王宏源姚千足

（1 江蘇省昆山市中醫(yī)醫(yī)院，江蘇 昆山 215300；2 南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京 210046）

潔陰洗劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

王宏源1姚千足2

（1 江蘇省昆山市中醫(yī)醫(yī)院，江蘇 昆山 215300；2 南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京 210046）

目的建立潔陰洗劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜法鑒別蛇床子素，采用酸性染料比色法測(cè)定潔陰洗劑中生物總堿的含量。結(jié)果潔陰洗劑中含有蛇床子素，且小檗堿濃度在0.0187～0.0936 mg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，平均回收率為99.03%，RSD為2.34%。結(jié)論薄層色譜法快速簡(jiǎn)便。含量測(cè)定方法簡(jiǎn)便易行，穩(wěn)定性、重復(fù)性、精密度高，具有較好的專(zhuān)屬性和準(zhǔn)確度。

潔陰洗劑；蛇床子素；小檗堿；薄層色譜；酸性染料比色法

潔陰洗劑是我院自制的外用中藥洗劑，其處方由蛇床子、苦參、土荊皮、百部、馬鞭草、黃柏、冰片等藥味組成，具有清熱燥濕，殺蟲(chóng)止癢的功效，臨床用量較大。為有效控制其產(chǎn)品質(zhì)量，確保臨床療效，本文建立了制劑中有效成分蛇床子素的薄層色譜鑒別方法，并采用酸性染料比色法對(duì)主要藥味黃柏中含有的小檗堿進(jìn)行含量測(cè)定，取得了較為理想的結(jié)果，可作為該制劑質(zhì)量控制的依據(jù)。

1 儀器與試藥

760CRT型紫可見(jiàn)分光光度計(jì)；硅膠預(yù)制板G。甲醇，三氯甲烷等試劑均為分析純，蛇床子素標(biāo)準(zhǔn)品；鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品；潔陰洗劑（昆山市中醫(yī)醫(yī)院制劑室提供，500毫升/瓶，批號(hào)131207、131117、131013）。

2 方法與結(jié)果

2.1 蛇床子素薄層色譜鑒別

2.1.1 供試品的制備：取潔陰洗劑制劑500 mL，蒸干，殘?jiān)尤? mL 95%乙醇，超聲溶解30 min，移至25 mL容量瓶中，加95%乙醇稀釋至刻度為止，備用。

2.1.2 陰性對(duì)照的制備：按比例稱(chēng)取制劑處方藥材，不加蛇床子，置500 mL容量瓶中第一次加水320 mL煎煮2 h，第二次加水200 mL，煎煮1 h。合并濾液，過(guò)濾。加入冰片，蒸干，殘?jiān)尤? mL 95%乙醇，超聲溶解30 min，過(guò)濾，移至5 mL容量瓶中，加95%乙醇稀釋至刻度為止，備用。

2.1.3 對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取蛇床子素標(biāo)準(zhǔn)品1.0 mg，置于2 mL容量瓶中，用適量的95%乙醇溶解，再用95%乙醇稀釋至刻度為止，制成0.50 mg/mL的對(duì)照品溶液，備用。

2.1.4 薄層色譜的鑒別：吸取供試品溶液、陰性對(duì)照溶液、標(biāo)準(zhǔn)品溶液各1 μL，分別點(diǎn)樣于硅膠G薄層板上，以苯-乙酸乙酯（20∶1）為展開(kāi)劑[1]，檢視斑點(diǎn)的位置。供試品溶液在色譜中含有對(duì)照品溶液在色譜中的斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照溶液不含有對(duì)照品溶液在色譜中的斑點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明供試品溶液中含有蛇床子素（圖1）。

2.2 總生物堿含量測(cè)定（以鹽酸小檗堿計(jì)）：精密稱(chēng)取鹽酸小檗堿對(duì)照品5.4 mg制成濃度為0.0936 mg/mL的對(duì)照品溶液，取醫(yī)院自制的潔陰洗劑制劑三份，為批號(hào)131207、131117、131013的三個(gè)批次，備用。以溴甲酚紫為酸性染料，檸檬酸-檸檬酸鈉為緩沖液、pH為3.2，緩沖液用量為10.0 mL，酸性染料用量為1.0 mL，三氯甲烷用量為10 mL，萃取2次，每次5 mL。分別精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液1 mL置分液漏斗中，加入檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液（pH=3.2）10.0 mL，溴甲酚紫溶液1.0 mL搖勻，加入三氯甲烷，振搖提取2次，每次5.0 mL分取三氯甲烷層，合并兩次提取液，用紫外分光光度儀在200～500 nm范圍內(nèi)掃描（圖2、3）。

由掃描結(jié)果可知，鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品與供試品在409 nm處均有明顯的吸收峰，故可用409 nm作為該實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.3 線(xiàn)性關(guān)系考察：精密量取對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分別置5 mL容量瓶中，蒸餾水稀釋至刻度。分別精密量取稀釋后的對(duì)照品溶液各1.0 mL，分別置分液漏斗中，加入檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液（pH=3.2）10.0 mL，溴甲酚紫溶液1.0 mL搖勻，加入三氯甲烷，振搖提取2次，每次5.0 mL分取三氯甲烷層，合并兩次提取液，以相應(yīng)的試劑為空白。照紫外可見(jiàn)分光光度法[3]，于409 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光值，得到線(xiàn)性回歸方程：Y=6.0038X+0.0911，R=0.9963。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)考察結(jié)果

