薛平　曲向陽(yáng)

摘要 自2006年5月起藍(lán)耳病的高致病毒株導(dǎo)致豬群以持續(xù)高熱、繁殖障礙、高死亡率為特征的疾病，并迅速蔓延至我國(guó)其他養(yǎng)豬省份及周邊國(guó)家，成為影響我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的最重要的疾病，造成重大經(jīng)濟(jì)損失。近年來(lái)，國(guó)家、科研院所及大型養(yǎng)豬企業(yè)對(duì)我國(guó)高致病性藍(lán)耳病的流行病學(xué)調(diào)查、病原分子進(jìn)化與特性分析、診斷、疫苗研發(fā)及其防控措施上進(jìn)行了大量的研究與實(shí)踐工作。從我國(guó)HPPRRS的流行病學(xué)狀況、HPPRRSV的分子生物學(xué)特征、診斷、疫病研發(fā)與使用以及防控措施等方面對(duì)我國(guó)高效病性藍(lán)耳病的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述。

關(guān)鍵詞 豬高致病性藍(lán)耳?。籋PPRRSV；病原分子特征；診斷；疫苗研發(fā)；防控措施；

中圖分類號(hào) S852.65+1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2014）05-01389-04

豬繁殖與呼吸道綜合征（Procine reproductive and respiratory syndrome ，PRRS）又稱為藍(lán)耳病，是目前全球養(yǎng)豬業(yè)所面臨的最重要的傳染病，據(jù)估計(jì)該病每年給美國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)造成6.44億美元（2011年，存欄豬6400萬(wàn)）的經(jīng)濟(jì)損失[1]。該病以造成母豬繁殖障礙、仔豬呼吸道疾病為主要臨床癥狀，1987年美國(guó)與加拿大首次報(bào)道該疾病[2]，隨后歐洲也報(bào)道了類似疾病，1991年荷蘭成功分離藍(lán)耳病病毒（Lelystad virus）并依照科赫法則復(fù)制了該病的臨床癥狀，1992年美國(guó)也分離到PRRV VR 2332[3-4]。 至今為止，除瑞士、瑞典、新西蘭、澳大利亞等少數(shù)國(guó)家藍(lán)耳病檢測(cè)結(jié)果呈陰性外，其他養(yǎng)豬國(guó)家均感染了該疾病[5]。

我國(guó)是世界上最大的生豬養(yǎng)豬與豬肉消費(fèi)國(guó)，2013年我國(guó)母豬存欄5 068萬(wàn)，生豬存欄量4.68億。隨著我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)規(guī)?；M(jìn)程的加快，為提高生產(chǎn)成績(jī)與品種改良，從國(guó)外（特別是美國(guó)與加拿大）引種與場(chǎng)間種畜交流的頻率與規(guī)模也隨之增加，生豬運(yùn)輸伴隨著巨大的生物安全風(fēng)險(xiǎn)，藍(lán)耳病也借此在我國(guó)廣泛流行，特別是2006年高致病性藍(lán)耳病（Highly pathogenic PRRS，HPPRRS）毒株出現(xiàn)以來(lái)，經(jīng)濟(jì)損失與防控壓力日趨嚴(yán)重，已經(jīng)成為威脅我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的重要疾病。雖然我國(guó)學(xué)者尚未對(duì)HPPRRS對(duì)養(yǎng)豬業(yè)經(jīng)濟(jì)的影響進(jìn)行評(píng)估，但從美國(guó)的經(jīng)驗(yàn)看，藍(lán)耳病所造成的損失中12%與母豬的繁殖性障礙有關(guān)，43%與生長(zhǎng)豬的死亡有關(guān)，45%與生長(zhǎng)豬飼料轉(zhuǎn)化率變差、生長(zhǎng)緩慢有關(guān)。

