張 靜，賈喜花

（保定市第一中心醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河北保定071000）

上皮性卵巢癌組織中TUBB3和FRCC1的表達(dá)

張 靜，賈喜花

（保定市第一中心醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河北保定071000）

目的通過(guò)檢測(cè)TUBB3和FRCC1在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)情況，探討兩者與上皮性卵巢癌化療療效及預(yù)后的關(guān)系。方法采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)25例正常卵巢組織和50例上皮性卵巢癌組織中TUBB3和FRCC1蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果TUBB3和FRCC1在上皮性卵巢癌組織中的陽(yáng)性率明顯高于正常卵巢組織（P＜0.05），兩者的陽(yáng)性表達(dá)率與上皮性卵巢癌的分化程度及臨床分期有關(guān)。上皮性卵巢癌組織中TUBB3和FRCC1蛋白表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.332，P＜0.05）。TUBB3、FRCC1陽(yáng)性表達(dá)患者化療有效率分別為34.6%和31.4%，均明顯低于陰性患者的91.7%和93.3%（P＜0.05）。結(jié)論上皮性卵巢癌組織中TUBB3、FRCC1的表達(dá)可能影響化療療效及其預(yù)后存，兩者陽(yáng)性表達(dá)可能提示上皮性卵巢癌化療耐藥，可作為上皮性卵巢癌化療耐藥和預(yù)后檢測(cè)的重要指標(biāo)。

上皮性卵巢腫瘤；3型β-微管蛋白；核昔酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)組1；化療效果

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)最常見(jiàn)的3大惡性腫瘤之一，是死亡率最高的婦科惡性腫瘤，其治療的難點(diǎn)是卵巢癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥。目前治療卵巢癌的一線標(biāo)準(zhǔn)化療方案是紫杉類(lèi)聯(lián)合鉑類(lèi)［1-2］。如果卵巢癌患者對(duì)紫杉類(lèi)、鉑類(lèi)藥物敏感性好，將能明顯有利于提高化療有效率和延長(zhǎng)生存期。本文探討3型β-微管蛋白（β-tubulin-Ⅲ，TUBB3）、核昔酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)組1（excision repair cross complement group 1，F(xiàn)RCC1）蛋白在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)，以利于尋找更有效的化療藥物，制定個(gè)體化治療方案提高化療療效果。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象選取保定市第一中心醫(yī)院婦科2006年1月至2009年3月收治的具有正常卵巢的患者25例和上皮性卵巢癌患者50例，正常卵巢組織來(lái)源于因子宮肌瘤行手術(shù)治療并手術(shù)同時(shí)切除卵巢的患者，術(shù)后病理檢查證實(shí)卵巢無(wú)病變；卵巢癌早期患者行全子宮、雙側(cè)附件及結(jié)腸下大網(wǎng)膜切除術(shù)，雙側(cè)盆腔及或腹主動(dòng)脈淋巴結(jié)切除及闌尾切除，晚期患者行最大限度的腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)，術(shù)前均未行放化療及免疫治療。依據(jù)病史、體格檢查、輔助化驗(yàn)檢查、影像學(xué)檢查、手術(shù)中所見(jiàn)及術(shù)后病理結(jié)果確定診斷。按照2000年FIGO手術(shù)病理分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期10例、Ⅱ期9例、Ⅲ期18例、Ⅳ期13例，患者年齡27～70歲，中位年齡56歲，所有患者手術(shù)后均行紫杉醇聯(lián)合順鉑的方案（紫杉醇135 mg·m-2，靜脈滴注，d1+順鉑75m g·m-2，靜脈滴注，d2，21～28 d為1周期，每例行4～6周期）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法采用免疫組化Fnvision二步法檢測(cè)研究對(duì)象組織標(biāo)本中TUBB3、FRCC1蛋白表達(dá)，步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。以已知陽(yáng)片為陽(yáng)性對(duì)照，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。鼠抗人TUBB3蛋白抗體、鼠抗人FRCC1蛋白及Fnvision二步法試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。