2.4 精密度試驗(yàn)：精密量取對(duì)照品溶液2 mL，置10 mL容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，精密量取1 mL，照2.3項(xiàng)下的方法自“置分液漏斗中”起，重復(fù)測(cè)定5次，結(jié)果RSD=1.09%，精密度良好。

圖1 蛇床子素薄層的薄層色譜圖(1：蛇床子素對(duì)照品；2：潔陰洗劑（批號(hào)131117）；3：陰性對(duì)照)

圖2 鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液的全波長(zhǎng)掃描

圖3 供試品溶液的全波長(zhǎng)掃描

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密量取供試液1 mL，置25 mL容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，精密量取1 mL，照2.3項(xiàng)下方法自“置分液漏斗中”起，每隔10 min，共60 min內(nèi)測(cè)定吸收度，吸光度平均值0.222，RSD=2.57%，結(jié)果表明供試品液在60 min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)：取醫(yī)院制劑制備6份供試品液，精密量取各供試品液1 mL，置于25 mL容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，再精密量取1 mL，依法測(cè)定吸光度。見(jiàn)表2。

表2 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.7 加樣回收率實(shí)驗(yàn)：精密量取已知含量供試品溶液1 mL，置于25 mL容量瓶?jī)?nèi)，精密吸取上述溶液1 mL和濃度為0.0187 mg/mL的鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液1 mL，混合后取1 mL，依法測(cè)定吸光度，平行操作六份，回收率均值為99.03%。

2.8 含量測(cè)定：按上述方法，測(cè)定三批潔陰洗劑總生物堿含量（以小檗堿計(jì)），各3份，共9份供試品。所測(cè)得的含量為稀釋25倍的樣品含量，經(jīng)計(jì)算得到最終的樣品含量，批號(hào)：131013平均含量0.5541 mg/mL，RSD1.63%；批號(hào)：131013平均含量0.5531 mg/mL，RSD1.64%；批號(hào)：131013平均含量0.5550 mg/mL，RSD1.24%。

2.9 制劑含量標(biāo)準(zhǔn)：依據(jù)2.8，取三個(gè)批次樣品的總生物堿（以小檗堿計(jì)）平均含量的80%暫作為該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，供醫(yī)院今后生產(chǎn)該制劑時(shí)作為參考，即暫定每瓶樣品中總生物堿（以小檗堿計(jì)）含量不得低于0.4433 mg/mL。

3 討 論

小檗堿的含量測(cè)定我們最初采用紫外分光光度法直接測(cè)定，分別將鹽酸小檗堿對(duì)照品溶于甲醇，陰性對(duì)照品溶液和供試品溶液蒸干后加入甲醇溶解，再依次測(cè)各溶液的吸光度[2]。實(shí)驗(yàn)對(duì)小檗堿對(duì)照品、制劑供試品和陰性對(duì)照品進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描。結(jié)果顯示：鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液在330 nm處有明顯的吸收峰，供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液在330 nm處也含有明顯吸收但峰形不明顯，且陰性對(duì)照品與供試品相差不大，考慮潔陰洗劑中的中藥成分較多，不排除含其他生物堿或物質(zhì)在該處也含有吸收峰，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影響，故放棄直接測(cè)定吸光度。

選擇利用酸性染料與生物堿的有色離子對(duì)形成反應(yīng)可以去除其他成分對(duì)其吸光度的影響，且在405 nm處有吸收峰[3]，經(jīng)實(shí)測(cè)，由于受對(duì)照品、溶劑、操作等因素的影響，測(cè)得酸性染料比色法處理后鹽酸小檗堿在409 nm處有明顯的吸收峰且干擾較小，故最后確定采用酸性染料比色法進(jìn)行含量測(cè)定。

此次通過(guò)對(duì)潔陰洗劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究，建立了對(duì)蛇床子素的薄層色譜鑒別方法以及酸性染料比色法對(duì)潔陰洗劑中總生物堿的含量測(cè)定方法。薄層色譜法快速簡(jiǎn)便，色譜斑點(diǎn)清晰、圓整、無(wú)拖尾。含量測(cè)定方法簡(jiǎn)便易行，穩(wěn)定性、重復(fù)性、精密度高，具有較好的專(zhuān)屬性和準(zhǔn)確度。目前，按照省食藥監(jiān)局的要求，醫(yī)院制劑均要逐步完善及提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系，逐步建立定性、定量測(cè)定方法，本次研究結(jié)果，可作為潔陰洗劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的重要參考和依據(jù)，今后條件許可，可進(jìn)行更深入的研究，從而不斷完善其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，確保臨床療效。

[1] 張曉麗,曹愛(ài)民.薄層掃描法測(cè)定抗風(fēng)濕膠囊中蛇床子素含量[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2004,15(9):646.

[2] 汪怡.酸性染料比色法測(cè)定黃連解毒湯中總生物堿的含量[J].安徽醫(yī)藥,2013,17(5):759-761.

[3] 羅國(guó)平,孟會(huì)寧,張?jiān)讫?等.小陷胸顆粒中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定[J].河北醫(yī)藥,2012,34(10):1568-1569.

R282.710.2

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1671-8194（2014）29-0072-02