1 我國(guó)HPPRRS的流行病學(xué)狀況

1995年我國(guó)報(bào)道了首例藍(lán)耳病臨床案例[5]。1996年哈爾濱獸醫(yī)研究所郭寶清等在我國(guó)分離到首株藍(lán)耳病病毒株CH-1a。臨床上主要以懷孕豬后期流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎等繁殖性障礙及保育、生長(zhǎng)豬出現(xiàn)呼吸道癥狀、生長(zhǎng)緩慢、高發(fā)病率，高死亡率，臨床癥狀也與美洲、歐洲的報(bào)道非常類似。因?yàn)镻RRSV主要在肺泡巨噬細(xì)胞及其他單核細(xì)胞中復(fù)制，可以抑制宿主的免疫應(yīng)答，導(dǎo)致宿主對(duì)其他病原的易感性增加。特別是圓環(huán)病毒病在我國(guó)傳播后PRRS常與圓環(huán)病毒2型、偽狂犬病毒、豬鏈球菌、大腸桿菌與副豬嗜血桿菌等病原混合感染[6]。

自2006年5月以來(lái)，江西省發(fā)生了以持續(xù)高熱（41～42 ℃）、體表發(fā)紺、呼吸困難、高發(fā)病率（50%～100%）、死亡率（20%～100%）為主要特征的熱性病，發(fā)病豬場(chǎng)幾乎各階段的豬均會(huì)受到影響，通常哺乳仔豬發(fā)病率達(dá)100%，保育仔豬的發(fā)病率為70%，育肥豬的發(fā)病率為20%。懷孕各階段的母豬均受到影響，40%以上的妊娠母豬會(huì)發(fā)生流產(chǎn)，甚至有10%的母豬死亡。因?yàn)槲醇皶r(shí)采取措施限制豬群的交易與運(yùn)輸，至2006年8月河南、河北、山東、北京、廣東等省份也出現(xiàn)了類似疾病[7]，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室診斷確認(rèn)是由于HPPRRS感染所致[8]。2007年初，HPPRRS已蔓延至我國(guó)大部分的養(yǎng)豬地區(qū)，發(fā)病豬數(shù)量超過(guò)200萬(wàn)頭，生豬價(jià)格也因此出現(xiàn)較大波動(dòng)。與此同時(shí)，越南（2007年3月）、老撾、柬埔寨、緬甸、泰國(guó)、韓國(guó)、不丹等周邊國(guó)家也確認(rèn)了高致病豬藍(lán)耳病的發(fā)生（OIE網(wǎng)站）。

Bin Li等[9]對(duì)2006～2010年來(lái)自全國(guó)主要養(yǎng)豬省份的2 981份臨床樣品分析表明，2006年，56.3%的樣品HPPRRSV檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性，7.85%樣品呈經(jīng)典PRRSV陽(yáng)性，而2007～2010年檢測(cè)病例HPPRRSV陽(yáng)性率分別為64.86%、55.06%、71.71%和54.03%，而經(jīng)典PRRSV的檢出率為0。5年間所檢發(fā)病豬樣品的HPPRRSV平均陽(yáng)性率為60.85%，說(shuō)明HPPRRSV變異株占據(jù)了我國(guó)PRRS感染的主導(dǎo)地位。從區(qū)域分布來(lái)看，安徽、湖北與河南地區(qū)樣品的陽(yáng)性率最高，超過(guò)68%。Zhao Zhanzhong[6]等于2008～2010年對(duì)4個(gè)藍(lán)耳病陽(yáng)性的豬場(chǎng)（位于上海、浙江、湖北

、江西）的801個(gè)樣品進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果表明68.9%的樣品RTPCR檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性，且PRRS的感染沒(méi)有明顯的季節(jié)性差異。Shang Y[10]等于2007～2010年對(duì)我國(guó)西北部的15豬場(chǎng)的322份來(lái)自于流產(chǎn)或仔豬呼吸道癥狀豬的樣品進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)PRRSV的陽(yáng)性率為35.9%，全部屬于HPPRRSV，但陽(yáng)性率低于全國(guó)其他地區(qū)。Yu X[11]等檢測(cè)了來(lái)自我國(guó)、老撾、越南等多個(gè)東南亞國(guó)家的919份樣品，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HPPRRSV的陽(yáng)性率達(dá)45.2% （415/919），僅0.1% （1/919） 的樣品屬于經(jīng)典PRRSV。以上的PRRSV的流行病學(xué)調(diào)查均表明目前我國(guó)所流行的PRRSV基本上均屬于HPPRRSV，且臨床樣品的陽(yáng)性率為35.9%～60.8%[6，9-11] ，存在一定的區(qū)域差異。

