胡瑞君　溫平　王良　劉復(fù)軍　李金寶

摘要：以茯苓、黃芪提取液中多糖和甲苷的含量及出膏率為指標，采用正交設(shè)計及分光光度法對提取工藝條件進行優(yōu)選，結(jié)果為浸泡12h，浸提1次，料水比1：15，細粉粒度為最佳。

關(guān)鍵詞：茯苓 黃芪 多糖 黃芪甲苷 含量測定

中圖分類號：P284 文獻標識碼：A 文章編號：1672-5336（2014）08-0014-02

1 引言

茯苓為多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核，多糖為其主要成分之一，具有抑制腫瘤生長，調(diào)節(jié)機體免疫等功能[1]。黃芪為豆科植物，其主要成分為黃芪甲苷、多糖等，所含黃芪甲苷具有增強免疫力、抗疲勞，保肝等作用[2]，黃芪多糖由己糖醛酸、阿拉伯糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸等組成，可作為免疫促進劑或調(diào)節(jié)劑，同時具有抗病毒、抗腫瘤等作用。茯苓和黃芪均有增強免疫系統(tǒng)活性和抑制腫瘤細胞增殖等作用，兩者配伍，標本兼治，提高藥效。因此，我們以多糖和甲苷的含量及出膏率為指標，采用正交設(shè)計及分光光度法考察不同提取工藝對茯苓和黃芪免疫成分的影響，為茯苓和黃芪的合理利用提供依據(jù)。

2 材料與方法

2.1 材料與試劑

茯苓、黃芪購自哈爾濱市藥材批發(fā)市場。

黃芪甲苷標準品（中國藥品生物制品檢測所），其它試劑為國產(chǎn)分析純。

2.2 儀器設(shè)備

UV1102型紫外可見分光光度計；FW80型高速萬能試樣粉碎機、HH-S數(shù)顯恒溫水浴鍋、DHG-9070A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、SHB-3循環(huán)水多用真空泵、201D-Ⅱ旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、BS200S電子天平。

2.3 方法

2.3.1 葡萄糖標準曲線的繪制

準確稱取無水葡萄糖對照品（105℃干燥至恒重）20.2mg，加水溶解并定至100mL，此即葡萄糖標準品溶液。分別吸取葡萄糖標準溶液0.0，0.1，0.2，0.4，0.6和0.8mL置具塞試管中，各加水至1.0mL，再各加5%苯酚溶液2.0mL，搖勻，迅速滴加濃硫酸6.0mL，迅速搖勻，置沸水浴中加熱30min，取出，置冷水浴中迅速冷卻至室溫，另以1mL蒸餾水同樣操作，做空白對照。在490nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程：A=54.18C+0.0294（R=0.9979）。

2.3.2 黃芪甲苷標準曲線的繪制

準確稱取黃芪甲苷標準品（干燥至恒重）5.2mg，用無水乙醇溶解并定容至10mL，此即黃芪甲苷標準溶液。分別吸取黃芪甲苷標準溶液0.0，0.1，0.2，0.3，0.4 和0.5mL，各加無水乙醇至0.6mL，再加入8%（w/v）香草醛無水乙醇試劑0.5mL，搖勻。加入72%硫酸5mL，搖勻后置于62℃水浴保溫20min，取出，置冷水浴中迅速冷卻至室溫，另以0.6mL無水乙醇同樣操作，做空白對照。在538nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得到回歸方程：A=21.53C+0.0186（R=0.9988）。

2.4 提取工藝的確定

在每次提取時間不變的情況下，選擇浸泡時間、提取次數(shù)、料水比和藥材粒度為因素[3，4]，選用L9（34）因素水平表安排正交試驗，各因素水平見表1。稱取茯苓和黃芪（各100g）9份以表2的9種工藝條件組合進行煎煮提取，最后確定最佳提取工藝。

2.5 提取過程中樣品溶液制備

將2.4所提取的樣品溶液濃縮至100mL，置烘箱中出膏，稱取浸膏1g置于燒杯中，用少量95%的乙醇溶解，移出上清液，反復(fù)操作2次，合并上清液待用。將沉淀用水溶解并定容至100mL，從中吸取1mL移入25mL容量瓶中定容，此即待測的多糖樣品溶液。

合并上清液，置沸水浴中揮干乙醇，然后用20mL水溶解，置于分液漏斗中，用水飽和的正丁醇萃取3次，每次10mL。合并萃取液，用飽和正丁醇10mL洗1次，減壓濃縮至干。以50%甲醇20mL溶解濃縮物，溶液以0.5mL/min的速度通過中性氧化鋁柱（4g，100～200目，柱長15cm），并繼續(xù)用50%甲醇40mL沖柱。合并通過液及洗液，減壓濃縮至干，以無水乙醇溶解并定容至25mL容量瓶中，此即待測的甲苷樣品溶液[5]。

3 結(jié)果與分析

按2.4設(shè)計提取工藝進行試驗，結(jié)果見表2。從出膏率、多糖含量及甲苷含量等方面進行綜合評分，滿分為100分，其中出膏率、多糖含量、甲苷含量的權(quán)重分別為20分、50分、30分。以評分結(jié)果作為衡量提取工藝的指標。出膏率10%為20分，25%為0分，多糖含量20mg/g為50分，5mg/g為0分，甲苷含量0.60mg/g為30分， 0.10mg/g為0分。

從表2正交表的結(jié)果可知，提取最佳工藝條件組合為A2B1C3D3，按照所得最佳工藝條件提取，平行做三次，得分為74.24?？紤]到料水比對濃縮、出膏時耗能、耗時影響大，所以選擇A2B1C2D3組合，即浸泡時間為12h，浸提1次，料水比1：15，細粉粒度為最佳。

4 結(jié)論

茯苓、黃芪所含多糖、甲苷均為可調(diào)節(jié)人體免疫功能的成分，對其提取工藝優(yōu)化的研究為茯苓和黃芪的合理利用提供依據(jù)。通過實驗，得出茯苓、黃芪復(fù)方免疫成分最佳提取工藝為：浸泡時間為12h，浸提1次，料水比1：15，細粉粒度。

參考文獻

[1]劉林，霍志斐，史樹堂，等.茯苓多糖的藥理作用概述[J].河北中醫(yī)，2010，32（9）：1427.

[2]楊曉雷，曹云.從黃芪生藥中提取黃芪甲苷的工藝研究[J].現(xiàn)代化工，2008，28（2）：373.

[3]郝建萍，王昌利，孫靜.不同切制法對茯苓中茯苓多糖含量的影響[J].陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2010，33（1）：55～56.

[4]黃際薇.正交法優(yōu)化黃芪中黃芪甲苷提取工藝研究[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報，2005，21（3）：257.

[5]李津明，單寅新，孫仁爽，等.茯苓和黃芪最佳精制工藝的研究[J].哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版） ，2006，22（3）：5～7.