阮記明 胡 鯤 楊先樂 章海鑫 王 祎 周愛玲 趙依妮

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雙氟沙星對(duì)異育銀鯽血腦屏障滲透性及消除規(guī)律

阮記明1, 2胡 鯤1楊先樂1章海鑫3王 祎1周愛玲1趙依妮1

(1. 上海海洋大學(xué)國家水生動(dòng)物病原庫, 上海 201306; 2. 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院, 南昌 330045; 3. 江西省水產(chǎn)科學(xué)研究所, 南昌 330039)

以異育銀鯽()為研究對(duì)象, 采用組織勻漿法和高效液相色譜法, 研究了雙氟沙星 (Difloxacin, DIF)通過異育銀鯽血腦屏障情況, 并比較分析了大腦和外周組織中DIF消除差異。結(jié)果顯示, 根據(jù)DIF 96h 半數(shù)致死劑量(2840 mg/kg b.W)給藥后, 第96h時(shí)異育銀鯽大腦組織勻漿中DIF的含量為(10.49±0.35) μg/g; 同時(shí)在臨床推薦用藥劑量(20 mg/kg)給藥后的15個(gè)時(shí)間點(diǎn)(0?960h)上均能從大腦組織勻漿中檢測(cè)出DIF。上述結(jié)果表明DIF能滲透通過血腦屏障而進(jìn)入異育銀鯽大腦組織。另外, 在大腦和外周組織消除過程上, 以大腦組織中的DIF消除過程最為平緩(按照 20 mg/kg給藥)。到試驗(yàn)第960h, 大腦組織中DIF含量最高, 為(0.392±0.007) μg/g, 且大腦中的消除半衰期最長, 為1157.713h。因此, 異育銀鯽大腦組織可作為DIF藥物殘留分析的靶組織。另根據(jù)歐盟關(guān)于食品中DIF最大殘留限量(MRL)之規(guī)定, 實(shí)驗(yàn)條件下DIF休藥期至少為25d。結(jié)果為研究魚類血腦屏障作用, DIF神經(jīng)毒性及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖上的臨床應(yīng)用提供了參考。

雙氟沙星; 組織勻漿法; 高效液相色譜法; 滲透性; 異育銀鯽

氟喹諾酮類(Fluorine quinolones, FQNS)藥物是自1984年諾氟沙星上市以來相繼涌現(xiàn)出的一大類含氟的氟喹諾酮類衍生物的總稱。近年來, FQNS因其具有抗菌譜廣、抗菌活性強(qiáng)、與其他抗菌藥物無交叉耐藥性等特點(diǎn)而被廣泛使用。隨著其廣泛被使用, 其毒副作用也逐漸顯現(xiàn)。有研究認(rèn)為, 氟喹諾酮類藥物的毒性主要有中樞神經(jīng)毒性、胃腸道毒性、肝臟毒性、軟骨毒性、生殖毒性等[1]。神經(jīng)毒性方面, 鄧艷萍[2]研究發(fā)現(xiàn), 在小鼠腦內(nèi)注射依諾沙星、環(huán)丙沙星、氧氟沙星與司巴沙星等5種氟喹諾酮類抗菌藥能引起致驚厥作用。在生殖毒性上, 黃文頤等[3]按300、150、50 mg/kg的鹽酸二氟沙星給受孕大鼠灌胃, 結(jié)果高劑量組胎鼠存活率明顯降低, 鹽酸二氟沙星顯著影響胚胎的生長發(fā)育, 其嚴(yán)重程度具有劑量效應(yīng)關(guān)系。

