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氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測定乳制品中三聚氰胺及其3種類似物

2014-08-07 02:24:10林曉珊吳惠勤黃曉蘭馬葉芬朱志鑫羅輝泰
質(zhì)譜學(xué)報 2014年6期
關(guān)鍵詞:三聚類似物三聚氰胺

林曉珊,吳惠勤,黃曉蘭,馬葉芬,朱志鑫,黃 芳,羅輝泰,鄧 欣

(中國廣州分析測試中心,廣東省分析測試技術(shù)公共實驗室,廣東 廣州 510070)

三聚氰胺(melamine,CAS號:108-78-1)是一種三嗪類含氮雜環(huán)有機化合物,是重要的氮雜環(huán)有機化工原料,常用于制造三聚氰胺樹脂。在三聚氰胺制造過程中產(chǎn)生的雜質(zhì)可能會形成三聚氰酸(cyanuric acid)、三聚氰酸一酰胺(ammeline)和三聚氰酸二酰胺(ammelide)等類似物,一些不法分子利用其含氮量高,將其添加到乳制品中以提高氮含量。2007年爆發(fā)的貓和狗等寵物食品事件,2008年爆發(fā)的三鹿奶粉事件都是因違法添加三聚氰胺導(dǎo)致的。目前,三聚氰胺已嚴禁直接用于食品。三聚氰胺和三聚氰酸雖然只有低急性毒性,但有證據(jù)顯示,在同時攝入三聚氰胺和三聚氰酸后會導(dǎo)致腎毒性。研究人員試驗了大鼠單獨攝入三聚氰胺或其類似物的1種、三聚氰胺和三聚氰酸的混合物,以及4種化合物的混合物,發(fā)現(xiàn)單獨攝入均未對腎產(chǎn)生任何副作用,但攝入混合物則產(chǎn)生明顯的腎損傷[1]。因此,在乳制品中同時檢測三聚氰胺及其3種類似物非常重要。

目前,對三聚氰胺及其同系物檢測方法的報道主要針對生鮮乳、豬組織、食品以及食品添加劑等樣品,多采用液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法、液相色譜-質(zhì)譜法等[2-16],但都存在一定的缺陷。如王煉等[15]利用超高效液相色譜法測定乳及乳制品中三聚氰胺,該方法只針對三聚氰胺一種成分,且只用保留時間定性。朱聰英等[16]利用GC/MS法同時測定生鮮乳中三聚氰胺及其類似物,4種化合物的檢出限為0.1~0.2 mg/kg,且所采用的選擇離子(SIM)法僅適合基體簡單的生鮮乳,而對于基質(zhì)較復(fù)雜的乳制品,則干擾較大,會造成靈敏度不夠,影響結(jié)果的準確性。

由于三聚氰胺及其3種類似物中包含了酸性和堿性化合物,較難用單一的固相萃取小柱凈化,而且乳制品基質(zhì)成分較復(fù)雜,給色譜分離和硅烷化處理帶來了困難,即使采用選擇離子檢測法也難以消除,影響了測定的準確度,易產(chǎn)生假陽性。本研究采用氣相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)技術(shù),通過“母離子>子離子”的多反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM),快速測定乳制品中的三聚氰胺及其3種類似物。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 7000A三重四極桿氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀:美國Agilent公司產(chǎn)品;氮吹儀:上海安譜科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品;TDL-80-2B低速臺式離心機:上海飛鴿牌產(chǎn)品。

三聚氰胺、三聚氰酸、三聚氰酸一酰胺、三聚氰酸二酰胺:德國CNW Technologies GmbH公司產(chǎn)品;乙腈(色譜純):德國Merck公司產(chǎn)品;二乙胺、三氯乙酸、乙酸鋅、吡啶(分析純):廣州化學(xué)試劑廠產(chǎn)品;硅烷化試劑(含有1%三甲基一氯硅烷(TMCS)的N,O-雙三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)):上海安譜科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品;實驗用水為蒸餾水;乳制品(奶粉、液態(tài)奶、酸牛奶、含乳飲料、奶茶、煉乳、奶酪):均購自超市。

1.2 標準工作溶液的制備

準確稱取10.0 mg(精確至0.1 mg)標準物質(zhì),用V(二乙胺)∶V(水)=20∶80的溶液超聲溶解,并定容至100 mL容量瓶中,配制成濃度為0.1 g/L混合標準儲備溶液,在-18 ℃以下冷凍,避光保存,有效期3個月。實驗需要時,準確移取一定體積的混合標準儲備溶液,用V(二乙胺)∶V(水)∶V(乙腈)= 10∶40∶50的溶液稀釋成0.01、0.02、0.04、0.1、0.2、0.4、1.0 mg/L系列濃度混合標準工作溶液。

