn)液，進(jìn)行7次加標(biāo)回收測定，回收率為73.0%～89.0% （表2）。

2.5 實(shí)際樣品的測定

依據(jù)梅花點(diǎn)法在某農(nóng)田采集 5個(gè)點(diǎn)位土壤樣品。平行測定6次，計(jì)算出土壤樣品中異丙隆，6次測定結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均 ＜5% （表3）。

表2 加標(biāo)回收率測得結(jié)果（μg／kg）

表3 實(shí)際樣品測定結(jié)果

3 結(jié)論

正交實(shí)驗(yàn) L9（34）表明：影響索氏提取顯著性順序?yàn)樘崛∪軇┑念愋?＞提取溶劑的比例＞提取溫度 ＞提取時(shí)間。最佳索氏提取條件：溫度80℃，提取時(shí)間8h，提取溶劑及比例V正己烷∶V丙酮＝1∶3。得到本方法檢測限0.18 μg／kg，定量檢測下限 0.9 μg／kg，回收率 73.0% ～89.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜5%。

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Determination of Isoproturon in Soil by Soxhlet's Extraction，Solid Phase Extraction，and High Performance Liquid Chromatography

ZHANG Yong－bing1，2，DING Jin－mei1，2，HE Juan1，2
（1.Taizhou Environmental Monitoring Center，Taizhou Jiangsu 225300 China）

A method for the determination of isoproturon in soil was established by Soxhlet's extraction，solid phase extraction（SPE），and high performance liquid chromatography（HPLC）.Four factors influencing the recovery rate through the orthogonal experiment were examined.Their significances rank as types of extraction solvents as the first，followed by ratios of extraction solvents，temperature，and extraction time.The optimal condition of Soxhlet's extraction is under 80℃ with 8 hours of extraction time and the volume ratio（1／3）of hexane and acetone.The test limit of this method is 0.18μg／kg.The recovery rate is between 73.0%and 89.0%with less then 5%of relative standard error.

isoproturon；Soxhlet's extraction；solid phase extraction（SPE）；high performance liquid chromatography（HPLC）；soil；determination

X83

A

1673－9655（2014）02－0099－04

2014－01－19

863項(xiàng)目《化學(xué)品風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與風(fēng)險(xiǎn)控制評(píng)價(jià)技術(shù)》，編號(hào)：2013AA06A309。

張永兵 （1975－），男，漢族，安徽合肥人，博士后，從事環(huán)境監(jiān)測工作。