游國(guó)葉，樊輕亞，熊大偉

(信陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院，河南信陽(yáng)464000)

腸蟲清膠囊的主藥成分為阿苯達(dá)唑(Albendazole，ABZ)，又名丙硫咪唑，化學(xué)名為5-丙硫基-1H-苯并咪唑-2-氨基甲酸甲酯，為一廣譜高效低毒的驅(qū)蟲藥，該藥現(xiàn)已被列入醫(yī)保產(chǎn)品，成為臨床上用于治療各種蠕蟲感染性疾病的首選藥物［1］。在阿苯噠唑原料的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中，其含量測(cè)定在美國(guó)藥典29 版［2］、歐洲藥典 5.0 版［3］和中國(guó)藥典 2010 年版中均為滴定法，其膠囊劑含量測(cè)定在中國(guó)藥典2010年版規(guī)定的方法為分光光度法，利用295 nm處的吸收系數(shù)計(jì)算含量［4］。HPLC法測(cè)定阿苯達(dá)唑的含量的報(bào)道較為少見［5］，筆者通過建立高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)測(cè)定腸蟲清膠囊中阿苯達(dá)唑的含量，方法快速、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。

1 儀器與試劑藥品

1.1 儀器 Waters 2695高效液相色譜儀;Waters 2996紫外檢測(cè)器 (美國(guó)Waters公司);BP 211D型半微量電子天平;PHS—2CA數(shù)字式酸度計(jì)(上海理達(dá)儀器廠)。

1.2 試劑與藥品 腸蟲清膠囊(新鄉(xiāng)市同心藥業(yè)，批號(hào)20080110，20080113，20080117，規(guī)格0.2 g);阿苯達(dá)唑?qū)φ掌?(中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所，批號(hào)100373—200301);純化水(新鄉(xiāng)市平安藥業(yè)有限公司);甲醇為色譜純(江蘇國(guó)達(dá)，200704)，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 阿苯達(dá)唑?yàn)閴A性化合物，與硅膠柱的硅醇基有較強(qiáng)的相互作用，會(huì)造成強(qiáng)保留，因此應(yīng)選擇硅醇相互作用弱的色譜柱，Luna C18的硅醇相互作用約為 0.2［5］，能夠獲得理想的分析結(jié)果。

流動(dòng)相之一應(yīng)該選擇緩沖液，以獲得穩(wěn)定的保留時(shí)間，同時(shí)為了解決阿苯達(dá)唑的溶解性問題，選取0.1 mol·L-1醋酸銨緩沖液(用醋酸調(diào)節(jié) PH至3.1)。當(dāng)緩沖液和甲醇的比例調(diào)整到40∶60時(shí)，阿苯達(dá)唑的保留時(shí)間穩(wěn)定在9.8 min左右。流量為1 mL/min，柱溫20℃。

取阿苯噠唑?qū)φ掌酚么姿崛芙猓鲃?dòng)相稀釋成1 mg·mL-1，在200～400 nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，阿苯噠唑在288 nm處有最大吸收，故紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)為288 nm。

所以色譜條件為:色譜柱:Luna C18(5 μm，250×4.6 mm);流動(dòng)相:甲醇 -0.1 mol·L-1醋酸銨緩沖液(用醋酸調(diào)節(jié)PH至3.1)(60∶40);檢測(cè)波長(zhǎng):288 nm;流量:1 mL/min;進(jìn)樣量:20 μl;柱溫:20 ℃。

在上述色譜條件下，阿苯達(dá)唑的色譜圖見圖1，和雜質(zhì)峰的分離度大于1.5，拖尾因子1.03，理論塔板數(shù)按阿苯達(dá)唑計(jì)算大于3 500。

圖1 阿苯達(dá)唑的色譜圖

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取阿苯達(dá)唑?qū)φ掌?0 mg，置50 mL量瓶中，加醋酸10 mL，振搖使溶解，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，準(zhǔn)確量取5.0 mL置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相定容，搖勻，稀釋成0.5 mg·mL-1對(duì)照品液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于阿苯達(dá)唑50 mg)，置50 mL量瓶中，加醋酸10 mL，振搖使溶解，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5.0 mL置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相定容，搖勻，即得。

