徐春華

原發(fā)性高血壓病人導(dǎo)致血壓上升的病因不明，該病是多種心腦血管疾病的誘因與危險(xiǎn)因素［1］，基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPS）能夠?qū)⒒啄ひ约鞍饣|(zhì)的絕大部分蛋白質(zhì)降解，而基質(zhì)金屬蛋白酶－3（MMP－3）被認(rèn)為是與動脈硬化密切相關(guān)的基質(zhì)金屬蛋白酶，MMP－3基因的啟動子－1171（6A／5A）的序列差異暗示高血壓病人動脈硬化具有遺傳易感性［2］。本文分析高血壓病病人頸動脈硬化與MMP－3基因啟動子多態(tài)性的相關(guān)性，為有效防治高血壓病動脈粥樣硬化提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 本院2010年5月—2013年5月收治原發(fā)性高血壓病人108例（觀察組），男性62例，女性46例，年齡54歲～76歲（55.77歲±10.02歲）。全部病人根據(jù)2004年《中國高血壓病診斷指南》進(jìn)行診斷與分級，同時將肥胖者、關(guān)節(jié)疾病、痛風(fēng)、免疫疾病、慢性炎癥、近期心肌梗死、未控制的充血性心力衰竭、外周動脈疾病、中風(fēng)伴肢體偏癱、短暫性腦缺血發(fā)作、繼發(fā)性高血壓病以及腫瘤者予以排除。在我院同期進(jìn)行健康體檢的106例體檢者作為對照組，男性63例，女性43例，年齡54歲～77歲（56.02歲±8.98歲）。兩組均對臨床生化指標(biāo)以及血液MMP－3基因型進(jìn)行檢測，觀察組高血壓者69例與對照組體檢者31例采取頸動脈超聲檢查。

1.2 檢測方法

1.2.1 超聲檢查 應(yīng)用西門子SONOLINE G60S彩色多普勒超聲診斷儀進(jìn)行檢查，選擇探頭頻率（5.0～7.5）MHz。從頸總動脈起始后縱向分別對頸總動脈、分叉處、頸內(nèi)外動脈進(jìn)行探查，至頸動脈最高處后旋轉(zhuǎn)探頭90°角，順血管走行橫向進(jìn)行掃查，對斑塊及其位置、大小以及是否有頸動脈內(nèi)－中膜厚度（IMT）增厚等狀況進(jìn)行觀察記錄。

1.2.2 超聲檢查指標(biāo) 頸動脈內(nèi)－中膜厚度：在舒張末期的雙側(cè)頸總動脈起始處、分叉前10 mm 處以及膨大處進(jìn)行分別測量；頸動脈粥樣斑塊：局部呈凸起且增厚，向管腔內(nèi)突起的厚度＞1.2mm，對斑塊發(fā)生處進(jìn)行定位。

1.2.3 臨床檢查指標(biāo) 測定受檢者身高、體重、血壓等，計(jì)算體重指數(shù)?？崭钩槿?mL晨靜脈血，對膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL－C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL－C）以及三酰甘油（TG）檢測。

1.2.4 檢測MMP－3基因多態(tài)性 抽提受檢者血液DNA，設(shè)計(jì) 一 對 正 義 引 物 5′－GTTCTCCATTCCTTTGATGGGGGGAAAG－3′以及反義引物5′－TTCCTGGAATTCACATCACTGCCACCAC－3′進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增。對擴(kuò)增后得到的PCR 產(chǎn)物進(jìn)行PsyⅠ酶切，獲得約127bp長的片段，酶切產(chǎn)物經(jīng)電泳后，結(jié)果顯示MMP－3 基因啟動子－1171位點(diǎn)具有明顯的多態(tài)性，不同受檢者分別出現(xiàn)1、2、3 條泳帶，對應(yīng)三類基因型，將其命名為6A／6A、5A／5A 以及5A／6A，片段長度127bp（6A／6A）和127bp、95bp、30bp（5A／6A），95bp、30bp。通過公式：1／2（純合子×2＋雜合子）／受檢者例數(shù)來計(jì)算等位基因頻率。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。受檢者基因型與Hardy－Weinberg平衡的符合度、等位基因頻率以及組間基因型對比采用四格表χ2檢驗(yàn)；對所得計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)采用率表示，并采取χ2檢驗(yàn)。對頸總動脈相關(guān)參數(shù)的影響因素進(jìn)行多元逐步回歸分析，針對兩因素之間的相關(guān)性進(jìn)行Pearson 相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組基因型及等位基因頻率分布狀況 觀察組與對照組受檢者的基因型分布均與Hardy－Weinberg平衡一致。觀察組6A／6A 基因型（65.7%）與6A 等位基因頻率（82.4%）高于對照組基因型（53.8%）與等位基因頻率（75.9%），但分布差異相比不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（基因型P ＝0.092，等位基因P ＝0.118）；男女性別相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表1。