雙氟沙星 (Difloxacin, DIF), 又稱二氟沙星, 屬第三代氟喹諾酮類抗菌藥物, 是我國農(nóng)業(yè)部2000年批準(zhǔn)的國家三類新獸藥。因其對(duì)大多數(shù)革蘭氏陽性菌和陰性菌、支原體及某些耐藥菌株有很好的抗菌活性[4], 是水產(chǎn)養(yǎng)殖上常用的抗菌藥物之一。目前, 雖然在豬[5]、雞[6]以及水產(chǎn)養(yǎng)殖例如中華絨螯蟹[7]、牙鲆[8]、鯽魚[9, 10]等水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物上有大量關(guān)于DIF藥代動(dòng)力學(xué)方面的研究, 但對(duì)于DIF是否能滲透通過魚類血腦屏障(Blood-Brain Barrier, BBB) 進(jìn)入其大腦組織的研究還未見有報(bào)道。另外有研究認(rèn)為, DIF的作用機(jī)制與抑制性神經(jīng)遞質(zhì)γ-氨基丁酸(γ-Aminobutiric acid, GABA)相關(guān)[2, 11], 而GABA主要集中于大腦中。目前, 用于評(píng)價(jià)藥物BBB通透性主要有體內(nèi)評(píng)價(jià)、體外評(píng)價(jià)以及數(shù)學(xué)模型法等方法, 其中體內(nèi)評(píng)價(jià)方法主要是測(cè)定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦組織及腦脊液中的藥物成分, 腦組織勻漿法是考察藥物BBB通透性的體內(nèi)評(píng)價(jià)方法之一[12]。因此, 本文擬以異育銀鯽()為研究對(duì)象, 通過研究96h LD50及臨床推薦用藥劑量(20 mg/kg)下DIF是否能通過異育銀鯽血腦屏障; 如能通過血腦屏障, 其在大腦組織和外周組織中的消除過程差異如何, 本文擬為魚類血腦屏障、DIF神經(jīng)毒性研究及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖上的臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 主要儀器和藥品

主要儀器 Agilent-1100型高效液相色譜儀(四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測(cè)器)、高速冷凍離心機(jī)(Allegrax-15R)、漩渦混合器、氮?dú)獯蹈蓛x、超純水系統(tǒng)(Purelab Prima120)和精密電子天平(METTLER AB104-N)等。

主要試劑和藥品 DIF標(biāo)準(zhǔn)品購自Sigma公司; DIF原料藥(純度為98%)由浙江國邦藥業(yè)有限公司提供。正己烷、二氯甲烷、氯化鈉、檸檬酸、檸檬酸三鈉、磷酸、磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉為分析純; 乙腈、四丁基溴化銨為HPLC級(jí)(由國藥集團(tuán)化學(xué)有限公司購進(jìn))。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

540條體重為(60.04±5.02) g健康異育銀鯽, 購自江蘇省南通市某農(nóng)場, 運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室經(jīng)2% NaCl溶液浸泡10min后, 暫養(yǎng)2周。試驗(yàn)用水為充分曝氣的自來水, 暫養(yǎng)及試驗(yàn)期間控制水溫為(18±1)℃, 自然光照, 連續(xù)24h充氣, 每兩天換1次水, 每次換水量1/4, 試驗(yàn)用水族箱規(guī)格為100 cm×80 cm×80 cm。

1.3 給藥方式

將DIF按照相應(yīng)劑量(96h LD50和20 mg/kg)根據(jù)對(duì)應(yīng)體重用細(xì)導(dǎo)管將雙氟沙星灌入試驗(yàn)魚前腸, 無回吐現(xiàn)象的留作試驗(yàn)。其中96h LD50(2840 mg/kg b.W)由前期DIF急性毒性試驗(yàn)得到。

1.4 樣品采集

96h LD50組織樣品 試驗(yàn)分為3組, 每組20尾; 按照DIF 96h LD50給藥, 并于試驗(yàn)第96h采集大腦、肝臟、腎臟和肌肉等4種組織樣品用于DIF含量測(cè)定; 其中每6尾同一組織樣品混合為1個(gè)液相檢測(cè)樣品, 即每個(gè)時(shí)間點(diǎn)可以得到3個(gè)液相檢測(cè)樣品, 放入–20℃冷凍保藏以用于HPLC檢測(cè)。另在給藥前采取同一批試驗(yàn)魚對(duì)應(yīng)空白組織樣品。

