張宏梅,崔佰吉,張秀榮 (吉林醫(yī)藥學院藥學院，吉林 吉林 132013)

多潘立酮(Domperidone)為第二代胃腸動力藥，為苯并咪唑類外周D2受體拮抗劑，有促進胃動力和止吐作用[1],使胃排空速率加快，并抑制各種原因所致的惡心、嘔吐。有關物質的控制，一直是化學藥物質量控制的關鍵，有關多潘立酮有關物質的測定的報道也比較多，但是有關物質測定過程中多潘立酮的供試品濃度選擇存在一定的差異性，報道中[2-4]曾采用相當于多潘立酮0.2、0.25 mg/mL，而中國藥典增補版中采用的多潘立酮的濃度為0.5 mg/mL。本研究采用高效液相色譜法進行多潘立酮有關物質的測定，通過測定不同濃度的多潘立酮有關物質，進而考察濃度對于有關物質測定的影響。

1 儀器與試藥

日本島津LC-20A系列高效液相色譜儀，包括在線真空脫氣裝置、二元梯度泵、自動進樣器、二極陣列管檢測器和LC-Solution色譜工作站；CPA225D電子天平(賽多利斯)；MILLIPORE(Synergy185)超純水制備儀；KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器。

甲醇為色譜純，水為超純化水，其他試劑為分析純；多潘立酮(100304-200502中國藥品生物制品檢定所)，氟哌利多(EDQM D3100000,16/12/2009)；多潘立酮片(本實驗室自制)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗

色譜柱：島津 wondaSilTM,C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：甲醇∶0.5%醋酸銨水溶液(67∶33)，檢測波長為280 nm，柱溫30 ℃。多潘立酮和氟哌利多的分離度應大于2.0。

2.2 溶液的制備

取本品的細粉適量，分別配置多潘立酮濃度為5、2.5、1.25、0.9、0.7、0.5、0.2 mg/mL的溶液，作為供試品溶液；分別精密量取各供試品溶液1 mL，置200 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液；取多潘立酮對照品10 mg，氟哌利多對照品15 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為系統(tǒng)適應性溶液。

2.3 專屬性實驗

多潘立酮片為西安楊森制藥有限公司在國內首家生產并銷售，其公布的說明書中包含有所使用的輔料信息為：淀粉、氫化植物油、乳糖、硬脂酸鎂、微晶纖維素、聚維酮K90、預交化淀粉、十二烷基硫酸鈉。本實驗室進行多潘立酮片的處方優(yōu)化，最后選定的輔料為：淀粉、乳糖、硬脂酸鎂、微晶纖維素、聚維酮K30、十二烷基硫酸鈉。

通過破壞性試驗研究，本實驗的色譜條件可以對各種破壞條件下產生的雜質進行有效的測定，同時輔料的破壞性試驗也表明，輔料對于本制劑的有關物質測定沒有影響，系統(tǒng)適應性實驗符合要求。

2.4 有關物質的測定

2.4.1 進樣體積的影響

取濃度為5 mg/mL的供試品及其自身對照溶液，采用自動進樣器進樣，進樣體積分別為5、10、20、30 μL，注入液相色譜儀，記錄主成分峰保留時間2倍的色譜圖。不同進樣體積的樣品在不同的保留時間出現(xiàn)不同的雜質，經過數(shù)據(jù)處理，共有10個雜質峰被檢出，有關物質含量見表1，變化趨勢圖見圖1。由實驗結果可知，隨著進樣體積的增加，有關物質的含量也有所增加，但是增加的幅度不是很大，在進樣量20、30 μL時，有關物質的百分含量差異不是特別明顯。同時對比不同進樣體積下的不同色譜峰可以發(fā)現(xiàn)，進樣體積增加后，有關物質明顯增加的色譜峰為相對保留時間0.372、1.133的色譜峰，其增加的百分率分別為198.32%和99.68%。可見隨著進樣量的增加主要增加的有關物質為以上2個色譜峰。

