李文雄，孫 赫，韋偉標(biāo)，劉文婷，華明康，陳 嘉

（1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510405；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，廣東 廣州 510405）

高脂血癥（hyperlipidemia，HLP）是臨床上最常見的脂代謝紊亂性疾病，是動(dòng)脈粥樣硬化的主要危險(xiǎn)因素之一，且與冠心病、腦血管病的發(fā)病率有直接的相關(guān)性[1]。隨著社會(huì)壓力的增加、膳食營養(yǎng)狀況的失衡及飲酒量、吸煙量的上升，高脂血癥患病率逐年增加。現(xiàn)代研究證明，醫(yī)圣張仲景《金匾要略·嘔吐噦下利病脈癥治第十七》中的茯苓澤瀉湯，以健脾利濕、化痰祛淤法為指導(dǎo)，經(jīng)過加減用于治療高脂血癥的療效肯定[2－3]。查閱諸多文獻(xiàn)，前人所著文獻(xiàn)大多偏重于臨床療效觀察，而對(duì)茯苓澤瀉湯防治高脂血癥機(jī)制的研究很少。本試驗(yàn)在建立高脂血癥大鼠模型的基礎(chǔ)上，檢測加味茯苓澤瀉湯對(duì)大鼠血清一氧化氮（nitric oxide，NO）含量和髓過氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）活性的影響，旨在探討該方劑治療高脂血癥的作用機(jī)制，為臨床上應(yīng)用該方劑治療高脂血癥提供一定的試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用健康SPF級(jí)雄性8周齡SD大鼠60只，體重180g～220g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（粵）2013－0020。

1.1.2 主要試劑 氯化鈉注射液9g／mL，武漢市濱湖雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司產(chǎn)品；維生素D3注射液1mL∶7.5mg：30萬單位，哈爾濱市宏達(dá)動(dòng)物藥品廠產(chǎn)品；TC、TG、LDL－C、HDL－C試劑盒、一氧化氮（NO）試劑盒、髓過氧化物酶（MPO）試劑盒，由南京建成生物工程研究所提供。

1.1.3 主要儀器 －20 ℃ FYL－YS－128L型冰箱，北京福意電器有限公司產(chǎn)品；－80℃Forma 88000型超低溫冰箱，賽默飛世爾科技有限公司產(chǎn)品；UV－7504型單光束紫外可見分光光度計(jì)，上海欣茂儀器有限公司產(chǎn)品；Ultra Pure UF型和泰－凱弗隆實(shí)驗(yàn)室純水系統(tǒng)，上海和泰儀器有限公司產(chǎn)品；DG5033A型酶標(biāo)儀，南京華東電子集團(tuán)醫(yī)療裝備有限責(zé)任公司產(chǎn)品；BP121S型電子天平，美國塞多利公司產(chǎn)品；TGL－16M型高速離心機(jī)，長沙平凡儀器儀表有限公司產(chǎn)品。

1.1.4 藥物

1.1.4.1 中藥 加味茯苓澤瀉湯組成：瓜蔞15g，清半夏20g，薤白12g，生山楂20g，黃精10g，何首烏20g，澤瀉15g，茯苓10g，白術(shù)10g，川芎10g，丹參10g，三七粉10g，水蛭10g，黃芪20g，甘草6g，廣州采芝林藥業(yè)產(chǎn)品。根據(jù)黃繼漢等[4]提供的“標(biāo)準(zhǔn)體重動(dòng)物由動(dòng)物A到動(dòng)物B的mg／kg劑量折算表”可知大鼠等效劑量為人的6.17倍，以粗略值6倍計(jì)算出大鼠相對(duì)于人的中藥及辛伐他汀的等效劑量。具體藥物制備方法：每劑中藥加800mL純凈水煮取200mL提取液，合并每次提取液，過濾，收集濾液并分為2份（容積比約3∶2），分別濃縮至約1／3、1／2容積作為高劑量（含生藥量約3g／mL）、低劑量（含生藥量約2g／mL）加味茯苓澤瀉湯，冷卻至室溫，保存于－20℃冰箱中，動(dòng)物給藥前以溫水浴融化。

1.1.4.2 西藥 辛伐他汀片10mg／片，上海信誼萬象藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品，辛伐他汀使用時(shí)按0.4 mg／mL溶解于純凈水中。

