張小麗，王瑞玲，宋 娜，王文靜，張 翠， 張學東，王沖沖，楊曉莉

四種乙型肝炎病毒表面抗體試劑盒檢測人乙型肝炎病毒表面抗體效果比較

張小麗1，王瑞玲1，宋 娜1，王文靜1，張 翠1， 張學東2，王沖沖2，楊曉莉1

目的 分析商品化試劑盒檢測人乙型肝炎病毒(乙肝)表面抗體(抗-HBs)之間的差異。方法 本院實驗標本252份，分別用雅培I2000定量試劑盒、羅氏e601定量試劑盒、安圖Auto Lumo A2000定量檢測試劑盒和國內主流酶聯(lián)免疫法定性試劑盒(上?？迫A)檢測人乙肝表面抗體，以假定金標準對各廠家的陰、陽性結果進行比對分析，并對3個定量檢測系統(tǒng)進行量值相關性分析。結果 4種乙肝表面抗體試劑與假定金標準相比，靈敏度和特異性都達到了93%以上，其中安圖和羅氏的靈敏度和特異性最高，達到了98%以上；羅氏試劑盒的躍登指數(shù)(靈敏度+特異性-100%)最高，為99.3%；與金標準比較，3種化學發(fā)光試劑盒檢測結果無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，而酶聯(lián)免疫法定性試劑盒檢測結果有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。結論 主流乙肝表面抗體試劑盒在檢驗乙肝表面抗體時均存在一定的假陽性或假陰性，量值相關性較好，不影響臨床應用分析。

表面抗體；金標準；靈敏度；特異性；量值相關性

乙型肝炎病毒表面抗體是由乙肝表面抗原誘導而產生的一種保護性抗體，是人體預防乙肝病毒入侵的有效屏障[1，2]。一般當機體內產生抗-HBs后，就會具有免疫力，不會再感染乙肝病毒[3]。但抗-HBs不會永久存在，而會隨著時間等因素逐漸消失。檢測抗-HBs主要是用于監(jiān)測注射乙肝疫苗是否有效及體內抗-HBs含量，還可以作為醫(yī)師對乙肝患者臨床用藥及病情的動態(tài)監(jiān)測指標。目前，抗-HBs檢測無確認方法，定量檢測多采用化學發(fā)光法，定性檢測多采用酶聯(lián)免疫法[4]。但同一份標本不同廠家試劑盒檢測會出現(xiàn)陰、陽性及量值方面的差異。為此，本研究旨在分析比較四種商品化試劑盒檢測人乙肝病毒表面抗體之間的差異，為試劑盒選用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般材料 本院門診、住院患者的血液標本252份，含肝移植患者樣本30份。

1.2 方法

1.2.1 儀器及試劑 分別采用雅培Architect I2000全自動化學發(fā)光儀及雅培抗-HBs試劑盒；羅氏生產的e601全自動電化學儀及羅氏抗-HBs試劑盒；安圖生物Auto Lumo A2000全自動化學發(fā)光儀及安圖抗-HBs試劑盒；上?？迫A酶聯(lián)免疫乙肝表面抗體定性試劑盒及PHOMO酶免儀；以及各廠家配套的定標液和質控品。

1.2.2 數(shù)據(jù)分析比較方法 鑒于表面抗體無確認方法，目前采用多家試劑平行檢測[5]，本次實驗以通用的驗證方法為標準：認定3家檢測結果相同的為真陽性或真陰性，將其定義為金標準；2家試劑檢測結果不同定為可疑，不參與結果統(tǒng)計。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件，陰、陽性結果分析進行χ2檢驗，量值相關性統(tǒng)計采用線性回歸分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 樣本檢測結果 真陽性共145份，真陰性共104份，可疑樣本共3份。

2.2 四種試劑盒的靈敏度、特異性及約登指數(shù)分析 雅培Architect I2000全自動化學發(fā)光儀抗-HBs試劑盒、羅氏e601全自動電化學儀抗-HBs試劑盒、安圖Auto Lumo A2000全自動化學發(fā)光儀抗-HBs試劑盒檢測結果與金標準比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；科華試劑盒檢測結果與金標準比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。四種試劑盒與假定金標準檢測抗-HBs的對比結果見表1。四種試劑盒的靈敏度、特異性及約登指數(shù)見表2。