因?yàn)镠PPRRSV具有免疫抑制作用，因此HPPRRS常與其他病原（如圓環(huán)病毒、鏈球菌、副豬嗜血桿菌及大腸桿菌）發(fā)生混合感染[6]。當(dāng)HPPRRSV與圓環(huán)病毒2型同時(shí)感染時(shí)，2種病毒的復(fù)制都會(huì)得到增強(qiáng)，從而導(dǎo)致更嚴(yán)重的臨床癥狀，故HPPRRSV與PCV2在感染豬時(shí)具有協(xié)同作用[12]。另外研究也證實(shí)HPPRRSV感染能夠促進(jìn)副豬嗜血桿菌病的發(fā)生[13]。

2 HPPRRSV的分子生物學(xué)特征

PRRSV屬于單股、正鏈有囊膜的RNA病毒，基因組大小為15～15.5 kb，可分為美洲型（VR2332，1型）與歐洲型（Lelystad virus，2型）2種基因型，2個(gè)基因型間的同源性約為60%[14]。我國(guó)分離的PRRSV毒株與美洲型的同源性為89%，與歐洲型的同源型為60%，至今為止我國(guó)所分離的PRRSV毒株基本上都屬于美洲型[9-10，15]。2011年Chen N等[16]報(bào)道了我國(guó)首例歐洲型毒株（與美洲型基因組的同源性僅為58.0%～58.2%），目前PRRS在歐洲與美洲也打破了區(qū)域的專屬性。PRRSV容易發(fā)生變異，以其基因、抗原性、致病性的多變異性著稱。同一基因型不同毒株間的基因差異性可達(dá)20%，特別是NSP2、ORF5區(qū)域變異較大，常作為研究PRRSV基因變異與分子流行特征調(diào)查的2個(gè)目標(biāo)靶位。

自2006年HPPRRSV出現(xiàn)伊始，該病毒一直在發(fā)生著快速的變異。與經(jīng)典的PRRSV相比，導(dǎo)致2006年HPPRRS的毒株的NSP2缺失90個(gè)堿基（即30個(gè)氨基酸）[8]，其與所分離的CH1a（1996年分離）間同源性為94.9～95.4%，與NB/04（2004年）同源性為97.6%～98.2%，與HB-1（sh）/2002的同源性為96.7%～97.2%[7] 。近年來(lái)所分離的PRRSV毒株NSP2均存在30堿基的缺失，與2006年所分離的HPPRRSV相同，因此NSP2 缺失30堿基可作為鑒別HPPRRSV的主要分子生物學(xué)特征。但是也有研究表明，NSP2所編碼區(qū)域缺失30個(gè)堿基并非是HPPRRSV毒力增強(qiáng)的根本原因[17]。因此，目前HPPRRSV的致病機(jī)理與毒力增強(qiáng)的因素尚有待進(jìn)一步研究。