1.3 結(jié)果判定TUBB3蛋白表達(dá)定位于細(xì)胞漿，F(xiàn)RCC1陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞核。對(duì)細(xì)胞漿及細(xì)胞核中棕黃色顆粒細(xì)胞進(jìn)行分析，高倍鏡下綜合染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞所占比例計(jì)算積分。細(xì)胞染色深淺評(píng)分，0分：不顯色或顯色不清；l分：淺黃色；2分：棕黃色；3分：深褐色。對(duì)陽(yáng)性細(xì)胞的百分率數(shù)值進(jìn)行半定量分級(jí)：＜5%為0分，5%～＜25%為1分，25%～＜50%為2分，50%～＜75%為3分，≥75%為4分。兩者乘積0～3分為弱陽(yáng)性（+）或陰性（-），兩者均記為陰性；4～8分為中度陽(yáng)性（++），9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++），兩者均記為陽(yáng)性。

1.4 臨床療效判定標(biāo)準(zhǔn)近期化療療效可分為，完全緩解（CR）：可見(jiàn)腫瘤完全消失，至少4周；部分緩解（PR）：病灶縮小到治療前的50%以上，多灶性病變時(shí)無(wú)一病灶增大；穩(wěn)定（SD）：病灶減小＜50%或增大＜25%；進(jìn)展（PD）：病灶擴(kuò)大≥25%或出現(xiàn)新病灶，患者完成3周期化療后開(kāi)始進(jìn)行評(píng)定，CR+PR為化療有效，SD+PD為化療無(wú)效。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 17.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 不同卵巢組織中TUBB3和ERCC1蛋白表達(dá)見(jiàn)表1。

表1 不同卵巢組織中TUBB3和FRCC1蛋白表達(dá)n（%）

2.2 上皮性卵巢癌組織中TUBB3和ERCC1蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系見(jiàn)表2。

表2 上皮性卵巢癌組織中TUBB3和FRCC1蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 n（%）

2.3 上皮性卵巢癌組織中TUBB3、ERCC1蛋白表達(dá)的相關(guān)性見(jiàn)表3。

表3 上皮性卵巢癌組織中TUBB3、FRCC1蛋白表達(dá)的相關(guān)性n

2.4 TUBB3、ERCC1蛋白表達(dá)與化療療效的關(guān)系見(jiàn)表4。

表4 TUBB3、FRCC1蛋白表達(dá)與化療療效的關(guān)系n（%）

3 討論

化療耐藥是上皮性卵巢癌難以提高存活率的主要原因。尋找預(yù)測(cè)化療藥物敏感性的分子標(biāo)志，指導(dǎo)選擇對(duì)患者有效的藥物，制定個(gè)體化化療方案，減少不必要的毒副反應(yīng)，是腫瘤個(gè)體化化療研究的熱點(diǎn)。

TUBB3蛋白是微管蛋白家族中的一種亞型，是抗微管藥物的主要作用靶點(diǎn)，其高表達(dá)可導(dǎo)致抗微管藥物的耐藥［3］。紫杉類(lèi)藥物正是通過(guò)與微管蛋白結(jié)合、促進(jìn)微管蛋白解聚和穩(wěn)定已結(jié)合微管、干擾正常的紡錘體形成等途徑抑制細(xì)胞有絲分裂而發(fā)揮抗腫瘤作用。本文結(jié)果顯示，TUBB3在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)明顯高于正常卵巢組織，另外，TUBB3在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)與分化程度及臨床分期有關(guān)，分化越低表達(dá)率越高，臨床分期越晚表達(dá)率越高。這與Sève等［4］的研究結(jié)果一致。何峰等［5］研究TUBB3低表達(dá)腫瘤患者接受紫杉類(lèi)藥物效果較好，中位生存期較長(zhǎng)，反之，TUBB3高表達(dá)患者的經(jīng)抗微管類(lèi)化療的療效較差。這一現(xiàn)象在本研究中得到進(jìn)一步證實(shí)。

FRCC1在修復(fù)損傷的DNA及維持遺傳信息的完整性中起著重要作用，其高表達(dá)與卵巢癌多種腫瘤耐藥有關(guān)，與多種腫瘤的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程有密切關(guān)系［6］。本文結(jié)果顯示，上皮性卵巢癌組織中FRCC1的表達(dá)與分化程度及臨床分期有關(guān)，分化越低表達(dá)水平越高，臨床分期越晚表達(dá)水平越高。FRCC1低表達(dá)者，DNA修復(fù)能力弱，易導(dǎo)致?lián)p傷累積，對(duì)順鉑敏感性高，通過(guò)術(shù)后的輔助化療，可以更大程度殺傷殘余腫瘤細(xì)胞，復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移晚，因而具有較長(zhǎng)的生存期。蔣勝等［7］發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)RCC1低表達(dá)組的生存時(shí)間明顯高于高表達(dá)水平組，表明FRCC1的表達(dá)是影響上皮性卵巢癌患者預(yù)后的因素，F(xiàn)RCC1可能是影響上皮性卵巢癌術(shù)后輔助化療患者預(yù)后的主要因素，化療前檢測(cè)FRCC1的表達(dá)有助于患者化療方案及化療藥物的選擇。

