靖彩霞 蔣 蓉

( 包頭市食品藥品檢驗檢測中心，內(nèi)蒙古 包頭 014060)

尤寧-7 散由綠松石、石膏、紅花、香青蘭等7 味藥組成的復(fù)方制劑，其主治目赤，胸悶，肝損傷，肝區(qū)疼痛，“寶日”等病。此方屬于蒙藥驗方，至今尚無質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。為控制該制劑的質(zhì)量，保證臨床用藥安全、有效，本文參照《中華人民共和國藥典》2010 年版一部“紅花”項下羥基紅花黃色素A 的含量測定方法［1］，選擇本品中紅花的主要成分羥基紅花黃色素A 作為檢測指標(biāo)，采用高效液相色譜法對本品中羥基紅花黃色素A 進(jìn)行定量分析，結(jié)果表明該方法簡便、快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可作為本制劑內(nèi)在質(zhì)量控制的有效方法。

1 儀器與試藥

島津LC -10ATvp 泵，SPD -10Avp 型檢測器，N -2000 工作站，sartorious BP211D 型電子天平，島津UV -2450 型紫外-可見分光光度計。羥基紅花黃色素A 對照品(批號: 111637 -201207，供含量測定用): 中國食品藥品檢定研究院;乙腈(色譜純)，甲醇(色譜純)，水為高純水，其它試劑均為分析純。樣品(批號: 303131，303051，303201)為包頭市蒙中醫(yī)院提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱: 色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，本實驗研究采用Apollo C18(150mm ×4.6mm，5μm);流動相: 甲醇-乙腈-0.7 磷酸溶液(26 ︰2 ︰72)為流動相，在該條件下，羥基紅花黃色素A 具有較好的保留時間，與其他雜質(zhì)分離完全，峰形好，陰性樣品不干擾測定，理論板數(shù)較高，羥基紅花黃色素A 的理論板數(shù)為3000 以上。柱溫為室溫。

檢測波長的選擇: 精密稱取羥基紅花黃色素A 對照品適量，用25%甲醇制成1mL 含0.1304mg 的溶液，在220 ～550nm 波長范圍掃描。結(jié)果: 羥基紅花黃色素A 在223.0 nm 和403.0 nm 有最大吸收，根據(jù)中國藥典2010 年版一部“紅花”項下羥基紅花黃色素A 的含量測定采用的檢測波長為403nm，故選擇403nm 作為檢測波長。

2.2 對照品溶液的制備: 精密稱取羥基紅花黃色素A 對照品適量，加25%甲醇制成每1mL 含40μg 的溶液，作為對照品溶液。取20μL 注入液相色譜儀測定。見圖1。

圖1 羥基紅花黃色素A 對照品

圖2 尤寧-7 散樣品

圖3 陰性對照

2.3 供試品溶液的制備: 取樣品，研細(xì)，精密稱取0.6g，置具塞錐形瓶中，精密加入25%甲醇50mL，稱定重量，超聲處理(功率300W，頻率50kHz)40min，放冷，再稱定重量，用25%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液20μL 注入液相色譜儀測定。見圖2。

2.4 陰性對照溶液的制備: 按處方配比取除紅花外的其他處方量藥材，按制備工藝方法制備陰性樣品，按上述供試品溶液的制備方法制成陰性對照液。取20μL 注入液相色譜儀測定。見圖3。

2.5 線性關(guān)系考察: 精密稱取羥基紅花黃色素A 對照品約13mg，置100mL 量瓶中，加25%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用(相當(dāng)于每1mL 含羥基紅花黃色素A 對照品0.1304mg)。精密量取上述對照品溶液各0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL，置10mL 量瓶中，用25%甲醇稀釋至刻度，搖勻，按上述色譜條件測定，以峰面積對對照品的進(jìn)樣量進(jìn)行回歸分析，結(jié)果羥基紅花黃色素A 在0.1304 ～1.304μg 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為: Y =5125.4027+1093457.496X，r=0.9999 標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)值見表1。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)值

2.6 提取效率的考察: 取樣品(批號: 303131)，研細(xì)，取4份，各0.6g，精密稱定，按樣品測定項處理，分別測定羥基紅花黃色素A 的含量，結(jié)果見表2。從表中數(shù)據(jù)可見，超聲提取40min 和60min 羥基紅花黃色素A 的含量一致，故超聲提取時間定為40min。

表2 提取效率結(jié)果

2.7 穩(wěn)定性試驗: 取同一份樣品(批號: 303131)溶液，分別在0h、2h、4h、8h、12h 進(jìn)行測定，結(jié)果見表3。從表中數(shù)據(jù)可見，，羥基紅花黃色素A 在12h 內(nèi)穩(wěn)定。

表3 不同時間測定樣品中羥基紅花黃色素A 的峰面積積分值

2.8 重復(fù)性試驗: 取同一批號(303051)供試品6 份，按樣品測定項處理，分別測定羥基紅花黃色素A 的含量，其RSD 為0.6%。結(jié)果表明，本方法重復(fù)性好，結(jié)果見表4。

表4 羥基紅花黃色素A 含量測定重現(xiàn)性試驗結(jié)果

2.9 加樣回收率試驗: 取供試品(樣品批號: 303051，含量: 3.16 mg/g)9 份，各約0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入用25%甲醇配制的羥基紅花黃色素A 對照品溶液(羥基紅花黃色素A 濃度為0. 1304mg/mL)4. 0mL、7. 0 mL、10.0 mL，加入25%甲醇至50 mL，稱定重量，超聲提取(功率300W，頻率50kHz)40min，放冷，再稱定重量，用25%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取20μL 注入液相色譜儀測定，按外標(biāo)法計算含量，結(jié)果見表5。結(jié)果表明本方法回收率良好。

表5 加樣回收率試驗結(jié)果

2.10 樣品測定: 取3 批樣品，每批各3 份，按樣品測定項處理，分別取供試品溶液、對照品溶液各20μL 注入液相色譜儀測定。按外標(biāo)法計算羥基紅花黃色素A 含量，結(jié)果見表6。

表6 樣品中羥基紅花黃色素A 含量測定結(jié)果

2.11 藥材的含量測定: 取藥材粉末0.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，按中華人民共和國藥典一部“紅花”項下羥基紅花黃色素A 的含量測定方法處理，測定羥基紅花黃色素A 的含量。按外標(biāo)法計算含量。結(jié)果見表7。

表7 紅花藥材羥基紅花黃色素A 含量測定結(jié)果

2.12 轉(zhuǎn)移率測定: 實驗中采用中國藥典2010 年版一部“紅花”項下含量測定方法對上述樣品(批號: 303051)生產(chǎn)所用紅花藥材進(jìn)行了含量測定量為1.5%，測定結(jié)果見表7。按理論值折算，本品每1g 其羥基紅花黃色素A 的含量3.48mg。從供試品的實測結(jié)果來看，羥基紅花黃色素A 的轉(zhuǎn)移率為90.1%。按中國藥典2010 年版一部規(guī)定: 紅花中羥基紅花黃色素A 的含量不得少于1.0%進(jìn)行折算，乘以轉(zhuǎn)移率再下浮10%。本品每克含紅花以羥基紅花黃色素A(C27H30O15)計，每克應(yīng)不少于1.88mg。

3 小 結(jié)

該方法簡便、快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可作為尤寧-7 散內(nèi)在質(zhì)量控制的有效方法。

［1］國家藥典委員會.中國藥典［S］.一部.中醫(yī)藥科技出版社，2010：141