尉志鵬 楊海艷 高天宇 魏嘵晶 邵倩倩 楊 帥 解雪飛 楊志孝

(1.泰山醫(yī)學(xué)院計劃生育本科，2.泰山醫(yī)學(xué)院分析實驗室，山東 泰安 271000)

大豆異黃酮是大豆中存在的具有特殊結(jié)構(gòu)的生物活性物質(zhì)，具有抗腫瘤作用、對血管的防護作用、抗氧化活性、抗炎、改善骨質(zhì)疏松、類似女性雌激素作用以及抗激素作用等，已越來越引起社會和學(xué)術(shù)界普遍關(guān)注[1-4]。國內(nèi)外關(guān)于大豆異黃酮的研究多側(cè)重于大豆遺傳因素和某些外源性因素對其含量的影響以及其研究前景的展望等方面，而刺激生長中的豆芽來提高大豆異黃酮的含量水平的研究未見報道。本實驗以豆芽為研究材料，利用物理因素刺激的方式，提高豆芽中大豆異黃酮的含量水平。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1材料試劑 小黃豆(山東圣源有機非轉(zhuǎn)基因大豆)、大豆異黃酮標(biāo)準(zhǔn)(sigma)、無水乙醇(AR.)、95%乙醇(AR.)、亞沸蒸餾水。

1.1.2儀器設(shè)備 TG332A微量分析天平(上海精度0.01 mg/20g)，k-30高速冷凍離心機(sigma公司)，UV-2800紫外分光光度計(尤尼柯(上海)儀器有限公司)，光照培養(yǎng)箱(GZX-400BSH-Ⅲ,上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司)，鼓風(fēng)干燥箱(BGZ-146,上海博訊實業(yè)有限公司)，真空干燥箱(DZF-6210，上海精宏制造廠)，昆山超聲提取器、加樣器(德國產(chǎn))。

1.2方法

1.2.1大豆的篩選及豆芽的培育 對購買的優(yōu)質(zhì)小黃豆進行篩選去除殘次，用26℃的溫水浸泡12 h進行催芽。選擇無菌培養(yǎng)皿，首先放入4層醫(yī)用無菌紗布，將篩選出的黃豆均勻鋪在培養(yǎng)皿中，灑上適量自來水使紗布保持適宜濕度，在光照培養(yǎng)箱中26.5℃溫度進行無光培養(yǎng)，視干濕情況噴灑自來水保持適當(dāng)?shù)臐穸取?/p>

1.2.2刺激因素的選擇 方案一：將鋪有黃豆的培養(yǎng)皿均分為5組，編號1～5。1組采用常規(guī)方法(26.5℃條件下，無光)培養(yǎng)，不采取任何物理刺激。2組采用單一溫度(30℃)刺激；3組采用單一溫度(40℃)刺激；4組采用單一紫外(254 nm波長)刺激；5組采用單一紫外(359 nm波長)刺激。以上2～5組，大豆發(fā)芽過程中每日定點刺激2次，每次10 min。方案二：將鋪有黃豆的培養(yǎng)皿均分為7組，編號1～7。1組采用常規(guī)方法(26.5℃條件下，無光)培養(yǎng)，不采取任何物理刺激。2組采用0℃和50℃大溫差冷熱刺激，植株0℃條件下刺激10 min后迅速轉(zhuǎn)移至50℃條件下刺激10 min；3組采用0℃和50℃大溫差冷熱刺激，植株0℃條件下刺激20min后迅速轉(zhuǎn)移至50℃條件下刺激20 min；4組采用模擬紫外輻射使用30 W UV-B燈管(波長為280～315 nm)，燈管懸于植株上方1 m，刺激10 min；5組作為4組對照組，不模擬紫外輻射，其它環(huán)境條件相同，處理10 min；6組采用模擬紫外輻射使用30W UV-B燈管(波長為280～315 nm)，燈管懸于植株上方1 m，刺激20 min；7組作為6組對照組，不模擬紫外輻射，其它環(huán)境條件相同，處理20 min。

1.2.3大豆異黃酮的提取 將豆芽低溫自然干燥后，用中藥粉碎機分別打成細粉，各準(zhǔn)確稱取1.0000 g于小燒杯中，加入95%乙醇、料液比1:8，70℃超聲提取30 min，取提取液于錐形瓶備用；底物加入95%乙醇、料液比1:8，70℃超聲提取40 min，取提取液于錐形瓶中?；靹颉＠鋮s后取提取液5 ml轉(zhuǎn)移至50 ml的容量瓶中定容。