除NSP2以外，由ORF5編碼的GP5蛋白也是PRRSV最易發(fā)生變異的蛋白，該蛋白含有主要的中和抗原表位且具有免疫原性。對(duì)ORF5的氨基酸序列分析，可將我國(guó)的PRRSV病毒分成3個(gè)基因亞型。Xie J等[15]自2007～2011年從來(lái)自南方276個(gè)豬場(chǎng)的3 199份臨床樣品中選取51份PRRSV陽(yáng)性的樣品，對(duì)ORF5基因進(jìn)行了測(cè)序分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這51份樣品分屬3個(gè)亞基因型，其中45份樣品屬于亞基因型1，與經(jīng)典的HPPRRSV（JXA1）非常接近；只有1份樣品屬于亞基因型2，即與美洲型代表株V2332非常接近；其他5份屬于亞基因型3，其與亞基因型1的46份樣品間只有79.6%～83.6%的同源性，ORF5變異顯著。這說(shuō)明雖然目前HPPRRSV在南方豬場(chǎng)占主導(dǎo)（與Bin Li等[9]的研究結(jié)果一致），但有部分毒株的GP5蛋白/ORF5正發(fā)生顯著變異。特別是2009～2010年的華中地區(qū)樣品的GP5與JXA1相比已經(jīng)不處于同一個(gè)進(jìn)化分支，1個(gè)誘變位點(diǎn)發(fā)生突變（V29 → A29）[18]。Shang Y[10]等的研究也發(fā)現(xiàn)我國(guó)西北部自2009年以后樣品的GP5蛋白的抗體誘發(fā)位點(diǎn)的核苷酸發(fā)生了突變。HPPRRSV GP5主要中和表位上的關(guān)鍵氨基酸的改變可能會(huì)導(dǎo)致這些HPPRRSV野毒能夠逃脫由CH1a與JXA1R等疫苗所誘導(dǎo)產(chǎn)生的免疫保護(hù)，使HPPRRSV在豬體內(nèi)形成持續(xù)性感染[9]。此外，新分離HPPRRSV中也可能會(huì)出現(xiàn)GP3蛋白抗原漂移及5′UTR與3′UTR發(fā)生氨基酸缺失等變異[19]。

從致病力的角度來(lái)看，雖然HPPRRSV在2006～2012年正快速發(fā)生著變異，但仍保持著相似的高致病力，比如病豬體溫升高（>41 ℃，至少4 d），可使4～10周齡仔豬出現(xiàn)100%的發(fā)病率，40%～100%的死亡率[11]。從組織嗜性來(lái)看，HPPRRSV比低毒力的PRRSV表現(xiàn)出更廣泛的組織嗜性，這可能是其致病力增強(qiáng)的原因之一[20]。

3 診斷

PRRS的診斷目前主要采用臨床診斷與實(shí)驗(yàn)室診斷相結(jié)合的方式。

（1）臨床診斷：當(dāng)HPPRRS發(fā)生感染時(shí)，通常妊娠母豬或育肥豬先出現(xiàn)臨床癥狀，持續(xù)高熱（41～42 ℃），傳播快（3～5 d即可傳播至整群），病程約為1～3周，體表發(fā)紺并伴隨著高發(fā)病率與高死亡率。因?yàn)樗?jīng)常與其他病原混合感染，因此也難以根據(jù)剖檢病變來(lái)做出準(zhǔn)確判斷。（2）

實(shí)驗(yàn)室診斷主要依靠血清學(xué)方法與分子生物學(xué)方法。①ELISA。雖然已經(jīng)研究出針對(duì)所缺失的29個(gè)氨基酸建立了ELISA診斷方法，用于鑒別高致病性毒株與經(jīng)典毒株的所產(chǎn)生的抗體[21]，但目前尚未在實(shí)踐中推廣使用。目前HPPRRS疫苗的大量使用也為這種試劑盒的應(yīng)用帶來(lái)了障礙。②分子生物學(xué)方法。根據(jù)HPPRRSV缺失90個(gè)堿基序列的特點(diǎn)，建立RTPCR、實(shí)時(shí)熒光RTPCR、多重實(shí)時(shí)定量RTqPCR（可對(duì)歐洲型與美洲型進(jìn)行分型，并鑒定出HPPRRSV[22]）等方法對(duì)HPPRRSV與PRRSV進(jìn)行鑒別診斷。