1.3 樣品前處理

1.3.1 提取 稱取0.5 g(精確至0.001 g) 試樣于50 mL具塞離心管中,加入20 mL提取溶劑,渦旋1 min,超聲提取30 min,然后以4 000 r/min離心5 min,取200 μL上層清液于10 mL尖底具塞玻璃比色管中,70 ℃下經(jīng)氮氣吹干。

1.3.2 衍生化 向吹干后的比色管中加入300 μL吡啶和200 μL硅烷化試劑,超聲振蕩1 min,渦旋1 min后,于70 ℃衍生45 min,衍生化的溶液進行GC-MS/MS分析。混合標準工作溶液按上述步驟同時進行衍生。

1.4 GC-MS/MS分析

1.4.1 色譜條件 色譜柱: HP-1MS彈性石英毛細管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm);載氣:He(99.999%);碰撞氣為 N2;柱流量0.9 mL/min,恒流;不分流進樣;進樣量1.0 μL;進樣口溫度280 ℃;升溫程序:柱初始溫度70 ℃,保持1 min,以10 ℃/min至280 ℃,保持8 min。

1.4.2 質(zhì)譜條件 EI離子源,離子源溫度230 ℃,四極桿溫度150 ℃,色譜-質(zhì)譜連接口溫度280 ℃,電子能量70 eV,電子倍增器電壓1 500 V,溶劑延遲時間6 min,MRM掃描模式。選擇母離子、子離子、碰撞能量及保留時間列于表1。

表1 母離子、子離子、碰撞能量及保留時間

注:*定量離子對

1.4.3 測定方法 各取1.0 μL樣品溶液和標準溶液注入氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀進行分析,得到GC-MS/MS的MRM圖。以保留時間和二級質(zhì)譜特征碎片離子定性,以定量離子對的峰面積外標法計算樣品中三聚氰胺及其3種類似物的含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品前處理條件的選擇

2.1.1 提取方法的選擇 現(xiàn)有的檢測方法只針對三聚氰胺一種物質(zhì),一般采用陰離子固相萃取小柱凈化,前處理步驟較為繁瑣。而乳制品中三聚氰胺及其3種類似物的基質(zhì)較復(fù)雜,對提取溶劑要求較高,本研究進行了3種方法的比較。1)用水稀釋或溶解樣品,以V(1%三氯乙酸)∶V(乙腈)=75∶25的溶液超聲提取,沉淀蛋白效果好,加標回收率在72%左右;2)用水稀釋或溶解樣品,以22 g/LV(乙酸鋅)∶V(乙腈)=75∶25的溶液超聲提取,沉淀蛋白效果好,加標回收率在68%左右;3)用V(二乙胺)∶V(水)∶V(乙腈)=10∶40∶50 的溶液超聲提取,破壞了三聚氰胺及其3種類似物可能同時存在的離子對,提高了目標物的溶解度,加標回收率大于92.5%。本研究選擇方法(3)作為提取溶劑。

2.1.2 提取溶劑用量及衍生條件的選擇 由于樣品基質(zhì)較復(fù)雜,本研究考察了樣品量、提取溶劑用量及衍生條件對定量結(jié)果的影響。稱取2組空白樣品進行加標回收實驗,稱樣量為0.5、1.0 g,分別加入5、10、15、20、25、30 mL提取液,對比吸取100、200、300、400、500 μL上清液,進行氮吹濃縮和硅烷化衍生,比較結(jié)果列于表2。

結(jié)果表明:1)稱樣量增大時,本底干擾大,基質(zhì)復(fù)雜,回收率降低;2)隨著提取溶劑的增多,回收率有所增加,用20 mL提取溶劑基本能夠提取完全,且提取溶劑較為澄清;3)取提取溶劑氮吹濃縮時,溶劑量越大,本底干擾越大,濃縮越難,對硅烷化衍生影響較大,使回收率降低。綜上,本實驗選擇取樣量為0.5 g,提取溶劑為20 mL,離心后,吸取200 μL上清液進行氮吹濃縮和硅烷化衍生。

