鄭凱 王雅靜

HPLC-ELSD法測白癜風膠囊中黃芪甲苷的含量

鄭凱 王雅靜

目的 建立HPLC-ESLD法測定白癜風膠囊中黃芪甲苷含量的方法。方法 采用Aglient C18 色譜柱；漂移管溫度：50℃；載氣壓力：30 PSI 流動相：乙腈-水(32:68)；流速：1.0 ml/min, 柱溫：20℃。 結果 黃芪甲苷進樣量在0.4169～8.036 ug范圍內(nèi)濃度對數(shù)與峰面積對數(shù)線性關系良好(r=0.9994)；平均回收率(n=6)為101.3%, RSD為1.7% 。結論 本法簡捷、準確、重復性好, 可作為評價白癜風膠囊中黃芪甲苷的質(zhì)控方法。

蒸發(fā)光散射檢測器；高效液相色譜；黃芪甲苷；白癜風膠囊

白癜風膠囊收在于《中國藥典》2010年版一部, 由補骨脂、黃芪、紅花、川穹、當歸、香附、桃仁、丹參、烏梢蛇、紫草、白鮮皮、山藥、干姜、龍膽、蒺藜等15味中藥材組成的復方制劑。具有活血行滯、祛風解毒。用于經(jīng)絡阻隔、氣血不暢所致的白癜風, 癥見白斑散在分布、色澤蒼白、邊界較明顯。藥典規(guī)定含量測定以補骨脂素為指標成分, 有關黃芪甲苷含量未作規(guī)定, 本研究為白癜風膠囊中的黃芪甲苷含量提供了一種較為有效的檢驗方法。

1 儀器與試劑

美國Waters E2695高效液相色譜儀(蒸發(fā)光散射檢測器)；CPA225D賽多利斯電子天平(精度±0.01 mg)

標準品：黃芪甲苷(批號：110781-200612 由中國食品藥品檢定研究院提供)；色譜乙腈(20130322 安徽時聯(lián)), 自制超純水, 試劑均為分析純, 白癜風膠囊, 見表2。

2 色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-4 5u (4.6 mm×200 mm)；漂移管溫度50℃；空氣壓力：30 psi；流動相：乙腈-水(32:68)；流速：1.0 ml/min; 柱溫：35℃, 進樣量：20 μl。

3 溶液的配制

3.1對照溶液 精密稱定黃芪甲苷對照品, 加甲醇分別制成含0.2 mg/ml和0.1 mg/ml的溶液。

3.2供試溶液 取20粒樣品內(nèi)容物, 研細, 稱取, 精密稱定4.0 g置具塞錐形瓶中, 精加甲醇100 ml, 稱重, 超聲30 min,放冷, 再稱重, 補足減失的重量, 搖勻, 過濾, 精取50 ml, 置水浴上蒸干, 殘渣加水50 ml使溶解, 用水飽和正丁醇振搖提取3次, 共50 ml, 合并正丁醇提取液, 用100 ml氨試液洗滌1次, 再用100 ml正丁醇飽和的水洗滌一次, 取正丁醇液,置水浴上蒸干, 殘渣加甲醇溶解, 轉移5 ml量瓶中, 稀至刻度, 搖勻, 過濾, 取續(xù)濾液。

3.3空白輔料實驗 按處方量制不含黃芪甲苷空白輔料溶液, 按3.2項下方法制備, 即得。

4 方法與結果

4.1專屬性試驗 取3.3項下空白輔料溶液, 對照溶液和供試溶液各20 μl, 依法測定, 結果表明, 對照溶液色譜圖中黃芪甲苷主峰的保留時間為10.806 min, 供試溶液色譜圖與對照溶液色譜圖主峰保留時間處有色譜峰出現(xiàn), 空白輔料溶液在相應的保留時間處無色譜峰, 表明空白輔料溶液無干擾,專屬性好, 見圖1。

圖1 白癜風膠囊HPLC色譜圖

4.2精密度試驗 精取供試溶液, 連續(xù)進樣6次, RSD=1.3%,精密度良好。

4.3重復性試驗 取同一批供試溶液(批號為120406), 依法測定含量, 結果6次測定平均含量黃芪甲苷為45 μg/粒, RSD=1.5%。

4.4溶液穩(wěn)定性試驗 取同一批供試液, 室溫放置后0、2、4、8、24 h, 精密量取20 μl進樣, 計算黃芪甲苷含量平均值為42 μg/粒 RSD=1.7% 表明穩(wěn)定性好。

4.5線性關系考察 精取黃芪甲苷對照溶液(0.4169 mg/ml) 1、2、5、10、15、20 μl, 重復進樣兩次, 用外標兩點對數(shù)方程計算, 以進樣量(μg)為橫坐標, 色譜峰面積為縱坐標, 所得線性回歸方程為：logY=1.2937logX+6.0825 r=0.9994 結果表明, 黃芪甲苷在0.4169～8.036 μg范圍內(nèi)濃度對數(shù)與峰面積對數(shù)呈良好的線性關系。

4.6加樣回收率試驗 精取2 g已知含量的樣品6份, 精密加入對照溶液(0.008338 mg/ml) 50 ml, 搖勻, 再精密加入50 ml甲醇, 搖勻, 依法測定, 結果平均回收率為101.3% (n=6), RSD=1.3%,見表1。

4.7樣品測定 分別精取對照溶液2、5 μl與供試溶液20 uL, 按給定色譜條件測定, 用外標兩點對數(shù)方程計算, 結果見表2。

表1加樣回收率結果

表2黃芪甲苷的含量測定結果(n=6)

5 討論

5.1流動相的選擇 流動相的選擇HPLC測定選擇了乙腈：水(體積比32:68), 甲醇：水(體積比35:65)兩種流動相體系,通過比較分離情況, 確定了上述體系, 該體系使各成分得到了較好的分離, 滿足定量的要求

5.2測定目的 本文以高效液相色譜法測定白癜風膠囊中主要成分黃芪甲苷的含量, 方法分析條件易于精確控制, 待測成分易于分離, 且具有較好的重現(xiàn)性和較高的精密度, 為白癜風膠囊的質(zhì)量標準的制訂提供了依據(jù)

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122000 朝陽市食品藥品檢驗所(鄭凱)；朝陽市食品藥品安全監(jiān)督所(王雅靜)