4 疫苗研發(fā)與應(yīng)用

我國(guó)于2000年批準(zhǔn)上市首個(gè)藍(lán)耳病滅活疫苗（CH-1a），2005年批準(zhǔn)上市了首個(gè)藍(lán)耳病弱毒疫苗（Ingelvac，V2332）。2006年發(fā)生高致病性藍(lán)耳病以后，國(guó)家又批準(zhǔn)上市了利用HPPRRS分離株研發(fā)的滅活疫苗JXA1。但這些疫苗對(duì)高致病性藍(lán)耳病無(wú)法提供有效的免疫保護(hù)，或僅能提供部分免疫保護(hù)。此后，我國(guó)研究人員又先后研發(fā)上市了CH-1R（2009年）、R98（2009年）等經(jīng)典毒株弱毒苗以及JXA1R（2009年）、HuN4F112（2011年）、TJMF92（2011年2月）等不同毒株HPPRRS疫苗。其中，TJMF92與所分離的TJ野毒株相比，在NSP2上有120個(gè)氨基酸發(fā)生了連續(xù)缺失，48個(gè)氨基酸發(fā)生了基因變異，毒力明顯降低[23]。因?yàn)榕c其他HPPRRSV野毒株相比連續(xù)缺失120個(gè)氨基酸（360個(gè)堿基），可通過(guò)ELISA或RTPCR的方法將疫苗株與野毒進(jìn)行鑒別區(qū)分[24]。因?yàn)樵摦a(chǎn)品上市時(shí)間較短，其對(duì)HPPRRS的臨床保護(hù)效果還有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

研究表明，PRRS的滅活疫苗無(wú)法提供針對(duì)HPPRRS的有效保護(hù)。具有標(biāo)記的弱毒疫苗的開(kāi)發(fā)成為目前藍(lán)耳疫苗研發(fā)的熱點(diǎn)。新的HPPRRSV野毒株的弱化篩選工作仍在進(jìn)行。Wang X[25]等將所分離的HPPRRSV JX143傳代 100次后得到JXM100，JXM100的NSP2位點(diǎn)有88個(gè)連續(xù)的氨基酸發(fā)生缺失，其毒力顯著降低，免疫仔豬后對(duì)JX143有保護(hù)力，也可用于鑒別自然感染與疫苗毒，但目前尚未進(jìn)行進(jìn)一步的安全性、穩(wěn)定性等方面的研究。Wei Y 等[26 ]利用同樣的方法將野毒傳代 125次后，發(fā)現(xiàn)有45個(gè)氨基酸發(fā)生了變異，2個(gè)氨基酸缺失，毒力也大幅降低。Yu X等[27]的研究表明將JXA1連續(xù)傳代超過(guò)110次后得到的變異毒株的免疫原性與免疫保護(hù)力均顯著降低，說(shuō)明野毒株經(jīng)過(guò)110次傳代后被過(guò)度弱化。

我國(guó)有些學(xué)者也在嘗試研發(fā)新型PRRS疫苗，比如利用重組的偽狂犬病毒或腺病毒來(lái)表達(dá)GP5、M或其他蛋白，或利用重組質(zhì)粒來(lái)表達(dá)GP5/Gp3蛋白，以開(kāi)發(fā)DNA疫苗[28]，但這些新型疫苗尚未應(yīng)用于臨床上。

因?yàn)槟壳拔覈?guó)已批準(zhǔn)上市的PRRS疫苗種類繁多，如經(jīng)典弱毒株（V2332、CH-1R與R98）和高致病性藍(lán)耳病弱毒株（江西株JXA1-R、湖南株HuN4-F112、天津株TJMF92），再加上國(guó)內(nèi)外學(xué)者與養(yǎng)豬企業(yè)對(duì)PRRS疫苗使用觀點(diǎn)的差異，導(dǎo)致我國(guó)目前藍(lán)耳疫苗的使用非?；靵y，多種疫苗株的同時(shí)使用很可能會(huì)導(dǎo)致疫苗株間的同源重組，導(dǎo)致疫苗株毒性返強(qiáng)的可能。