2.3 線性關(guān)系考察 精密稱取干燥至恒重的阿苯達(dá)唑?qū)φ掌?0 mg，置50 mL量瓶中，加醋酸10 mL，振搖使溶解，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得阿苯達(dá)唑?qū)φ掌穬?chǔ)備液。分別準(zhǔn)確量取 1.0，2.0，4.0，5.0，6.0，8.0 和 10.0 mL 阿苯達(dá)唑?qū)φ掌穬?chǔ)備液置10 mL 量瓶中，加流動(dòng)相定容，搖勻，即成 0.1，0.2，0.4，0.5，0.6，0.8，1.0 mg·mL-1系列溶液，按 2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積對(duì)濃度作線性回歸，結(jié)果見圖2。結(jié)果表明，阿苯達(dá)唑在0.1～1.0 mg·mL-1濃度范圍內(nèi) A=2.85 ×106C+6.5 ×104，r=0.999 5，線性關(guān)系良好。

圖2 阿苯達(dá)唑的線性關(guān)系

2.4 精密度試驗(yàn) 取0.5 mg·mL-1阿苯達(dá)唑?qū)φ掌啡芤?，?.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果見表2，可見精密度試驗(yàn)RSD為0.40%，精密度良好。

表2 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)20080113樣品，按2.3項(xiàng)下方法制備6份供試液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果見表3，重復(fù)性試驗(yàn)RSD為0.66%，重復(fù)性良好。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.6 加樣回收率試驗(yàn) 稱取已知含量的樣品(20080113)細(xì)粉 50 mg，分別加入高、中、低(20 mg、40 mg、60 mg)不同量干燥至恒重的阿苯達(dá)唑?qū)φ掌?，?份，按含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表4。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液在放置時(shí)間為0、2、4、6、10 h 時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，結(jié)果見表 5，穩(wěn)定性試驗(yàn)RSD為0.52%，穩(wěn)定性良好。

表4 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 定量限 按信噪比為3(S/N=3)對(duì)最低檢測(cè)限進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，當(dāng)進(jìn)樣濃度為 0.25 μg·mL-1時(shí)，阿苯噠唑峰信號(hào)約為基線噪音的3倍，即最低檢測(cè)濃度為 0.25 μg·mL-1。

表5 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品含量測(cè)定 取3批樣品各20粒膠囊，傾出內(nèi)容物，囊殼用小刷拭凈，精密稱定，精密稱取適量(約相當(dāng)于阿苯達(dá)唑50 mg)，按2.2.2項(xiàng)下方法制備供品溶液。分別取供試液和2.2.1項(xiàng)下對(duì)照品液，在2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，用峰面積外標(biāo)法計(jì)算含量;并與中國(guó)藥典［6］規(guī)定的紫外分光光度法(UV法)測(cè)定的結(jié)果比較，結(jié)果見表6。

表6 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

阿苯達(dá)唑微溶于丙酮、乙酸，不溶于乙醇、水［3］，制約了流動(dòng)相的選擇，采用甲醇-醋酸銨緩沖液為流動(dòng)相，通過調(diào)整流動(dòng)相比例和PH值，既解決了溶解性問題，也獲得了較好的系統(tǒng)適用性。

雖然藥典規(guī)定的分光光度法在295 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收值，但在本實(shí)驗(yàn)的色譜條件下，阿苯達(dá)唑的最大吸收在288 nm處，這是因?yàn)樵趐H 3.1時(shí)，阿苯達(dá)唑以離子狀態(tài)存在，共軛結(jié)構(gòu)減少，最大吸收向短波方向移動(dòng)。

與中國(guó)藥典規(guī)定的分光光度法相比(當(dāng)時(shí)沒做其他比較，單從分光光度法和HPLC兩種方法的測(cè)定同批產(chǎn)品的含量，根據(jù)RSD來判斷后精密度、準(zhǔn)確度高于前者，故得出結(jié)論。)本法能夠排除雜質(zhì)干擾，準(zhǔn)確度高，HPLC法重復(fù)性、穩(wěn)定性好。

［1］萬啟惠.廣譜驅(qū)蠕蟲新藥—— 丙硫咪唑［J］，遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1988，l1(1):73-74.

［2］美國(guó)藥典委員會(huì).美國(guó)藥典/國(guó)家處方集［M］.29版.美國(guó):美國(guó)藥典委員會(huì)，2006:2505.

［3］歐洲藥品質(zhì)量委員會(huì).歐洲藥典5.0.(EDQM)［M］.編輯出版.法國(guó):中外藥品質(zhì)量管理局:2004，1 122-1 123.

［4］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010:290.

［5］邵 超.HPLC法測(cè)定阿苯達(dá)唑顆粒的含量［J］.黑龍江醫(yī)藥，2011，03(5):341-342.

［6］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典［M］.二部.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:395.