表1 四種乙肝病毒檢測試劑盒與假定金標準檢測抗-HBs的對比結果

表2 四種乙肝病毒檢測試劑盒的靈敏度、特異性及約登指數(shù) (%)

2.3 量值相關性分析 羅氏檢測結果與雅培檢測結果的量值有相關性(r=0.8953，圖1)；安圖檢測結果與雅培檢測結果的量值有相關性(r=0.9007，圖2)；安圖檢測結果與羅氏檢測結果的量值有相關性(r=0.9098，圖3)。

圖1 羅氏檢測結果與雅培檢測結果的量值相關性分析

圖2 安圖檢測結果與雅培檢測結果的量值相關性分析

圖3 安圖檢測結果與羅氏檢測結果的量值相關性分析

3 討 論

我國是乙肝大國。注射乙肝疫苗是預防乙肝和乙肝流行的重要手段，還可有效降低肝硬化和肝癌的發(fā)病率和病死率，因此準確檢測乙肝表面抗體的濃度對評估注射疫苗后的免疫效果及臨床治療具有重要的意義。目前，臨床上普遍應用化學發(fā)光檢測系統(tǒng)及酶聯(lián)免疫系統(tǒng)進行定量和定性分析，但結果在不同檢測系統(tǒng)、不同實驗室存在一定的差異，其可比性對于臨床應用非常重要。

從本實驗結果可以看出，4種商品化乙肝表面抗體試劑盒均存在一定差異，與金標準相比，三種化學發(fā)光法檢測乙肝表面抗體無統(tǒng)計學差異，而酶聯(lián)免疫法與金標準相比有統(tǒng)計學差異。差異產生的主要原因是不同廠家生產的抗原、抗體試劑的差異導致非特異性反應?；瘜W發(fā)光法可通過不同濃度標準品來建立標準曲線，能精確地進行定性定量檢測，線性范圍寬[6]、靈敏度、特異性強，精密度和準確性均高于酶聯(lián)免疫法，為接種乙肝疫苗后的機體免疫應答狀況，以及乙肝患者治療后HBsAb濃度動態(tài)觀察提供可靠的依據(jù)。而酶聯(lián)免疫法方法簡單、費用低，但特異性、靈敏度不及化學發(fā)光法，無法定量，容易受到HBsAg的影響[7]，只能滿足臨床對單純陽性、陰性結果的判斷，更適合用于初篩實驗。

本研究表明，三種化學發(fā)光定量檢測試劑盒檢測同一份樣本量值均存在一定的偏差，與羅氏e601及安圖A2000相比，雅培I2000靈敏度相對較低，主要出現(xiàn)在陰陽臨界值及低濃度的標本，與文獻[8]報道一致。分析導致結果不同的主要原因是，不同的化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)由于使用的抗原及抗體、校準品等不同，產生的 HBsAb類型可能有所不同，得到的結果有一定的偏差；筆者對三種化學發(fā)光定量檢測在線性范圍內的樣本進行量值相關性分析發(fā)現(xiàn)，R均大于0.85，相關性較好，與文獻[9]報道一致，不影響臨床應用分析。其中國產化學發(fā)光試劑盒安圖A2000在本次試驗中顯示出較高的靈敏度和特異性，其操作智能化程度高、線性范圍寬、費用相對于進口試劑費用低，值得臨床推廣使用。對于本研究中出現(xiàn)的3份可疑樣本，無法確認是真陽性還是假陽性，筆者認為主要與以下因素有關：首先是制備抗體試劑盒的活性材料來源于不同人種，存在抗原亞型方面的差異；其次，由于患者不同HBsAg亞型，其產生抗體與試劑盒的反應性強弱不同，另一方面由于不同廠家生產的疫苗也不同，其產生抗體與試劑盒的反應性強弱也不同。