1.1.4.3 高脂乳劑 高脂乳劑由吐溫 T－80（廣州威佳濟(jì)恒科技有限公司產(chǎn)品）60%＋食用油（廣州市花都區(qū)花東信華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場產(chǎn)品）15%＋膽固醇6%＋膽酸鈉2%＋丙基硫氧嘧啶0.2%（膽固醇、膽酸鈉和丙硫氧嘧啶，上海藍(lán)基生物科技有限公司產(chǎn)品）混合而成。具體制備方法：①食用油在80℃水浴中攪拌加熱；②于加熱后的食用油中加入膽固醇和丙基硫氧嘧啶，充分?jǐn)嚢枞芙猓虎墼偌尤肽扄}和適量蒸餾水，充分?jǐn)嚢枋鼓扄}溶解；④再加適量吐溫，充分?jǐn)嚢柚敝廉a(chǎn)生乳化現(xiàn)象；⑤緩慢加入37℃的溫水稀釋至100mL，即可成為穩(wěn)定的高脂乳劑。備用時(shí)保存于－20℃冰箱中，大鼠灌胃前于80℃水浴中加熱融化。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物模型的制備 所有大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)選取10只作為空白組，其余作為高脂飲食組。高脂飲食組于造模前一次性腹腔注射維生素D360萬單位／kg[5]，空白組腹腔注射等體積的生理鹽水。高脂飲食組采用張東等[6]篩選的高脂乳劑灌胃方法，按10mL／（kg·d）經(jīng)口灌胃高脂乳劑，空白組給予等量的蒸餾水經(jīng)口灌胃。試驗(yàn)過程中，所有大鼠自由飲水，基礎(chǔ)飼料按每天30g／只，分早、中、晚三餐定時(shí)給予。連續(xù)給予高脂乳劑14d，末次給予高脂乳劑16h后，乙醚麻醉大鼠，用玻璃毛細(xì)管進(jìn)行眥內(nèi)靜脈采血2mL，分離血清，檢測血脂水平以確定高脂血癥模型是否構(gòu)建成功。

1.2.2 試驗(yàn)分組與給藥 造模成功后隨機(jī)選取40只大鼠平分為模型組、加味茯苓澤瀉湯高、低劑量組和辛伐他汀組，每組10只。從造模成功后第2天開始，加味茯苓澤瀉湯高、低劑量組和辛伐他汀組按每次10mL／kg灌胃給藥，2次／d；模型組和空白組以同樣方法給予等量蒸餾水，連續(xù)給藥28d。試驗(yàn)過程中，空白組持續(xù)喂養(yǎng)基礎(chǔ)飼料，其他各組持續(xù)喂養(yǎng)高脂飼料，定時(shí)記錄攝食量及稱量體重。

1.2.3 指標(biāo)檢測 檢測各組大鼠治療前后血清膽固醇（TC）、甘油三脂（TG）、低密度脂蛋白－膽固醇（LDL－C）、高密度脂蛋白－膽固醇（HDL－C）、一氧化氮（NO）含量和髓過氧化物酶（MPO）活性。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。數(shù)據(jù)結(jié)果以ˉx±SD表示，多組間比較用單因素方差分析。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠體重及一般狀況觀察

試驗(yàn)過程中，空白組大鼠被毛有光澤、體質(zhì)量增長穩(wěn)定，精神良好，動(dòng)作自如，反應(yīng)靈敏；高脂飲食組大鼠給予高脂乳劑灌胃后，大鼠被毛蓬亂無光澤、甚至發(fā)黃，性情變溫順，精神困倦，嗜睡少動(dòng)，排糞量較正常組偏少，色灰，質(zhì)較軟，體重增長較快；給藥治療期間，較肥胖的模型組大鼠體重仍有增長，但增長速度較之前緩慢，精神萎靡，動(dòng)作遲緩，反應(yīng)遲鈍；加味茯苓澤瀉湯高、低劑量組、辛伐他汀組大鼠給予相應(yīng)藥物治療，但仍給予高脂乳劑灌胃，可觀察到大鼠體重仍有增長，但增長速度顯著降低，精神狀態(tài)、動(dòng)作及反應(yīng)靈敏度等較前有所好轉(zhuǎn)。

2.2 各組大鼠血脂指標(biāo)變化結(jié)果分析

與空白組對(duì)比，模型組中TC、TG、LDL－C水平均顯著升高，HDL－C水平顯著降低（P＜0.05）；與模型組對(duì)比，加味茯苓澤瀉湯高、低劑量組和辛伐他汀 組 中 TC、TG、LDL－C 水 平 均 顯 著 降 低（P＜0.05），HDL－C水平顯著升高（P＜0.05）；與空白組對(duì)比，加味茯苓澤瀉湯高劑量組中4項(xiàng)血脂指標(biāo)水平差異不顯著（P＞0.05），低劑量組4項(xiàng)血脂指標(biāo)差異顯著（P＜0.05）；與辛伐他汀組對(duì)比，加味茯苓澤瀉湯高劑量組4項(xiàng)血脂指標(biāo)水平無顯著差異（P＞0.05）（表1）。