2.4.2 濃度對有關物質的影響

精密量取濃度為5、2.5、1.25、0.9、0.7、0.5、0.2 mg/mL的溶液及其自身對照溶液20 μL，注入液相色譜儀，記錄主成分峰保留時間2倍的色譜圖。經過數(shù)據(jù)處理后，各個濃度項下的有關物質情況見表2，有關物質檢查結果分布見圖2。由實驗結果可知，當多潘立酮的濃度為2.5、5.0 mg/mL時出現(xiàn)雜質峰9個，為所有濃度中出現(xiàn)雜質峰數(shù)最多的，同時從趨勢圖上可以看出，不同濃度的多潘立酮對于有關物質的測定影響不是非常明顯，在本研究所選定的濃度范圍內，2.5 mg/mL為雜質峰檢測數(shù)量最多的一個濃度點，可以作為多潘立酮有關物質檢查的參考依據(jù)。

表 1 不同進樣體積有關物質結果表(μL)

圖 1 不同進樣體積有關物質變化圖

表 2 不同濃度有關物質檢查結果表(mg/mL)

圖 2 不用濃度有關物質檢查結果分布

3 討 論

有關物質檢查過程中，分別采用不同的進樣體積和不同的進樣濃度進行考察，其實質均是改變單次進樣量的考察。高效液相色譜儀可以提供不同的進樣體積，最大可以達到2 000 μL的進樣量，但是過高的進樣量會給色譜柱產生較大的負荷，所以尋求合適的進樣量、還能滿足測定的需要尤為關鍵。本研究分別采用5、10、20、30 μL作為進樣體積，常規(guī)檢測的進樣體積一般為10 μL和20 μL，其他體積采用的相對比較少，從實驗結果也可以看出，20 μL和30 μL的進樣體積在檢測結果上沒有明顯的差異，所以沒有再進行30 μL以上體積的檢測，20 μL的檢測體積能夠滿足檢測的需要。

數(shù)據(jù)處理過程中發(fā)現(xiàn)，在相對保留時間為0.170的位置，有一色譜峰，其峰面積并不隨著進樣體積和進樣濃度的改變而發(fā)生明顯變化，單獨進行溶劑檢測后也發(fā)現(xiàn)這一色譜峰的存在，所以在數(shù)據(jù)處理過程中舍棄本研究判定的溶劑峰。

供試品溶液的濃度過高，也就是說進樣量過大，會造成主峰嚴重拖尾、裂縫、柱超載等問題，如果設定過低則會出現(xiàn)靈敏度低，有關物質無法檢測到的現(xiàn)象[5-6]。從本研究也可以發(fā)現(xiàn)，當檢測濃度比較低的條件下，檢測出的雜質峰相對比較少，本研究采用了最高的濃度為5.0 mg/mL，這個濃度與BP2010中多潘立酮片的有關濃度檢查供試品溶液的濃度是一致的，但是色譜系統(tǒng)上存在較大的差異，所以檢測結果的對比上還需要進一步的研究。

本研究考察了不同的濃度對有關物質的影響，所檢測結果均小于1.0%，但是不同的進樣量檢查的結果還是有很大的差異。然而這些在1.0%范圍內的差異并不能證明濃度越高就是最優(yōu)檢測條件的選擇依據(jù)，還需要進一步確認增加幅度比較大的幾個色譜峰的結構確認，以及進一步的藥理毒理學方面的研究，最終確定每一個雜質對制劑的影響，為制劑的安全評價和質量控制提供理論依據(jù)。

參考文獻：

[1] Brogden R N,Carmine A A,Heel R C,et al.Domperidone.A review of it s pharmacological activity,pharmacokinetics and therapeutic efficacy in the sympt omatic treatment of chronic dyspepsia an d as an antiemetic[J].Drugs,1982,24(5):360-400.

[2] 張春暉,陳曉梅,張 烜,等.HPLC法測定多潘立酮凝膠劑的含量及有關物質檢查[J].中國藥事,2007,21(12):988-990.

[3] 周定君,徐麗平,章歡明.高效液相色譜法測定多潘立酮口腔崩解片的有關物質[J].中國現(xiàn)代應用藥學,2006,23(2):165-166.

[4] 董 煜,王 冬,錢小平.HPLC法測定多潘立酮口服混懸液的含量及有關物質[J].中國藥品標準,2011,12(4):274-276.

[5] 謝沐風.如何建立高效液相色譜法測定有關物質的方法[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志,2007,38(1):45-48.

[6] 謝沐風,羅霞萍,陳亞美.如何建立HPLC法測定有關物質的方法[J].藥物分析雜志,2002,3(6):6-10.