臨床推薦劑量(20 mg/kg)組織樣品 DIF在魚類的臨床用藥劑量為5—20 mg/kg[13], 因此, 本次采用臨床用藥劑量上限(20 mg/kg)給藥。選擇480尾經(jīng)過暫養(yǎng)的健康異育銀鯽隨機(jī)分成6組, 分別于給藥后0.083、0.25、0.5、1、2、3、6、12、24、48、72、96、120、144、196、240、288、336、408、480、600、720、840和960h等24個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別采集大腦、肝臟、腎臟和肌肉組織樣品(樣品采集同上), 放入–20℃冷凍保藏至樣品處理; 給藥前采取同一批試驗(yàn)魚對(duì)應(yīng)空白組織樣品。

1.5 組織樣品處理[9]

精確稱取各組織勻漿樣品1.0 g, 置于離心管中, 加入1 mol/L NaCl和0.2 mol/L PBS緩沖溶液(pH 7.4)各1 mL, 再加入5 mL二氯甲烷進(jìn)行藥物萃取, 旋渦混合振蕩10min后, 4℃條件下8000 r/min離心10min, 取有機(jī)相; 剩余殘?jiān)性偌尤? mL二氯甲烷, 重復(fù)以上操作步驟進(jìn)行第二次萃取, 并合并兩次有機(jī)相, 于45℃恒溫氮?dú)鈼l件下吹干, 加1 mL流動(dòng)相溶解后, 加5 mL正己烷脫脂; 混勻、離心后將下層液體經(jīng)0.45 μm有機(jī)微孔濾膜過濾, 4℃保存至HPLC分析。

1.6 色譜條件

色譜柱為: ZORBAX SB2C-18分析柱(150 mm× 4.6 mm, 5 μm); 流動(dòng)相為: 乙腈: 四丁基溴化氨(0.030 mol/L、pH3.1)=5︰95(); 檢測(cè)波長278 nm; 流速1.5 mL/min; 柱溫40℃; 進(jìn)樣量10 μL。

1.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線、回收率和精密度

標(biāo)準(zhǔn)曲線 配制0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0和100.0 μg/mL系列DIF標(biāo)準(zhǔn)品溶液, 經(jīng)0.45 μm濾膜過濾后HPLC分析。以峰面積()為縱坐標(biāo), 質(zhì)量濃度()為橫坐標(biāo)繪制雙氟沙星標(biāo)準(zhǔn)曲線。

回收率和精密度 將0.1、1.0和10.0 μg/mL的DIF標(biāo)準(zhǔn)品添加到大腦、肝臟、腎臟及肌肉空白組織樣品中, 每個(gè)濃度3個(gè)平行, 每個(gè)平行設(shè)一個(gè)空白對(duì)照, 按照1.5組織樣品處理方法操作, 以測(cè)定回收率、日內(nèi)及日間精密度。

回收率(%)=樣品實(shí)測(cè)濃度/樣品理論濃度× 100%。

1.8 數(shù)據(jù)處理

采用Microsoft Excel繪制藥物標(biāo)準(zhǔn)曲線, 利用DAS 3.0藥代動(dòng)力學(xué)軟件計(jì)算藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 DIF檢測(cè)方法

高效液相色譜圖顯示DIF能與雜質(zhì)較好地分離, 基線平穩(wěn), 重現(xiàn)性好, 其保留時(shí)間分別為10.54min (圖1)。結(jié)果顯示, DIF標(biāo)準(zhǔn)溶液在0.01— 100 μg/mL濃度范圍內(nèi)呈線性關(guān)系(圖2), 其回歸方程為:=43.885+1.6226, 相關(guān)系數(shù):R=1, 其最低檢測(cè)限為0.01 μg/mL。各組織樣品按1.5處理方法操作后, 其平均回收率均處于90.2%—102.3%, 日內(nèi)精密度系數(shù)不大于3%, 日間精密度系數(shù)不大于5.8%; 以上數(shù)據(jù)提示本方法的靈敏度、精密度、穩(wěn)定性均符合本試驗(yàn)藥代動(dòng)力學(xué)研究技術(shù)要求。