2.3 各組大鼠血清NO含量和MPO活性水平變化結(jié)果分析

與空白組對(duì)比，模型組中NO含量水平顯著降低（P＜0.05）、MPO活性水平顯著升高（P＜0.05）；與模型組對(duì)比，加味茯苓澤瀉湯高、低劑量組中NO含量水平顯著升高（P＜0.05）、MPO活性均顯著降低（P＜0.05）；與空白組對(duì)比，加味茯苓澤瀉湯低劑量組中NO含量和MPO活性水平差異顯著（P＜0.05），高劑量組中 NO水平稍低、MPO水平稍高，但差異不顯著（P＞0.05）；與辛伐他汀組對(duì)比，加味茯苓澤瀉湯高劑量組NO、MPO水平無顯著差異（P＞0.05）（表2）。

表1 各組大鼠的血脂指標(biāo)Table1 The levels of blood lipid parameters in each group of rats

表2 各組大鼠血清MPO活性和NO含量Table2 The seral of MPO activity and NO in each group of rats

3 討論

祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)雖無高血脂的概念，但對(duì)人體膏脂已有一定的認(rèn)識(shí)。早在《黃帝內(nèi)經(jīng)》中已有“脂者”、“油脂”、“脂膜”等記載。如《靈樞·衛(wèi)氣失?！菲f：“脂者，其血清，氣滑少。”這是最早對(duì)HLP的記載[7]。根據(jù)高脂血癥的臨床表現(xiàn)將其歸屬于“痰濁”、“血淤”等癥范疇。“血脂”的概念可以中醫(yī)學(xué)血、津、液概括之，本屬源于水谷精微，營養(yǎng)五臟六腑，濡潤四肢百骸[1]。如若因飲食不節(jié)、勞倦過度、情志失常等直接或間接影響臟腑，使脾腎運(yùn)化失職，肝膽疏泄失調(diào)，終致氣機(jī)阻滯，痰淤內(nèi)聚，膏脂不歸正化。《靈樞·血絡(luò)論》篇有云：“血?dú)饩闶⒍帤舛嗾?，其血滑，刺之則射，陽氣蓄積，久留而不瀉者，其血黑以濁，故不能射。”其中“其血黑以濁”形象地說明了氣血津液代謝失調(diào)，破壞了“陰平陽秘”的動(dòng)態(tài)平衡，以致痰淤膠結(jié)于血脈之中。臨床治療以健脾利濕、化痰祛淤法為指導(dǎo)，方劑選茯苓澤瀉湯加味。

方中茯苓健脾化痰利濕，《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》謂之：“為滲濕利痰之主藥”；澤瀉利水滲濕，《本草綱目》云其能“滲濕熱，行痰飲；痰飲腫脹等等諸癥，用此甘淡微咸以為滲泄，則濁氣自降，而清氣上升，所謂一除而百病與之俱除也”，與茯苓配伍，利水滲濕祛痰，共為君藥。脾為生痰之源，方中白術(shù)味苦性溫，既能健運(yùn)脾胃以杜絕生痰之源，亦可燥濕利水化痰，與茯苓相配，健脾益氣，有去水濕、截痰源、助消導(dǎo)、去淤滯之功；山楂健胃消食，活血化淤，《滇南本草》謂之：“消肉積滯”，方中用之健胃化痰消積，既能助白術(shù)、茯苓健運(yùn)脾胃，以絕生痰之源，亦可活血化淤，以防痰盛致淤之變，二者共為臣藥。佐以川芎、丹參、水蛭、三七、活血化淤，通利血脈，開郁散結(jié)；清半夏、瓜蔞、薤白溫化痰濕；黃芪益氣健脾；何首烏、黃精補(bǔ)益肝腎，益精血以固本。甘草益氣和中，調(diào)和諸藥，為使藥。諸藥合用，通陽化氣、健脾蠲飲，充分體現(xiàn)了健脾利濕、化痰祛淤法的精神，使脾氣健、痰飲清、濁邪降、膏脂除，則病自愈。