1.2.4大豆異黃酮含量的測定 精密吸取一定量定容后提取液，加95%乙醇稀釋，搖勻。以95%乙醇溶液作對照，用UV-2800紫外分光光度計(上海)，掃描大豆異黃酮標(biāo)準(zhǔn)溶液與大豆提取液，最大吸收波長為λ265 nm,以265 nm為測定波長，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，于265 nm處直接測定各組大豆異黃酮濃度。

2 結(jié) 果

2.1標(biāo)準(zhǔn)工作曲線 繪制sigma大豆異黃酮標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖1?；貧w方程為： Y = 0.0597X - 0.0086，R2= 0.9982。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.2方案中各組大豆異黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 方案一標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2，回歸方程為：Y = 17.001X - 0.0022，R2=1。方案二標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖3，回歸方程為：Y = 17.034X + 0.0009，R2=1。

圖2 方案一標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

圖3 方案二標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.3大豆異黃酮含量 方案一顯示，在豆芽生長過程中給予一定強度溫度刺激，能夠提高豆芽中大豆異黃酮含量。單一溫度(30℃)刺激條件下，異黃酮含量相比常規(guī)方法(26.5℃條件下，無光)增加了9.71%；單一溫度(40℃)刺激條件下，異黃酮含量相比常規(guī)方法(26.5℃條件下，無光)培養(yǎng)增加了5.30%，其作用效果并不明顯。在經(jīng)紫外照射后，豆芽中大豆異黃酮的含量明顯降低。見表1。

表1 方案一不同刺激條件下大豆異黃酮的含量

方案二顯示，豆芽生長過程中，人為加大溫差，用0℃和50℃冷熱交替刺激能有效提高異黃酮含量。在恒溫培養(yǎng)過程中，選取某一固定時間段對生長中的豆芽加大溫差，刺激10 min時，豆芽中異黃酮含量有較高提升，相比對照組提高了44.24%；刺激強度不變，而刺激時間延長至20 min時，豆芽中異黃酮含量反而出現(xiàn)一定程度降低，但仍高于對照組?？梢?，適宜時間長度的冷熱刺激能明顯提高豆芽中大豆異黃酮含量，但隨著刺激時間的延長，大豆異黃酮含量反而會出現(xiàn)降低趨勢。見表2。

表2 方案二不同刺激條件下大豆異黃酮的含量

3 結(jié) 論

研究表明大豆異黃酮具有數(shù)量性狀遺傳的特性，受遺傳和環(huán)境因素影響較大[8]。不同條件的物理刺激對豆芽中大豆異黃酮含量的影響不同。大量對比試驗表明，通過模擬極端環(huán)境因素，在豆芽生長過程中，人為加大溫差、適宜時間長度的0℃和50℃冷熱交替刺激能有效提高豆芽中大豆異黃酮含量，較常規(guī)恒溫(26.5℃)生產(chǎn)的豆芽，大豆異黃酮含量提高了44.24%。單一溫度刺激雖能一定程度上影響大豆異黃酮含量，但影響作用不明顯。經(jīng)紫外照射后，大豆異黃酮含量會有一定程度的降低[9-10]。

由此可見，在日常豆芽培育過程中，通過人為加大溫差，模擬一定強度的溫度刺激，確定適宜刺激時間，能夠有效提高豆芽中大豆異黃酮的含量。該法簡單易行，適合大規(guī)模應(yīng)用，用該大豆芽作為生產(chǎn)大豆異黃酮原料，可顯著降低其生產(chǎn)成本，使大豆異黃酮產(chǎn)品能惠及更多的平民百姓。

此外，隨著人們生活水平的提高，對健康保健也越來越重視。豆芽在發(fā)芽過程中脂肪以能量的形式被消耗，因此，熱量很低；同時蛋白質(zhì)、多糖被降解為活性肽及低聚糖。豆芽中還含有豐富的維生素C、活性蛋白酶及豐富的膳食纖維素。用此法加工生產(chǎn)豆芽，在保留豆芽原有特性的基礎(chǔ)上，提高了其大豆異黃酮的含量，有效提高了豆芽的品質(zhì)。

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