2.2 96h LD50 劑量下DIF組織含量

根據(jù)前期急性毒性試驗(yàn)所得到的96h LD50(2840 mg/kg b.W)給藥后, 運(yùn)用本文所建立的方法測(cè)定大腦、肝臟、腎臟、肌肉4種組織中DIF含量分別為(10.49±0.35)、(73.36±2.17)、(4.33±0.35)、(26.48±2.07) μg/g。結(jié)果表明, 按照DIF 96h LD50劑量給藥后, 在第96h時(shí)DIF能從大腦組織中被檢測(cè)出來, 說明在96h LD50劑量條件下DIF能滲透通過異育銀鯽血腦屏障而進(jìn)入其大腦組織; 另外, 在96h LD50劑量下, 4種組織中DIF的含量高低次序?yàn)? 肝臟>肌肉>大腦>腎臟; DIF在肝臟組織中的殘留量最高(73.36±2.17) μg/g; 而作為機(jī)體主要排泄器官的腎臟, 其DIF含量最小, 僅為(4.33±0.35) μg/g。

圖1 雙氟沙星標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

圖2 雙氟沙星標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3 大腦與外周組織中DIF消除結(jié)果

DIF采用臨床用藥劑量上限(20 mg/kg)單次前腸投喂給藥, 其各組織濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)經(jīng)DAS 3.0藥物代謝動(dòng)力學(xué)軟件擬合均符合一級(jí)吸收開放性二室房室模型。另外, 各組織中DIF主要代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)(表1)表現(xiàn)為: ①達(dá)峰時(shí)間(max): 大腦=腎臟>肌肉>肝臟; ②達(dá)峰濃度(max): 肝臟>腎臟>肌肉>大腦; ③消除半衰期(1/2β): 大腦>肌肉>腎臟>肝臟; ④藥時(shí)曲線下面積(AUC): 肌肉>腎臟>肝臟>大腦。各組織中DIF消除過程(圖3)顯示, 在4種組織中, 以大腦組織中的DIF消除過程最為平緩; 且到試驗(yàn)第960h, 大腦組織中DIF含量最高, 為(0.392± 0.007) μg/g, 極顯著高于肝臟及肌肉中相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)DIF含量。另外試驗(yàn)期間后5個(gè)時(shí)間點(diǎn)各組織中DIF含量見表2。

表1 DIF (20 mg/kg)單次前腸投喂給藥后各組織藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)

表 2 雙氟沙星(20 mg/kg)單次前腸投喂給藥最后5個(gè)時(shí)間點(diǎn)各組織含量

注: 同一行上標(biāo)字母相同者差異不顯著(>0.05), 字母不同者差異顯著(<0.05或<0.01)

Note: Values with same letter superscripts in the same row mean no difference (>0.05), with different letters superscripts mean significant difference (<0.05 or<0.01)

圖 3 雙氟沙星(20 mg/kg)單次前腸投喂給藥后大腦、肝臟、腎臟及肌肉組織藥時(shí)曲線

3 討論

3.1 DIF血腦屏障滲透性

目前, 關(guān)于藥物透過機(jī)體屏障方面已有大量研究。在血乳屏障研究上, 在克羅地亞, 從初乳中檢測(cè)出了包括阿莫西林在內(nèi)的多種獸藥[14]。Escudero,.從哺乳山羊的乳中檢測(cè)到雙氟沙星表明其能透過血乳屏障。Hoy,.[16]研究表明阿維菌素能透過血睪屏障而產(chǎn)生毒性效應(yīng)。而在血腦屏障研究上, 丁明玉等[17]采用反相高效液相色譜法測(cè)定了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦勻漿中的川芎嗪, 說明川芎嗪能夠透過血腦屏障。大鼠動(dòng)脈灌注培氟沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、氟羅沙星和司帕沙星等氟喹諾酮類藥物后, 在其大腦組織中可以檢測(cè)到相應(yīng)藥物的存在[18]。另外, 在體外也有關(guān)于FQNS透過血腦屏障的研究[19]。

