李瑞生，李曉娟，湯紫榮，姜棋予，李 蓓，侯 俊

(1. 解放軍第302醫(yī)院實(shí)驗(yàn)技術(shù)研究保障中心，北京 100039；2. 解放軍第302醫(yī)院感染控制科，北京 100039)

血液生理生化指標(biāo)是反映實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是否健康和建立標(biāo)準(zhǔn)化動(dòng)物模型的一項(xiàng)重要內(nèi)容，也是探討發(fā)病機(jī)制、生理學(xué)、藥理學(xué)和毒理學(xué)等實(shí)驗(yàn)研究的重要參考值[1]。尤其對(duì)于基因突變、轉(zhuǎn)基因和基因敲除等所建立的動(dòng)物模型，其血液生理生化指標(biāo)的檢測(cè)顯得尤為重要[2]。2012年本實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)了一只被毛卷曲的BALB/c自發(fā)突變小鼠，通過近交繁殖已建立了純系突變卷毛小鼠，為了探討B(tài)ALB/c突變卷毛小鼠其血液學(xué)指標(biāo)與正常BALB/c小鼠是否發(fā)生了變異。本實(shí)驗(yàn)選取6周齡的BALB/c突變卷毛小鼠和正常小鼠，對(duì)其血液學(xué)的8項(xiàng)生理指標(biāo)和15項(xiàng)血清電解質(zhì)及生化指標(biāo)進(jìn)行了檢測(cè)分析，以期了解BALB/c突變卷毛小鼠的血液學(xué)指標(biāo)與正常小鼠之間是否存在差異，旨在探討突變基因?qū)π∈蟮难簩W(xué)指標(biāo)是否產(chǎn)生影響，也為今后建立和應(yīng)用BALB/c突變卷毛小鼠模型提供理論參考。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

BALB/c突變卷毛小鼠來源于本實(shí)驗(yàn)室自繁(全同胞兄妹交配)，選擇6周齡BALB/c突變卷毛小鼠20只(雌雄各半)；同時(shí)選擇6周齡正常BALB/c小鼠20只(雌雄各半)，其來源于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)【SCXK(軍)2012-0004】，本實(shí)驗(yàn)室具有SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證書【SYXK(軍)2012-0010】。

1.2 儀器設(shè)備

7020全自動(dòng)生化儀(日本日立公司)；KX-21N全自動(dòng)血球分析儀(日本Sysmex公司)；5415R離心機(jī)(Eppendoff公司)。

1.3 方法

1.3.1 血液生理指標(biāo)測(cè)定

采集小鼠尾血20 μL，用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀檢測(cè)以下血常規(guī)指標(biāo)：紅細(xì)胞(RBC)、白細(xì)胞(WBC)、血紅蛋白濃度(HGB)、血細(xì)胞壓積(HCT)、平均血細(xì)胞容積(MCV)、平均血細(xì)胞血紅蛋白量(MCH)、平均血細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)、血小板計(jì)數(shù)(PLT)等8項(xiàng)指標(biāo)。

1.3.2 血清生化與電解質(zhì)指標(biāo)測(cè)定

小鼠于采血前禁食12 h，利用眼球摘除法采血1 mL于EP管中，室溫靜置30 min，3000 r/min離心10 min，分離血清。用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)以下生化指標(biāo)：總蛋白(TP)、球蛋白(GLO)、白蛋白(ALB)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、乳酸脫氫酶(LDH)、葡萄糖(GLU)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)；同時(shí)檢測(cè)血清中鉀、鈉、氯、離子鈣、磷等電解質(zhì)指標(biāo)。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，應(yīng)用配對(duì)t檢驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行性別及組間分析比較。

2 結(jié)果

2.1 BALB/c突變卷毛小鼠與正常小鼠血液生理指標(biāo)分析

兩組小鼠生理指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果顯示：BALB/c突變卷毛小鼠WBC、MCV和PLT的性別及組間結(jié)果與正常小鼠具有顯著性差異(P<0.05，P<0.01)，BALB/c突變卷毛小鼠MCHC的雄性及組間結(jié)果與正常小鼠具有顯著性差異(P<0.01)，其它各項(xiàng)指標(biāo)無差異(表1)。

表1 BALB/c突變卷毛小鼠與正常小鼠血液生理指標(biāo)的比較

2.2 BALB/c突變卷毛小鼠與正常小鼠血清電解質(zhì)指標(biāo)分析

兩組小鼠血清電解質(zhì)指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果顯示：BALB/c突變卷毛小鼠Na+的雌性和組間、K+的雌性以及Cl—雌性和組間的結(jié)果與正常小鼠具有顯著性差異(P<0.05，P<0.01)，其它各項(xiàng)指標(biāo)無差異(表2)。