表1 觀察組與對照組基因型及等位基因頻率分布狀況分析

2.2 兩組基因型及頸動脈IMT 之間的相關(guān)性 與對照組相比，觀察組5A／5A＋5A／6A 基因型病人在起始部位、膨大前以及膨大部位的IMT均出現(xiàn)增厚，兩組差異相比不顯著（P ＞0.05）；觀察組6A／6A 基因型病人在起始部位、膨大前以及膨大部位的IMT 均顯著高于對照組（P＜0.05）。詳見表2。

表2 不同基因型頸動脈IMT 指標(biāo)對比

表2 不同基因型頸動脈IMT 指標(biāo)對比

與對照組相比，1）P＜0.05。

基因型 起始 部 位 5A／膨5大A＋前51A0／6mAm（ m處m ） 膨大部位 起始部位 膨6A大／6前A1（0mmmm） 處 膨大部位觀察組 0.80±0.19 0.84±0.18 1.16±0.21 1.07±0.181） 0.99±0.191） 1.29±0.181）對照組 0.71±0.18 0.64±0.18 0.95±0.20 0.77±0.16 0.70±0.20 0.99±0.18

觀察組不同基因型頸總動脈內(nèi)徑與IMT 對比分析，觀察組6A／6A 基因型病人頸總動脈分叉前部位的IMT 高于5A／5A＋5A／6A 基因型病人（P＜0.05）；但兩基因型在頸總動脈內(nèi)徑方面相比不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。詳見表3。

表3 觀察組不同基因型頸總動脈內(nèi)徑與IMT 對比

表3 觀察組不同基因型頸總動脈內(nèi)徑與IMT 對比

同5A／5A＋5A／6A 基因型相比，1）P＜0.05。

基因型 分叉前處IMT（mm） 頸總動脈內(nèi)徑（mm）5A／5A＋5A／6A（16） 0.84±0.18 7.05±0.81 6A／6A（54） 0.99±0.191） 7.21±0.79

2.3 心血管病危險(xiǎn)因素

2.3.1 心血管病一般危險(xiǎn)因素與IMT 的相關(guān)性 簡單相關(guān)性：病人年齡、脈壓、舒張壓、收縮壓以及體重指數(shù)與IMT 的Pearson 相關(guān)系數(shù)（r）依次為0.661，0.392，0.039，0.409，－0.334（P＜0.05）；偏相關(guān)：在限制年齡后，病人的脈壓、舒張壓、收縮壓以及體重指數(shù)與IMT 的Pearson 相關(guān)系數(shù)（r）依次為0.114，0.188，0.225，－0.304（P＜0.05）。

2.3.2 觀察組頸總動脈IMT 與內(nèi)徑影響因素的逐步回歸結(jié)果將觀察組頸總動脈IMT 與內(nèi)徑（D）均作為應(yīng)變量（Y），將危險(xiǎn)因素 年齡（Xa）、脈壓（Xb）、收縮壓（Xc）、舒張壓（Xd）、體重指數(shù)（Xe）、基因型（Xf）、三酰甘油（Xg）以及低密度脂蛋白膽固醇（Xh）作為自變量進(jìn)行逐步回歸分析。結(jié)果表明：病人年齡與舒張壓是頸總動脈內(nèi)徑的關(guān)鍵影響因素（回歸系數(shù)依次為0.05，0.027，P＜0.05，YD＝1.594＋0.05Xa＋0.027Xc）；病人年齡、舒張壓、體重指數(shù)是IMT 的關(guān)鍵影響因素（回歸系數(shù)依次為0.010，0.008，－0.005，P＜0.05，YIMT＝－0.221＋0.010Xa＋0.008Xc－0.005Xe）。