目前, 還未見有關(guān)于DIF是否能通過魚類血腦屏障進(jìn)入其大腦組織的報(bào)道。而用于藥物BBB通透性的評(píng)價(jià)方法主要有體內(nèi)評(píng)價(jià)、體外評(píng)價(jià)以及數(shù)學(xué)模型等方法, 其中體內(nèi)評(píng)價(jià)方法主要是測(cè)定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦組織及腦脊液中的藥物成分, 腦組織勻漿法是考察藥物BBB通透性的體內(nèi)評(píng)價(jià)方法之一[12]。本文采用腦組織勻漿法, 測(cè)定了96h LD50及臨床推薦用藥劑量下, 異育銀鯽大腦組織中DIF存在與否。結(jié)果顯示, 在 96h LD50劑量(2840 mg/kg b.W)下, 大腦組織中DIF含量為(10.49±0.35) μg/g, 說明DIF能透過異育銀鯽血腦屏障進(jìn)入大腦組織; 而作為機(jī)體主要排泄器官, 腎臟中DIF含量最小, 僅為(4.33±0.35) μg/g。這可能是由于在體內(nèi), DIF能被代謝為沙拉沙星(Sarafloxacin, SAR)而以DIF原型及其代謝產(chǎn)物(SAR)等兩種形式排泄出體外[7, 9], 因而在腎臟組織中DIF殘留量最少。另外, 在臨床推薦用藥劑量(20 mg/kg)下的不同時(shí)間點(diǎn)均能從異育銀鯽大腦組織中檢測(cè)到DIF存在, 表明低劑量的DIF也能透過異育銀鯽血腦屏障。另一方面, 大腦組織在達(dá)峰時(shí)間(12h)最長、達(dá)峰濃度(2.410 μg/g)最小, 這可能正是因?yàn)檠X屏障的存在而引起的。

DIF血腦屏障通透性一方面預(yù)示DIF可以應(yīng)用于異育銀鯽或其他水產(chǎn)動(dòng)物腦部疾病的治療上, 另一方面也提示在臨床使用DIF的時(shí)候應(yīng)考慮其中潛在的風(fēng)險(xiǎn)(例如神經(jīng)毒性)。鄧艷萍[2]研究發(fā)現(xiàn), 在小鼠腦內(nèi)注射依諾沙星、環(huán)丙沙星、氧氟沙星與司巴沙星等5種氟喹諾酮類抗菌藥能引起致驚厥作用。在本文中異育銀鯽大腦組織中DIF的檢出, 可以認(rèn)為是研究其是否具有神經(jīng)毒性的物質(zhì)基礎(chǔ), 甚至是證明其具有神經(jīng)毒性的有力佐證。有研究表明, 強(qiáng)力霉素作為一種半合成的四環(huán)素類抗生素, 因其脂溶性高而容易透過血腦屏障[20]。氟喹諾酮類藥物分子結(jié)構(gòu)中第6位碳原子上有疏水性的氟原子, 因此, 該類藥物具有一定的脂溶性, 能較好地透過血腦屏障進(jìn)大腦組織。目前, 對(duì)于DIF進(jìn)入異育銀鯽大腦組織的機(jī)制尚不清楚, 這可能與其脂溶性有關(guān)。

3.2 大腦及外周組織DIF消除規(guī)律比較

通常將殘留量高、消除最慢的組織看成是殘留分析的靶組織。李海迪等[21]在對(duì)雙氟沙星及其代謝產(chǎn)物在中華絨螯蟹體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的研究中發(fā)現(xiàn), DIF組織殘留高低順序?yàn)? 肝胰腺>卵巢>肌肉≈血淋巴>精巢, 認(rèn)為肝胰腺中藥物殘留最高, 消除最緩慢, 因此可作為殘留分析的靶組織。在本文中, DIF按照20 mg/kg采取單次前腸投喂給藥后, 大腦及外周組織DIF消除過程見圖3。結(jié)果顯示, 在4種組織中, 以大腦組織中的DIF消除過程最為平緩; 雖然達(dá)峰濃度(max)大腦組織最小, 但是到試驗(yàn)最后5個(gè)時(shí)間點(diǎn)時(shí), 各組織中DIF含量接近(表2), 且在試驗(yàn)第960h, 大腦組織中DIF含量最高, 為(0.392±0.007) μg/g; 另外, 大腦組織中DIF消除半衰期(1/2β)最長1157.713h, 因此, 異育銀鯽大腦組織可作為DIF藥物殘留分析的靶組織。