2.3 BALB/c突變卷毛小鼠與正常小鼠血清生化指標(biāo)分析

兩組小鼠血清生化指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果顯示：BALB/c突變卷毛小鼠ALT的雄性和組間、GLU的雌性和組間、TG的雌性和組間結(jié)果與正常小鼠具有顯著性差異(P<0.05，P<0.01)，其它各項(xiàng)指標(biāo)無差異(表3)。

3 討論

嚙齒類的小鼠最易自發(fā)基因突變，所形成的突變型小鼠為人類各種疾病的研究提供了優(yōu)質(zhì)的模型動(dòng)物[3]。基因突變動(dòng)物不僅會(huì)影響其器官系統(tǒng)和外觀表征發(fā)生改變，而且還會(huì)影響其血液學(xué)指標(biāo)正常范圍值的變動(dòng)，監(jiān)測(cè)突變基因動(dòng)物的血液學(xué)指標(biāo)對(duì)于了解突變系動(dòng)物的血液系統(tǒng)[4]，分析該動(dòng)物的各項(xiàng)功能器官是否造成影響[5]都具有十分重要的指導(dǎo)意義。岳敏等[6]、沈果等[7]、王冬平等[8]和韓凌霞等[9]分別對(duì)小型豬、獼猴、SD大鼠和鴨子等動(dòng)物進(jìn)行了血液生理生化指標(biāo)的測(cè)定，為這些不同品種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的應(yīng)用提供了可靠的血液學(xué)指標(biāo)參考范圍值。而對(duì)于敲基因小鼠[10]、轉(zhuǎn)基因小鼠[11]和突變小鼠[12]血液生理生化指標(biāo)的測(cè)定也愈加受到重視，不僅能夠?yàn)檫@些新型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物提供可靠的血液學(xué)指標(biāo)參考范圍值，而且還能夠分析外來插入和突變的基因是否對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血液系統(tǒng)造成影響。目前對(duì)于BALB/c突變卷毛小鼠的血液學(xué)指標(biāo)的正常參考范圍值還不太清楚。

表3 BALB/c突變卷毛小鼠與正常小鼠血清生化指標(biāo)的比較

因此，本實(shí)驗(yàn)選取6周齡BALB/c突變卷毛小鼠和正常BALB/c小鼠，對(duì)其血液學(xué)的8項(xiàng)生理指標(biāo)和15項(xiàng)血清生化及電解質(zhì)指標(biāo)進(jìn)行了相應(yīng)的測(cè)定分析，結(jié)果顯示BALB/c突變卷毛小鼠的4項(xiàng)血液生理學(xué)指標(biāo)、3項(xiàng)電解質(zhì)指標(biāo)和3項(xiàng)血清生化指標(biāo)與正常小鼠之間存在顯著的差異性，結(jié)果提示突變基因可能對(duì)小鼠的血液系統(tǒng)造成了一定的影響。其中BALB/c突變卷毛小鼠的WBC和PLT均顯著高于正常小鼠，由于血小板具有促進(jìn)血栓形成的作用，而且可以介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，被激活后的血小板通過表達(dá)和釋放炎癥介質(zhì)而誘導(dǎo)白細(xì)胞的炎癥作用[13]。由此可推測(cè)BALB/c突變卷毛小鼠血栓形成和易發(fā)生炎癥反應(yīng)的幾率會(huì)大大高于正常小鼠，此結(jié)果與杜靜等[13]研究IL-10敲基因小鼠血液生理生化發(fā)生的變化相一致。但有關(guān)BALB/c突變卷毛小鼠是否具有易形成血栓和炎癥反應(yīng)等特點(diǎn)還有待進(jìn)一步研究證實(shí)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血液學(xué)指標(biāo)受品系、年齡、性別、營養(yǎng)代謝以及測(cè)定方法、儀器設(shè)備和樣本量等因素的影響[14]，因此上述這些差異性指標(biāo)是否是由于基因突變所造成，還需要今后擴(kuò)大樣本量且對(duì)該突變小鼠血液學(xué)指標(biāo)進(jìn)行有序地動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，才能更加全面地對(duì)其血液學(xué)特性進(jìn)行分析和驗(yàn)證。

綜上所述，BALB/c突變卷毛小鼠和正常BALB/c小鼠的部分血液學(xué)指標(biāo)存在差異，提示突變基因可能對(duì)血液學(xué)指標(biāo)產(chǎn)生一定的影響。此結(jié)果為深入了解BALB/c突變卷毛小鼠的血液學(xué)特性提供了可靠的參數(shù)，也為今后開發(fā)和利用該突變卷毛小鼠模型奠定了堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。

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