3 討 論

同時對健康人群與心血管病高危人群開展的心血管病研究以及流行病學(xué)研究均提示，頸動脈內(nèi)－中膜厚度指標(biāo)與大部分傳統(tǒng)的心血管病的危險(xiǎn)因素之間具有一定的相關(guān)性，而且對健康人群開展的研究顯示，年齡與內(nèi)－中膜厚度之間呈現(xiàn)出線性相關(guān)，高齡人群發(fā)生普遍的IMT 增厚者并未全部檢出斑塊形成，故而提出IMT 增厚在某種意義上來說是機(jī)體老化過程中所伴發(fā)的生理反應(yīng)［3］。高血壓病患者所處的分級越高、脈壓越大，其頸動脈內(nèi)徑就越大，IMT 厚度增加以及斑塊的檢出率就越高［4］。使用脈壓來預(yù)測心血管事件的危險(xiǎn)程度較應(yīng)用收縮壓與舒張壓更加靈敏，脈壓是心腦血管疾病發(fā)病與致死的獨(dú)立危險(xiǎn)因子，脈壓升高與心血管病病人的死亡率密切相關(guān)［5］。本研究簡單相關(guān)分析結(jié)果表明，受檢者的年齡與IMT 之間具有最密切的相關(guān)性，病人年齡、脈壓、收縮壓以及體重指數(shù)與頸總動脈內(nèi)－中膜厚度均有密切的相關(guān)性，但在限制年齡后的偏相關(guān)分析顯示，病人的脈壓、收縮壓以及體重指數(shù)與內(nèi)－中膜厚度的相關(guān)性均出現(xiàn)降低，差異比較不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

基質(zhì)金屬蛋白酶屬于內(nèi)切蛋白水解酶家族成員之一，其發(fā)揮作用需有鋅離子存在，該酶能夠降解基底膜及胞外基質(zhì)部位的絕大部分蛋白質(zhì)［6］。MMP－3作為基質(zhì)金屬蛋白酶家族成員之一，其具有廣泛的特異性底物，包括膠原、蛋白聚糖、層連蛋白、纖連蛋白以及明膠等，除可以將上述底物降解以外，處于活性狀態(tài)的MMP－3還能夠?qū)⑵渌冈せ?，進(jìn)一步產(chǎn)生一個正反饋環(huán)，故而MMP－3 在MMPS 家族激活途徑中具有重要作用；MMP－3在斑塊降解、纖維沉積及鈣化過程中發(fā)揮作用，其啟動子具有多態(tài)性，包括高活性5A／5A、中間活性5A／6A 以及低轉(zhuǎn)錄活性6A／6A。6A／6A 基因型者與頸動脈IMT 較厚具有密切的相關(guān)性，6A／6A 基因型的男性IMT 較其他基因型者厚15%左右，而且6A／6A 基因型的健康男性其IMT 也較其他健康基因型要厚［7］。

孫曉明等［8］對頸內(nèi)動脈狹窄病人的研究表明，對照組6A純合子的基因型頻率與6A 等位基因頻率顯著低于觀察組，這與本研究結(jié)果相符。本研究中6A／6A 基因型者頸動脈IMT 出現(xiàn)增厚，且內(nèi)徑增大；6A／6A 基因型者較6A／5A 基因型者斑塊多。6A／6A 基因型者在其動脈壁中存在少量的有活性的基質(zhì)細(xì)胞溶解酶，推測這是由其低水平的基因轉(zhuǎn)錄而引發(fā)的微弱蛋白水解活動，這將加快細(xì)胞外基質(zhì)的沉積速度，最終使動脈硬化斑塊進(jìn)一步產(chǎn)生并發(fā)展。MMP－3能夠參與動脈粥樣硬化的發(fā)展過程，MMP－3低表達(dá)基因型個體的重塑以及降解基質(zhì)的能力低下，造成動脈壁內(nèi)中膜快速增厚并形成斑塊。6A 等位基因是造成頸內(nèi)動脈狹窄的一個獨(dú)立性危險(xiǎn)因子。本結(jié)果顯示，病人年齡、體重指數(shù)以及舒張壓是頸動脈內(nèi)－中膜厚度的獨(dú)立性危險(xiǎn)因素，而基因型則沒有進(jìn)入逐步回歸方程，推測這可能是由于本樣本偏少造成的。此外，在對136例糖尿病病人以及101例健康男性受檢者的研究中，健康男性的6A／6A 基因型者其頸動脈內(nèi)徑寬，且其IMT 出現(xiàn)增厚，而糖尿病組病人的三個基因型之間相比不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［9］。

由于檢測技術(shù)、儀器設(shè)備等諸多因素影響，本項(xiàng)研究尚存在一定的不足，目前認(rèn)為動脈粥樣硬化是由多基因控制的疾病，基因多態(tài)性與基因表達(dá)之間具有密切的相關(guān)性，單個基因的效應(yīng)常常被遮蓋住，難以顯現(xiàn)出來，故而應(yīng)依據(jù)其病理生理的變化情況，研究多個候選基因，從整體上、多角度進(jìn)行分析，而且選取的樣本量應(yīng)大，注意要有充分的代表性，明確各個基因多態(tài)性的效應(yīng)，進(jìn)而實(shí)施有針對性的方法來調(diào)控MMPS的表達(dá)情況，最終實(shí)現(xiàn)治療的目的。

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