2.2 色譜條件的選擇

目標化合物進行硅烷化衍生后極性較弱,采用AB-5MS弱極性柱,通過改變起始溫度、程序升溫速率和柱流量等參數(shù),篩選出最佳的色譜條件,使目標化合物的峰形好、出峰快、流失小,三聚氰胺、三聚氰酸、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸二酰胺能完全達到基線分離。

表2 前處理條件比較結(jié)果

2.3 GC-MS/MS質(zhì)譜條件的優(yōu)化

通過全掃描確定三聚氰胺、三聚氰酸、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸二酰胺衍生物的質(zhì)譜圖,三聚氰胺以m/z342和m/z327作為母離子,三聚氰酸以m/z345和m/z330作為母離子,三聚氰酸一酰胺以m/z344和m/z329作為母離子,三聚氰酸二酰胺以m/z343和m/z328作為母離子,進行子離子掃描,其特征離子圖示于圖1。通過對碰撞能量5、10、15、20、25、30、35、40、45 V進行優(yōu)化,三聚氰胺及其3種類似物優(yōu)化后的MRM參數(shù)已在表1中列出。采用 MRM模式,消除了乳制品中復(fù)雜基質(zhì)的干擾,提高了檢測的靈敏度及準確度。

注:a.三聚氰胺;b.三聚氰酸;c.三聚氰酸一酰胺;d.三聚氰酸二酰胺 圖1 三聚氰胺及其3種類似物的特征離子圖 Fig.1 Characteristic ion chromatogram of melamine and its three analogues

2.4 基質(zhì)效應(yīng)

分別取各種乳制品樣品(奶粉、液態(tài)奶、酸牛奶、含乳飲料、奶茶、煉乳、奶酪),按1.3.1方法進行提取后,用此提取液配制標準溶液,按1.3.2方法進行衍生化處理,GC-MS/MS進樣分析,以其色譜峰峰面積與相應(yīng)濃度標準溶液(純?nèi)軇┡渲?的色譜峰峰面積的比值為基質(zhì)效應(yīng)。結(jié)果表明,基質(zhì)效應(yīng)影響不大,可忽略。

2.5 方法學(xué)驗證

2.5.1 檢出限及定量限 在空白奶粉樣品中添加一定濃度的標準溶液,測定檢出限及定量限。按3倍信噪比計算,三聚氰胺及其3種類似物的檢出限均達到0.05 mg/kg;按10倍信噪比計算,定量限均達到0.1 mg/kg,能滿足乳制品中三聚氰胺及其3種類似物的限量要求。

2.5.2 標準曲線及線性范圍 配制0.01、0.02、0.04、0.1、0.2、0.4、1.0 mg/L三聚氰胺及其3種類似物的混合標準系列溶液,衍生化后進行測定,以峰面積y為縱坐標,質(zhì)量濃度x(mg/L)為橫坐標,繪制標準工作曲線。三聚氰胺及其3種類似物的混合標準溶液的GC-MS/MS圖示于圖2。在0.01~1.0 mg/L范圍內(nèi),三聚氰胺及其3種類似物的線性關(guān)系均良好,線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)列于表3。

2.5.3 回收率及精密度 在空白奶粉樣品中加入混合標準工作溶液,使樣品加標水平分別為0.5、1.0、2.0 mg/kg,每個加標水平進行6次平行測定,按1.3處理樣品后,同時測定三聚氰胺及其3種類似物的含量,計算回收率和精密度。3個添加水平的回收率為92.5%~102.5%,相對標準偏差(RSD)為2.5%~5.0%,結(jié)果列于表4。該方法的準確度和精密度均較高,且具有較好的可靠性和重現(xiàn)性。

注:a.三聚氰胺;b.三聚氰酸;c.三聚氰酸一酰胺;d.三聚氰酸二酰胺圖2 三聚氰胺及其3種類似物的GC-MS/MS圖Fig.2 Chromatogram of melamine and its three analogues by GC-MS/MS

2.6 實際樣品的測定

采用本研究建立的GC-MS/MS方法對購自超市的乳制品(奶粉、液態(tài)奶、酸牛奶、含乳飲料、奶茶、煉乳、奶酪)進行分析,結(jié)果表明,在1種奶粉和1種液態(tài)奶中檢出三聚氰胺,含量分別為0.89 mg/kg和1.75 mg/kg,未超過國家限量標準2.5 mg/kg;在所有樣品中均未檢出三聚氰酸、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸二酰胺,基質(zhì)標樣(0.1 mg/L)的質(zhì)譜圖示于圖3。

