張桂賢，劉大衛(wèi)，胡人杰

(天津市醫(yī)藥科學研究所，天津 300020)

癌癥在當今社會仍然是一個生命健康的殺手，是嚴重威脅人類的一種疾病。目前市場上已存在不少種類的抗癌藥物，但由于存在藥物毒性、作用差異和交叉耐藥等問題難以解決，開發(fā)新型抗腫瘤藥物一直是新藥研發(fā)的熱點。植物來源的抗腫瘤藥物的發(fā)現(xiàn)及抗癌機理的研究是最活躍的研究領域之一，目前多種抗腫瘤天然藥物已用于臨床治療。

1 實驗材料

615小鼠、C57小鼠、裸小鼠(BALB/c,nu/nu)，SPF級；其中615小鼠由中國醫(yī)學科學院血液病研究所實驗動物室提供；其余均由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，生產(chǎn)許可證號SCXK(京)2012-0001。麥冬提取物，褐色固體，無明顯氣味,微溶于水(實驗時以1%羧甲基纖維素鈉為助溶劑進行配制)，由北京同仁堂股份有限公司提供；環(huán)磷酰胺注射劑(CTX)，為瓶裝粉針劑，200 mg/瓶，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)，H32020857，產(chǎn)品批號：12041025。L615，由中國醫(yī)科院血液病研究所細胞庫提供；PG，由北京大學醫(yī)學部病理系細胞庫提供；Lewis肺癌，由本所傳代保存。電子天平,T500型，d=0.1 g，美國雙杰兄弟(集團)公司，常州常熟雙杰測試儀器廠生產(chǎn)。電子精密天平，PB303-N型，d=0.001，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司生產(chǎn)。

2 實驗方法

2.1 動物模型的建立 1)L615的接種：615小鼠具有其特殊性，本次試驗中先將L615細胞(由中國醫(yī)學科學院血液病研究所提供)接種于615小鼠腋下(2只)作為瘤源,6 d后取其中1只斷頸處死，取其脾(本模型特點為動物形成巨脾)，放入玻璃研磨器按1∶3(g/mL)比例加入適量生理鹽水研磨成細胞懸液后，接種于615小鼠的右前肢腋皮下,0.2 mL/只。此種動物模型接種部位不形成腫瘤，而是形成白血病模型。接種后，對照組動物7 d左右陸續(xù)出現(xiàn)死亡，觀察實驗組動物給藥后生存期是否延長，以評價藥效[1]。2)C57小鼠Lewis肺癌[2]接種、裸鼠[3]PG的接種:取生長良好的7～10 d 的實體瘤荷瘤鼠2只，剔除包膜和壞死部分，將完好的瘤塊置于玻璃勻漿器內研磨，與生理鹽水1∶3(g/mL)制成勻漿，調整細胞數(shù)為5×106/mL，制成細胞懸液，接種于小鼠的右前肢腋皮下，0.2 mL/只(含細胞數(shù)1×106/mL)。整個過程均在無菌條件下操作。

2.2 給藥方案 預實驗時，采用常規(guī)給藥方法，連續(xù)給藥7 d，實驗結束時，顯示出較高的抑瘤率及病死率，遂決定采用大劑量突擊療法，即高劑量給藥3 d，中劑量2 d，低劑量1 d。經(jīng)預試后，獲得較滿意結果。給藥劑量：預實驗結果顯示，樣品LD50在4～5 g/kg之間，設其1/5 LD50為給藥劑量，高劑量組以1 g/(kg·d)連續(xù)3 d，中劑量組以1 g/(kg·d)連續(xù)2 d，低劑量組以1 g/(kg·d)僅給1 d。共分5組：空白對照組(生理鹽水，灌胃)、環(huán)磷酰胺對照組(50 mg/kg,0.1 mL/10 g,腹腔注射)、樣品高劑量組、中劑量組和低劑量組(灌胃)。于腫瘤細胞接種后24 h開始給藥。

抗腫瘤活性分別以腫瘤抑制率和動物生命延長率評價。[4]

3 結果

3.1 抗腫瘤1號對實體型腫瘤的抑瘤作用 實驗結束時，對照組平均瘤質量在1 g以上，最小瘤重均大于0.4 g。環(huán)磷酰胺組和抗腫瘤1號給藥組平均瘤質量和抑瘤率與陰性對照組比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)。

抗腫瘤1號的抑瘤作用見表1、2。Lewis肺癌抑瘤作用可達61.98%，PG抑瘤作用可達73.54%。

表1 Lewis肺癌抑瘤作用

注：與空白對照組比較，#P<0.05，##P<0.01

表2 裸鼠PG抑瘤作用

注：與空白對照組比較，#P<0.05，##P<0.01

3.2 對白血病小鼠的作用 抗腫瘤1號能明顯提高對615小鼠的生存質量,延長615小鼠的帶瘤生存時間，生命延長率可達到68.42%，見表3。

表3 L615白血病小鼠生命延長作用(n=10)

注：與空白對照組比較，#P<0.05，###P<0.001

4 討論

各組動物移植瘤生長情況良好，試驗模型成立?？鼓[瘤Ⅰ號具有明顯的體內抗腫瘤活性。而且，該樣品不論是對荷瘤鼠的抑瘤率還是對鼠的生命延長率均顯示出抗腫瘤活性。隨著給藥劑量的增加，實體瘤的抑瘤率隨之增加，腹水瘤的存活時間延長，體現(xiàn)出一定的量效關系。

[1]Yihong Huang,Bing Du,Kailin Xu etd.同基因混合G-CSF動員的異基因骨髓移植物誘導的抗白血病效應[J].中德臨床腫瘤學雜志(英文版),2008,7(9):549-554.

[2]陳學彰,田華琴,黃志慶,等.肺積方對Lewis肺癌小鼠抑瘤率及EGFR、TNF-α表達的實驗研究[J].中西醫(yī)結合研究,2013,5(1):17-20.

[3]顧丹琳,舒琦瑾,王彬彬.南方紅豆杉水提物對肺癌裸鼠抑瘤作用及生活質量影響的研究[J].浙江中醫(yī)雜志,2013,48(11):853-854.

[4]胡釗,李永生,趙誠.粉防己堿聯(lián)合阿霉素對人膀胱癌BIU-87/ADM細胞裸鼠移植瘤抑瘤率影響的研究[J].現(xiàn)代泌尿生殖腫瘤雜志,2013,5(1):41-44.