4 結(jié)論

本文運(yùn)用大腦組織勻漿法, 首次從異育銀鯽的大腦組織中檢測(cè)到了DIF的存在, 說明DIF能透過異育銀鯽血腦屏障進(jìn)入大腦組織, 這一方面預(yù)示DIF可以應(yīng)用于異育銀鯽或其他水產(chǎn)動(dòng)物腦部疾病的治療上, 另一方面也提示我們?cè)谂R床使用這兩種藥物的時(shí)候應(yīng)考慮其中潛在的風(fēng)險(xiǎn)(例如神經(jīng)毒性)。另外, 本文認(rèn)為大腦組織可作為異育銀鯽DIF藥物殘留分析的靶組織, 而魚類大腦組織是否可以作為其他水產(chǎn)藥物殘留分析的靶組織還有待進(jìn)一步的研究。盡管前期DIF急性毒性試驗(yàn)得到其96h LD50為2840 mg/kg, 可以認(rèn)為DIF對(duì)異育銀鯽為低毒物質(zhì)。但是本文結(jié)果顯示, 在96h LD50及臨床推薦用藥劑量(20 mg/kg)下, DIF均通過BBB進(jìn)入異育銀鯽大腦組織; 而有研究表明, 氟喹諾酮類藥物與機(jī)體GABA及γ-氨基丁酸受體有關(guān)[2], 但其發(fā)生機(jī)制尚不清楚, 這有待進(jìn)一步開展DIF與其相關(guān)受體相互作用關(guān)系等研究加以求證。

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Blood-brain barrier permeability of DIF and its elimination comparative study between brain and peripheral tissues in

Ruan Ji-Ming1, 2, HU Kun1, Yang Xian-Le1*, Zhang Hai-Xin3, Wang Yi1, Zhou Ai-Ling1and Zhao Yi-Ni1

(1. National Pathogen Collection Center for Aquatic Animals, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China; 2. College of Animal Sciences and Technology, Jiangxi Agricultural University, Nanchang 330045, China; 3. Jiangxi Fisheries Research Institute, Nanchang 330039, China)

Nowadays, difloxacin (DIF) which belongs to Fluorine quinolones (FQNS), has become one of the widely used drugs. For aquatic animals,the permeability of DIF getting through blood-brain barrier has not been reported. Usingas the research object, the blood-brain barrier permeability of DIF and its elimination comparative study between brain and peripheral tissues were conducted with tissue homogenate and high performance liquid chromatography (HPLC) methods. The results showed that, at the 96thhour, the content of DIF in brain tissue homogenate was (10.49±0.35) μg/g following its 96 hour median lethal dose (96h LD50); and the existences of DIF in brain could be detected at the 15 time points (0?960h) after the administration with its clinical recommended dosage (20 mg/kg). The results indicated that the DIF could penetrate through the blood-brain barrier into brain of. In addition, the elimination process of DIF in brain after the administration of 20 mg/kg was the gentlest one among the tissues involved in this research. The highest content of DIF in brain was (0.392±0.007) μg/g. The highest value was reached at the 960thhour. The longest1/2βof DIF in brain was 1157.713h. The brain ofcould be used as a target tissue for DIF residual analysis. Furthermore, according to the regulation of European Union (2003) about the maximum residue limits (MRL) of DIF on food, the withdrawal time of DIF should be longer than 25d under the experiment conditions. The results would provide references for blood-brain barrier researching in fish, and for nerve toxi-city explorations of DIF and its clinical application in aquaculture.

Difloxacin; Tissue homogenate method; HPLC; Permeability;

2013-01-04;

2013-12-19

“863”計(jì)劃項(xiàng)目(2011AA10A216); 國家自然科學(xué)基金(31172430); 農(nóng)業(yè)公益性行業(yè)專項(xiàng)(201203085)資助

阮記明(1974—), 男, 江西貴溪人; 在讀博士; 主要從事水產(chǎn)病害及水質(zhì)調(diào)控研究。E-mail: rjm903@163.com

楊先樂(1949—), 男, E-mail: xlyang@shfu.edu.cn

S948

A

1000-3207(2014)02-0272-07

10.7541/2014.40