表3 三聚氰胺及其3種類似物的
線性方程和相關(guān)系數(shù)
Table 3 The linear equations and correlation
coefficients of melamine and its three analogues

組分名稱線性方程相關(guān)系數(shù)三聚氰胺y=2 936 173x-23 8210.999 8三聚氰酸y=2 898 483x+114 3500.998 2三聚氰酸一酰胺y=4 239 414x-33 9180.999 9三聚氰酸二酰胺y=6 167 243x-64 4530.999 8

注:a.三聚氰胺;b.三聚氰酸;c.三聚氰酸一酰胺;d.三聚氰酸二酰胺圖3 基質(zhì)標樣的GC-MS/MS圖 Fig.3 GC-MS/MS multiple-reaction monitoring(MRM) chromatography of the matrix samples

組分名稱加入量/(mg/kg)實測值/(mg/kg)回收率/%相對標準偏差/%0.50.44,0.45,0.47,0.48,0.49,0.4893.64.14三聚氰胺1.00.92,0.93,0.89,0.95,0.96,0.9092.52.962.01.85,1.92,1.95,1.98,1.93,1.8695.82.660.50.43,0.48,0.46,0.44,0.47,0.4892.64.02三聚氰酸1.00.95,0.91,0.97,0.92,0.96,0.9394.02.522.02.09,2.11,2.10,1.98,1.97,2.07102.53.030.50.47,0.48,0.45,0.47,0.44,0.4792.73.25三聚氰酸一酰胺1.00.95,0.94,0.86,0.97,0.98,0.9293.74.612.01.93,1.87,1.97,1.92,1.96,1.8595.82.500.50.48,0.44,0.50,0.47,0.44,0.4793.35.00三聚氰酸二酰胺1.00.92,0.93,0.95,0.97,0.96,0.9095.32.722.01.95,1.98,1.99,2.02,1.94,1.8797.92.65

3 結(jié)論

通過對樣品前處理條件和質(zhì)譜條件進行優(yōu)化,采用V(二乙胺)∶V(水)∶V(乙腈)=10∶40∶50的溶液提取樣品中待測物,提取液經(jīng)氮吹儀濃縮后,用硅烷化試劑衍生,GC-MS/MS法測定。結(jié)果表明:該方法簡便、快速,無需小柱,具有保留時間和串聯(lián)質(zhì)譜特征離子對確證的優(yōu)點;并且準確可靠,靈敏度高,節(jié)省了樣品的前處理時間及成本。方法的選擇性好、信噪比高,檢出限為0.05 mg/kg,定量限為0.1 mg/kg,能滿足同時測定三聚氰胺及其3種類似物的要求。

[1] 栗建輝,趙 真,李玉蘭,等.三聚氰胺及其同系物三聚氰酸毒性的研究概況[J].臨床薈萃,2011,26(5): 457-460. SU Jianghui, ZHAO Zhen, LI Yulan, et al. Study on the toxicity of melamine and cyanuric acid[J].Clinical Focus, 2011,26(5):457-460(in Chinese).

[2] NY/T 1372—2007飼料中三聚氰胺的測定[S].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2007.

[3] GB/T 22388—2008原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法[S]. 北京:中國標準出版社,2008.

[4] 許彩霞,吳 文,董 健,等.三重串聯(lián)四級桿液質(zhì)聯(lián)用儀檢測糖果中三聚氰胺[J].福建分析測試,2010,19(2):26-30. XU Caixia,WU Wen,DONG Jian, et al.Determination of melamine in candies by triple quadurupole liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J].Fujian analysis & testing, 2010,19(2):26-30(in Chinese).

[5] GB/T 22288—2008植物源產(chǎn)品中三聚氰胺、三聚氰酸一酰胺、三聚氰酸二酰胺和三聚氰酸的測定 氣相色譜-質(zhì)譜法[S].北京:中國標準出版社,2008.

[6] 蔡勤仁,曾振靈,馮家望,等.LC-MS/MS法結(jié)合譜庫檢索測定豬組織中三聚氰胺及其同系物[J].質(zhì)譜學(xué)報, 2010,31(5):277-282. CAI Qinren, ZENG Zhenling, FENG Jiawang, et al. Determination of melamine and its homologues in pig tissues by LC-MS/MS combining with spectral library search[J].Journal of Mass Spectrometry, 2010, 31(5): 277-282(in Chinese).