本研究表明，無論是進口或國產的乙肝病毒表面抗體試劑盒，在檢測乙肝表面抗體時均存在一定的假陽性和假陰性。4種商品化表面抗體檢測試劑均存在一定比例的不符合樣本，需要結合臨床診斷及其余四項抗原、抗體結果進行綜合分析。對于多家試劑量值差異的問題，除了廠家規(guī)范已有的溯源外，臨床客戶在使用時需要做好解釋工作。對于定期監(jiān)測乙肝表面抗體濃度的患者，建議采用相同的化學發(fā)光檢測系統(tǒng)進行定量檢測。

[1] 張學東,張 泉,謝惠波,等.不同廠家試劑盒檢測人血清乙肝表面抗體濃度值相關性分析[J].科技信息，2009，7: 362-363.

[2] ZHANG J M，XU Y，WANG X Y，etal. Coexistence of hepatitis B surface antigen(HBsAg) and heterologous subtypespecific antibodies to HBsAg among patients with chronic hepatitis B virus infection[J].Clin Infect Dis，2007，44(9):1161-1169.

[3] 中華醫(yī)學會肝病學分會、中華醫(yī)學會感染病學分會. 慢性乙型肝炎指南[J]. 胃腸病學雜志, 2006, 11(9):550-557.

[4] 郝欽芳，周廣軍，張麗萍，等. 化學發(fā)光法和酶聯(lián)免疫法檢測人血清乙肝表面抗體濃度值差異性分析[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志，2009,19(10):2330-2331.

[5] Huzly D, Schenk W,Jilg,etal.Comparison of Nine Commercially Available Assays for Quantification of Antibody Response to Hepatitis B Virus Surface Antigen[J]. Clin Microbiol, 2008，46(4): 1298-1306.

[6] 王小明，劉 平.乙型肝炎病毒表面抗體化學發(fā)光定量檢測方法的建立[J]. 實驗與檢驗醫(yī)學，2010，28(6)：597.

[7] 趙秀英，陳俊梅，王文靜，等.電化學發(fā)光法和ELISA法檢測HBV表面抗體結果的比較與分析[J].北京醫(yī)學，2011，33(6):461-463.

[8] 官燕飛，彭建明，陳艷玲，等. 2種全自動化學發(fā)光免疫檢測系統(tǒng)低值乙肝表面抗體定量測定結果的比較[J]. 國際檢驗醫(yī)學雜志，2013，34(13)：1740-1742.

[9] Yu Chen, Wei Wu, Lan-juan Li，etal.Comparison of the results for three automated immunoassay systems in determining serum HBV markers[J].Clinica Chimica Acta，2006,372: 129-133.

(2014-06-13收稿 2014-08-22修回)

(責任編輯 尤偉杰)

Comparison of four commercially available assays for antibody to hepatitis B virus surface antigen

ZHANG Xiaoli1，WANG Ruiling1，SONG Na1, WANG Wenjing1, ZHANG Cui1，ZHANG Xuedong2， WANG Chongchong2，and YANG Xiaoli1.

1.Clinical laboratory, General Hospital of Chinese People’s Armed Police Forces,Beijing 100039,China. 2. Autobio Diagnostics Co Ltd, Zhengzhou 450016, China

Objective To study four commercially available assays for antibody to hepatitis B virus surface antigen. Methods A total of 252 specimens were tested by Abbott i2000、Roche e601、Autobio AutoLumoA2000 and a ELISA kit, respectively,and the quantitative results and the performance characteristics of the different test systems were compared. Results The sensitivity and specificity of different manufacturer kits for Anti-HBs were beyond 93%. The detection rates of compared CLIA(Chemiluminescence Immunoassay) commercial Anti-HBs reagents had no significant difference (P>0.05). Conclusions The four commercial Anti-HBs reagents have false positive and false negative results; the correlation analysis for quantitative results is beyond 0.85.

antibody to hepatitis B surface antigen；gold standard；sensitivity；specificity；correlation analysis

張小麗，本科學歷，技師，E-mail:zxl_5021@sina.com

1.100039北京，武警總醫(yī)院檢驗科；2.450016，鄭州安圖生物工程股份有限公司

楊曉莉，E-mail:yangxiaolitwins@163.com

R392.33