張艷紅 趙桂鳳 尹奎夫 劉美華 魏秀平

(1.濰坊市婦幼保健院內(nèi)科；2濰坊市人民醫(yī)院，山東 濰坊 261011)

生物體中普遍存在的生物鐘系統(tǒng)，調(diào)控晝夜節(jié)律有條不紊的運(yùn)轉(zhuǎn)。目前研究證實(shí)這一系統(tǒng)的紊亂對腫瘤的發(fā)生起重要作用，是當(dāng)今腫瘤研究的前沿課題之一。在哺乳動物中，Period基因(Per)、Clock基因是最早發(fā)現(xiàn)的生物鐘基因。學(xué)者研究證明，在乳腺癌等多種惡性腫瘤中Per2基因的表達(dá)明顯下降[1]，而在非小細(xì)胞肺癌中的研究較少。本研究采用免疫組化法檢測非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)中Per2蛋白的表達(dá)，探討Per2蛋白與非小細(xì)胞肺癌發(fā)生、發(fā)展之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1資料 選取2008年1月至2013年2月在濰坊市人民醫(yī)院、濰坊市婦幼保健院手術(shù)治療的非小細(xì)胞肺癌組織標(biāo)本60例，全部經(jīng)過病理組織學(xué)證實(shí)。其中男性 38例，女性 22例，年齡39～76歲，中央型24例，周圍型36例。鱗癌28例，腺癌32例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 26例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移34例。高、中分化34例，低分化26例。Ⅰ期14例，Ⅱ期28例，Ⅲ期18例。20例正常肺組織均經(jīng)病理HE染色證實(shí)為正常肺組織。

1.2方法 鼠抗人per2單克隆抗體購自上海天呈科技有限公司，免疫組化SP試劑盒購自北京北瑞達(dá)醫(yī)藥科技有限公司。按照說明書操作，組織蠟塊切片，二甲苯脫蠟至水，抗原修復(fù)，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作陰性對照。Per2染色陽性標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞核或者細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)黃色或者棕褐色顆粒。隨機(jī)在高倍鏡下選10個視野，各計(jì)數(shù)100個細(xì)胞，0分：無陽性細(xì)胞；1分：陽性細(xì)胞1%～25%；2分：陽性細(xì)胞26%～50%；3分：51%～75%；4分：>75%。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)數(shù)資料的比較采用卡方檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1Per在非小細(xì)胞肺癌和正常肺組織中的表達(dá) Per蛋白在正常肺組織中的陽性表達(dá)率和在非小細(xì)胞肺癌組織中的陽性表達(dá)率分別為95.0%、71.7%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2Per蛋白表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌臨床病理特征的關(guān)系 Per蛋白表達(dá)缺失與性別、年齡、病理分型、大體分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等因素?zé)o相關(guān)性(P>0.05)，與非小細(xì)胞肺癌的分化程度和TMN分期有關(guān)(P<0.05，表1)。

表1 Per蛋白表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌臨床病理特征的關(guān)系

3 討 論

學(xué)者們最早在哺乳動物的下丘腦視交叉上核(SCN)中發(fā)現(xiàn)了生物鐘基因，后來發(fā)現(xiàn)在外周組織中也有生物鐘基因表達(dá)[2]。至今為止，已在哺乳動物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了clock、Per1、Per2、Bmal1等10種基因起到調(diào)節(jié)晝夜節(jié)律的作用[3]。在這個機(jī)制中，Clock/Bmal1異二聚體與Cry、Per、Re-Erba基因啟動子部位的e盒結(jié)合，使以上基因的轉(zhuǎn)錄被激活，Per、Cry蛋白直接作用于Clock/Bmal1異二聚體，從而反饋抑制基因繼續(xù)出現(xiàn)轉(zhuǎn)錄。人體的生物鐘由這種負(fù)反饋循環(huán)所構(gòu)成。Per2在調(diào)節(jié)生物周期節(jié)律方面起到重要作用，當(dāng)Per2出現(xiàn)突變或缺失后，節(jié)律系統(tǒng)會出現(xiàn)紊亂。在研究家族性和遺傳性乳腺癌時，Langmesser S 等[4]發(fā)現(xiàn)，在腫瘤組織中，Per2基因的表達(dá)明顯下降，表明家族性乳腺癌的一個重要原因是生物鐘基因的表達(dá)出現(xiàn)紊亂。王雅平等[5]通過檢測Per2在人結(jié)直腸癌中的表達(dá)情況，顯示在人結(jié)直腸癌中Per2的表達(dá)較正常降低，與人結(jié)直腸癌患者的年齡、組織學(xué)分級、浸潤深度、TMN分期相關(guān)。本項(xiàng)研究顯示，Per2蛋白在NSCLC組織和正常肺組織中均有表達(dá)，Per2蛋白在NSCLC中的表達(dá)較正常組降低明顯(P<0.05),Per2蛋白的表達(dá)與NSCLC的分化程度和TMN分期有關(guān)，腫瘤分化程度越低，Per2蛋白的陽性表達(dá)率越低(P<0.05)。顯示在NSCLC中Per2蛋白表達(dá)異常，與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。

通過對原癌基因、抑癌基因的調(diào)控，生物鐘基因在腫瘤的發(fā)展中發(fā)揮作用。Wood PA等[7]研究發(fā)現(xiàn)，在移植瘤細(xì)胞中，Per2蛋白是因?yàn)榻M織缺氧引起的血管內(nèi)皮生長因子激動劑活性受到抑制，從而使腫瘤血管生成受到抑制。Fu L等[7]發(fā)現(xiàn)，在腫瘤發(fā)生過程中,小鼠節(jié)律基因mPer2起著重要作用，與mPer2突變小鼠相比較，野生型小鼠發(fā)生腫瘤的風(fēng)險明顯降低。Xia HC等[8]研究發(fā)現(xiàn)，Per2的過表達(dá)會引起細(xì)胞分化出現(xiàn)減少，細(xì)胞凋亡快速，同時也使凋亡相關(guān)基因的表達(dá)出現(xiàn)改變。

通過對生物鐘基因Per 2在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)的研究，有助于進(jìn)一步研究其在非小細(xì)胞肺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，為非小細(xì)胞肺癌的預(yù)防、早期治療提供新的幫助。

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