[7] 陳旻實,井 偉,呂水源,等.高效液相色譜法檢測食品接觸產(chǎn)品中的三聚氰胺及其衍生物的遷移量[J].分析化學(xué), 2011, 39(10):1 572-1 576. CHEN Minshi, JING Wei, LV Shuiyuan, et al. Determination of melamine and related derivatives by high perfomance liquid chromatography[J]. Analytical Chemistry, 2011,39(10):1 572-1 576(in Chinese).

[8] 陳德瑩,徐繼林,嚴小軍.膨化食品中三聚氰胺及其類似物的UPLC-Q-TOF-MS分析[J].寧波大學(xué)學(xué)報:理工版,2010,23(1):23-28. CHEN Deying, XU Jilin, YAN Xiaojun. Analysis of UPLC-Q-TOF-MS on melamine and similar compounds in puffed food[J]. Journal of Ningbo University(Natural Science & Engineering Edition), 2010,23(1):23-28(in Chinese).

[9] 郝成婷,王紅松,徐 炎,等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定液態(tài)乳制品中的苯代三聚氰胺 [J]. 分析測試學(xué)報,2014,33(2):227-230. HAO Chengting, WANG Hongsong, XU Yan, et al. Determination of benzoquanmine in liquid products of milk by LC-MS/MS[J]. Journal of Instrumental Analysis, 2014, 33(2):227-230(in Chinese).

[10] 祝偉霞,袁 萍,楊冀州, 等.親水色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對牛奶與奶粉中三聚氰胺及其衍生物含量的測定[J].分析測試學(xué)報, 2008, 27(12):1 288-1 292. ZHU Weixia, YUAN Ping, YANG Jizhou, et al. Determination of melamine and its derivatives in milk and milk powder by hydrophilic liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J].Journal of Instrumental Analysis, 2008, 27(12):1 288-1 292 (in Chinese).

[11] 江曉芬,井 偉,李小晶, 等.親水作用色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時檢測食品接觸材料中三聚氰胺及其衍生物遷移量[J].分析科學(xué)學(xué)報, 2012, 28(5): 647-651. JIANG Xiaofen, JING Wei, LI Xiaojing, et al. Simultaneous determination of migration amount for melamine and its derivatives in food contact materials by HILIC-MA/MS[J]. Journal of Analytical Science, 2012,28(5):647-651(in Chinese).

[12] 應(yīng)永飛,朱聰英,韋敏玨, 等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定飼料和土壤中三聚氰胺及其類似物[J].質(zhì)譜學(xué)報, 2012,33(6):342-349. YING Yongfei, ZHU Congying, WEI Minjue, et al. Simultaneous determination of melamine and its analogues in feeds & soils by liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Journal of Mass Spectrometry, 2012,33(6):342-349(in Chinese).

[13] 陳 鈺,王 捷,劉仲明,等.噴射式電化學(xué)發(fā)光流動檢測技術(shù)快速測定奶粉及液態(tài)奶中三聚氰胺[J].分析測試學(xué)報,2013,32(7):890-893. CHEN Yu, WANG Jie, LIU Zhongming, et al. Rapid determination of melamine in milk power and milk based on jet type electrochemiluminescence flow system[J].Journal of Instrumental Analysis,2013,32(7):890-893(in Chinese).

[14] 彭飛進,徐 幸,楊衛(wèi)花, 等.三聚氰胺及其類似物國內(nèi)外檢測方法綜述[J].食品工程, 2012, (2):13-15. PENG Feijin, XU Xing, YANG Weihua, et al. Review of international and domestic determination methods about melamine and analogues[J].Food Engineering, 2012, (2):13-15(in Chinese).

[15] 王 煉,龐晶晶,余輝菊.超高效液相色譜法測定乳及乳制品中的三聚氰胺[J].分析試驗室,2010,29(4):53-55. WANG Lian, PANG Jingjing, YU Huiju. Determination of melamine in the raw milk and dairy products by UPLC[J].Chinese Journal of Analysis Laboratory, 2010,29(4):53-55(in Chinese).

[16] 朱聰英,應(yīng)永飛,羅成江, 等.GC-MS法同時測定生鮮乳中三聚氰胺及其類似物的研究[J].中國飼料,2011,(22):27-31. ZHU Congying, YING Yongfei, LUO Chengjiang, et al. Study on simultaneous determination of melamine in raw milk and its analogs of GC-MS method[J].Chinafeed, 2011,(22):27-31(in Chinese).

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