現(xiàn)代藥理研究表明，茯苓和白術(shù)利尿作用顯著，澤瀉具有抑制動(dòng)脈粥樣硬化、降血脂、利尿、降血壓、抗脂肪肝等作用[8]。山楂可以調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，山楂及山楂酮能顯著抑制試驗(yàn)性高脂血癥大鼠的血清TG、LDL－C 和apoB濃度，顯著升高HDL－C 和apoA濃度[9]。川芎、丹參能提高血小板內(nèi)環(huán)磷酸腺苷的水平，抑制血小板聚集，降低血流黏稠度，抑制血栓形成[10]。三七、水蛭有一定的調(diào)節(jié)血糖、血脂的作用，對(duì)防止動(dòng)脈硬化有積極作用，且因水蛭含肝素與抗血栓素，在抗凝溶栓、擴(kuò)張血管的作用顯著[11－12]。應(yīng)用清半夏治療高脂血癥可以從根本上阻止動(dòng)脈硬化的發(fā)病，瓜蔞、薤白協(xié)同作用，降脂效果顯著[13－14]。黃芪有擴(kuò)張血管和擴(kuò)張冠脈作用，增加血流量，減少血栓形成，降低血小板黏附作用[15]。何首烏能阻止TC在肝內(nèi)沉積，并可抑制血栓的形成[16]。黃精可降低血黏度，抑制 TC和 TG的合成[17]。甘草甜素可顯著降低血漿TG和TC含量，減輕動(dòng)脈粥樣硬化程度[9]。諸藥合用，其多種有效成分通過不同機(jī)制，作用于不同環(huán)節(jié)，協(xié)同起到了降脂作用。

現(xiàn)代研究表明，高脂血癥時(shí)，動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展與血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷和機(jī)體的脂質(zhì)過氧化所造成的損傷有關(guān)，血清過氧化脂質(zhì)的含量與血清TC呈正相關(guān)[18－19]。脂質(zhì)的過氧化易引發(fā)NO生成減少[20]，導(dǎo)致NO的生物利用度降低，而NO的生物利用度下降可誘發(fā)氧化應(yīng)激[21]，損傷內(nèi)皮細(xì)胞，加劇炎性反應(yīng)，激活核轉(zhuǎn)錄因子－kB（NF－kB），造成內(nèi)皮功能障礙。且高脂血癥狀態(tài)下，血管內(nèi)皮中的巨噬細(xì)胞、炎性細(xì)胞聚集所釋放的超氧陰離子（·O2－）可加速NO降解，影響L－精氨酸轉(zhuǎn)化為L－胍氨酸，使NO生成減少，造成內(nèi)皮依賴性舒張功能調(diào)節(jié)失衡、血管張力增加、結(jié)構(gòu)重建和內(nèi)皮損傷[22]。髓過氧化物酶（MPO）是氧化應(yīng)激的一個(gè)主要標(biāo)志物。其水平與中性粒細(xì)胞激活程度之間存在極顯著的相關(guān)性，是中性粒細(xì)胞的活化標(biāo)志物，通過調(diào)節(jié)NO對(duì)血管信號(hào)傳遞和舒張的作用，直接改變血管的炎癥反應(yīng)性[21]。研究發(fā)現(xiàn)，高脂血癥時(shí) MPO大量聚集在血管內(nèi)皮下基膜，通過沉淀NO引起血管內(nèi)皮功能障礙；且MPO可以調(diào)節(jié)超氧陰離子（·O2－）的生成和消耗，通過產(chǎn)生過氧亞硝基（ONOO－）降低NO的生物活性，引起血管內(nèi)皮功能障礙[23]。故筆者通過檢測高脂血癥模型大鼠經(jīng)治療后MPO活性以及NO含量水平的變化，以探討本方治療高脂血癥的機(jī)理。

本試驗(yàn)采用高脂乳劑灌胃SD大鼠復(fù)制高脂血癥模型，初步探究加味茯苓澤瀉湯對(duì)高脂血癥的干預(yù)作用及其機(jī)制。試驗(yàn)中高脂飲食的4組大鼠血脂指標(biāo) TG、TC、LDL－C均顯著升高，HDL－C顯著降低，說明造模成功。治療后，加味茯苓澤瀉湯高、低劑量組均能顯著降低血脂指標(biāo)和MPO活性，并升高血清NO含量，高劑量加味茯苓澤瀉湯對(duì)高脂血癥的治療效果較低劑量明顯，其總體療效與辛伐他汀基本等同。

綜上所述，加味茯苓澤瀉湯能夠有效治療高脂血癥，且一定范圍內(nèi)升高藥物濃度，其治療效果更佳。其機(jī)制可能是通過抑制MPO活性，升高NO生物活性，以改善高脂血癥血管內(nèi)皮功能，從而對(duì)高脂血癥的早期治療有相當(dāng)?shù)寞熜А?/p>

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