另外，本研究還發(fā)現(xiàn)TUBB3和FRCC1在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系，聯(lián)合檢測(cè)上皮性卵巢癌中TUBB3、FRCC1蛋白表達(dá)，有利于更好選擇化療用藥及預(yù)后的檢測(cè)指標(biāo)，從而為指導(dǎo)臨床化療提供理論依據(jù)。

［1］ 暢金萍.紫杉醇脂質(zhì)體聯(lián)合順鉑治療中晚期卵巢癌臨床觀察［J］.腫瘤基礎(chǔ)與臨床，2012，25（2）：158-159.

［2］ 夏俊賢，陳敬華，田忠凱，等.3種不同化療方案二線治療復(fù)發(fā)性卵巢癌的對(duì)比研究［J］.腫瘤基礎(chǔ)與臨床，2013，26（3）：210 -212.

［3］ 冷雪峰，冼磊，陳銘伍，等.非小細(xì)胞肺癌組織中FRCC1及TUBB3基因mRNA的表達(dá)及其臨床意義［J］.腫瘤預(yù)防與治療，2012，25（1）：1-5.

［4］ Sève P，Mackey J，Isaac S，et al.ClassⅢbeta-tubulin expression in tumor cells predicts response and outcome in patients with nonsmall cell lung cancer receiving paclitaxel［J］.Mol Cancer Ther，2005，4（12）：2001-2007.

［5］ 何峰，李遠(yuǎn)航，林鐘軒.非小細(xì)胞肺癌患者 FRCC1、TYMS、TUBB3、RRM1表達(dá)及FGFR（F19/F21）突變率的檢測(cè)［J］.中華臨床醫(yī)師雜志：電子版，2011，5（5）：161-164.

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TUBB3 and ERCC1 Protein Expressions in the Epithelial Ovarian Cancer

Zhang Jing，Jia Xihua
（Department of Medical Oncology，Baoding First Central Hospital，Baoding，071000）

ObjectiveBy detecting β-tubulin-Ⅲ（TUBB3）and excision repair cross complement group 1（FRCC1）protein expressions in the epithelial ovarian cancer，to explore the relationship with the chemotherapy curative effect and prognosis of epithelial ovarian cancer.MethodsImmunohistochemistry technique was used to detect the TUBB3 and FRCC1 protein expressions in the 25 cases of normal ovarian tissues and the 50 cases of epithelial ovarian cancer.ResultsTUBB3 and FRCC1 protein expressions in the epithelial ovarian cancer was significantly higher than those in the normal ovarian tissues（P＜0.05）.Their positive expression rates were related to the differentiation degree and the clinical stage of epithelial ovarian cancer（P＜0.05）.TUBB3 protein expression was positively related with FRCC1 protein expression in the epithelial ovarian cancer（r=0.332，P＜0.05）.The chemotherapy efficacy rate of patients with TUBB3 or FRCC1 positive（34.6%and 31.4%）were lower than those of patients with TUBB3 or FRCC1 negative（91.7%and 93.3%）（P＜0.05）.ConclusionTUBB3 and FRCC1 protein expressions in epithelial ovarian cancer can be related to the chemotherapy efficacy and the prognosis，the two positive expressions may indicate chemotherapy drug resistance of epithelial ovarian cancer，can be used as an important index for chemotherapy drug resistance and prognosis of epithelial ovarian cancer.

epithelial ovarian cancer；β-tubulin-Ⅲ；excision repair cross complement group 1；chemotherapy efficacy

10.3969/j.issn.1673-5412.2014.03.007

R737.31

A

1673-5412（2014）03-0205-03

2013-07-12）

張靜（1987-），女，碩士在讀，主要從事婦科腫瘤學(xué)研究。

F-mail：zjzhoukou@163.com

賈喜花（1968-），女，博士，主任醫(yī)師，主要從事中西醫(yī)結(jié)合防治腫瘤研究。F-mail：jiaxh@163.com