2011年Zhanzhong Zhao等[6]對(duì)我國(guó)滅活疫苗（JXA1、CH-1a）與經(jīng)典株弱毒疫苗（CH-1R、V2322）的免疫效果及我國(guó)17個(gè)省的723家豬場(chǎng)的PRRS使用狀況進(jìn)行了調(diào)查。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)典弱毒疫苗的免疫效果優(yōu)于滅活疫苗。母豬群與仔豬群不進(jìn)行免疫的豬場(chǎng)比例分別為51.73%和59.75%。從免疫策略來(lái)看，對(duì)母豬進(jìn)行全群免疫優(yōu)于“660”方案（母豬分娩后6 d與配種后60 d），對(duì)仔豬斷奶前免疫優(yōu)于斷奶后免疫。

5 防控措施

自藍(lán)耳病出現(xiàn)以來(lái)，養(yǎng)豬行業(yè)已經(jīng)與該病斗爭(zhēng)、共存了20多年。由于該病毒的快速變異、免疫逃避及分布廣泛等原因，全球尚沒(méi)有控制該疾病直接而有效的方式。目前藍(lán)耳病的防控已成為全球養(yǎng)豬業(yè)共同面臨的難題。常用的措施包括生物安全、疫苗免疫、生產(chǎn)管理（特別是后備母豬管理）、同群感染、清群/重新引入（Depopulation/Repolulation）、封群等。

我國(guó)僅有少數(shù)的養(yǎng)豬企業(yè)通過(guò)嚴(yán)格的管理與生物安全措施維持著HPPRRS的雙陰性。但是，因?yàn)樯a(chǎn)方式多樣化、管理水平較低和生物安全意識(shí)比較淡薄，使疫苗免疫成為目前大部分豬場(chǎng)防控藍(lán)耳病的主要選擇。母豬群使用PRRS 弱毒疫苗每季度全群免疫1次，可使母豬群的免疫狀態(tài)趨于一致，降低群體中易感豬的比例。因?yàn)樗{(lán)耳疫苗建立有效的免疫至少需要4周的時(shí)間[29]，因此免疫時(shí)間的選擇非常重要，斷奶前免疫（如15～18日齡）的效果應(yīng)優(yōu)于斷奶后免疫。建議進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)，以確定豬場(chǎng)藍(lán)耳病在仔豬上的暴露時(shí)間以判斷最佳的免疫時(shí)間[6]。但目前多種不同類型的經(jīng)典PRRS弱毒疫苗與HPPRRS弱毒疫苗的上市，使豬場(chǎng)面臨疫苗選擇的困惑，不同疫苗株之間或野毒株與HPPRRS疫苗毒間存在同源重組，從而加速了HPPRRSV的變異進(jìn)程。各種新上市疫苗的臨床有效性及安全性（毒力返強(qiáng)）也有待進(jìn)一步評(píng)估。

HPPRRS爆發(fā)時(shí)常伴隨著豬鏈球菌、副豬嗜血桿菌及大腸桿菌等細(xì)菌性疾病的混合感染。因此，在感染的高峰期（如保育階段）添加抗生素進(jìn)行藥物預(yù)防具有重要意義。此外，體內(nèi)外試驗(yàn)表明替米考星等藥物可間接抑制藍(lán)耳病毒的復(fù)制，從而降低藍(lán)耳病所造成的影響[30-31]。我國(guó)科研人員還發(fā)現(xiàn)隱孔菌提取物可在體內(nèi)與體外抑制高致病性藍(lán)耳病病毒的復(fù)制，病毒在體內(nèi)的含量[32]，但尚未應(yīng)用于臨床。

因?yàn)槲覈?guó)豬病感染比較復(fù)雜，利用發(fā)病動(dòng)物的血清進(jìn)行同群感染的風(fēng)險(xiǎn)較大，目前僅有部分豬場(chǎng)在嘗試。然而，清群/重新引入（Depopulation/Repolulation）的方法成本過(guò)大，維持陰性的難度過(guò)大，也很難被國(guó)內(nèi)的養(yǎng)豬企業(yè)所采納。

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