葉婉婷，王瑩瑩，胡 園，陳 露，朱小龍，劉 興，羅德生

(1.湖北科技學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)2010級(jí)本科，湖北 咸寧 437100；2.湖北科技學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院)

中藥五加皮辛、苦、性溫，入肝腎而祛風(fēng)理濕，壯骨強(qiáng)筋，為損傷及風(fēng)痹專藥[1]。且五加皮分南五加皮和北五加皮，它們都是臨床上使用的中藥飲片，他們的藥用部位、藥材性狀、藥用作用存在一些相似，所以很容易造成混淆，甚至?xí)霈F(xiàn)代用的情況發(fā)生。其中因?yàn)楸蔽寮悠ぞ哂幸欢ǖ亩拘?，所以為了保證實(shí)驗(yàn)的安全、有效，本研究采用的是南五加皮[2]。南五加皮具有抗缺氧、提高應(yīng)激的作用，抗心肌缺血、抗氧化、改善血液流變學(xué)的作用，以及抗炎、鎮(zhèn)痛、提高免疫力的作用[3]，而在化學(xué)性肝損害中的藥理作用尚未見(jiàn)報(bào)道。本文研究南五加皮煎劑對(duì)小鼠四氯化碳(CCl4)肝損傷的保護(hù)作用。

1 材料和方法

1.1 藥材與試劑

南五加皮由湖北省咸寧市中醫(yī)醫(yī)院提供，ALT和MDA試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所，葡萄糖試劑盒購(gòu)自中生北控生物科技股份有限公司，CCl4，進(jìn)口分裝，購(gòu)自湖北大學(xué)化工廠。

1.2 儀器

AEL-200電子分析天平、TP-5000A電子秤均為湘儀天平儀器廠產(chǎn)品；721-E型分光光度計(jì)，上海光譜儀器有限公司產(chǎn)品。

1.3 動(dòng)物及分組

健康小白鼠60只(湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，動(dòng)物品系：KM，等級(jí)：SPF級(jí))，雌雄不拘，體質(zhì)量18～22g。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為5組，即模型對(duì)照組(模型組)、正常對(duì)照組(對(duì)照組)和南五加皮小、中、大3個(gè)不同劑量保護(hù)組，每組12只。不同劑量保護(hù)組的生藥用量分別為0.40g/kg、0.80g/kg、1.60g/kg，分別相當(dāng)于人體推薦攝入量的5倍、10倍、20倍。

1.4 方法

分別稱取2.5、5、10 g南五加皮生藥，用中藥煎劑法制備煎劑，最后分別定容至50ml，作為小、中、大劑量組受試物，滅菌后冷藏備用。

各劑量組小白鼠用含不同濃度的南五加皮煎劑，模型組和對(duì)照組小白鼠用生理鹽水，按每天0.1ml/10g經(jīng)口灌胃，1次/d，連續(xù)12d。于第12d，除對(duì)照組小白鼠按2ml/kg滅菌生理鹽水腹腔注射外，模型組和南五加皮各保護(hù)組按文獻(xiàn)[4]給予CCl4，建立急性化學(xué)性肝損傷模型。24h后，按文獻(xiàn)[5]方法，自小白鼠后眼眶靜脈叢連續(xù)穿刺取各組動(dòng)物血液，及時(shí)分離出血漿備用。采血后立即斷頸處死小白鼠，稱取動(dòng)物體質(zhì)量，以備計(jì)算肝臟系數(shù)。打開(kāi)腹腔，分離出肝臟，生理鹽水洗去肝表面血液，濾紙吸干水分稱重。取肝臟組織測(cè)肝糖原含量和病理學(xué)檢查。

1.5 檢測(cè)指標(biāo)

①ALT活性和MDA含量按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，肝糖原含量測(cè)定按文獻(xiàn)方法[6]操作；②肝臟系數(shù)的計(jì)算：肝臟重量/體質(zhì)量 ；③肝組織病理學(xué)檢查：按常規(guī)固定，石蠟包埋，超薄切片(厚約5mm),HE染色，光鏡下觀察。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 動(dòng)物的一般表現(xiàn)

造模前，各組小白鼠一般情況都好：飲食正常，運(yùn)動(dòng)快速活潑有力，被毛濃密而有光澤，眼睛鮮紅而有精神。造模后，對(duì)照組小白鼠的一般狀況同前，藥物保護(hù)組小白鼠的飲食量稍有減少，活潑性稍差，毛發(fā)光澤；模型組小白鼠，注射CCl4后的當(dāng)天晚上死亡1只，多只小白鼠步態(tài)不穩(wěn)，活動(dòng)度差，被毛緊貼身體、粗亂蓬松。

2.2 南五加皮煎劑對(duì)CCl4致小白鼠急性肝損傷血漿ALT活性和MDA含量的影響

模型組動(dòng)物的血漿ALT活性和MDA含量均非常顯著地高于對(duì)照組(P<0.01)，表明造模成功。各保護(hù)組中，除小劑量組小白鼠血漿ALT活性顯著高于對(duì)照組外(P<0.05)，其他組動(dòng)物的這兩項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，提示南五加皮煎劑對(duì)CCl4致小白鼠急性肝損傷有良好的保護(hù)作用，見(jiàn)表1。

表1 南五加皮煎劑對(duì)小白鼠血漿ALT活性和MDA含量的影響

2.3 南五加皮煎劑對(duì)肝組織肝糖原及肝臟系數(shù)的影響

CCl4能顯著降低動(dòng)物肝糖原的含量，使肝臟系數(shù)增加，而南五加皮煎劑能提高肝糖原的含量，降低肝臟系數(shù)，并有顯著的量效關(guān)系。由此說(shuō)明，南五加皮煎劑對(duì)肝臟有保護(hù)作用，見(jiàn)表2。

表2 南五加皮煎劑對(duì)肝組織肝糖原及肝臟系數(shù)的影響

2.4 肝組織病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果

鏡下可見(jiàn)正常組小白鼠的肝小葉結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞索結(jié)構(gòu)清晰可辨。模型組動(dòng)物的肝細(xì)胞氣泡樣變，細(xì)胞境界不清，細(xì)胞索解離，有明顯的點(diǎn)、灶狀壞死，有的甚至呈彌漫性壞死，淋巴細(xì)胞，單核細(xì)胞廣泛浸潤(rùn)。藥物處理組小白鼠的肝組織損傷明顯減輕，小劑量組的肝細(xì)胞變性較明顯，有點(diǎn)狀或帶狀壞死，間質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)，中、大劑量組的組織細(xì)胞變性很輕，無(wú)明顯帶狀壞死，炎性細(xì)胞局限于匯管區(qū)，細(xì)胞境界清晰。

3 討 論

給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物注射CCl4是復(fù)制急性化學(xué)性肝損傷動(dòng)物模型的常用經(jīng)典方法，重復(fù)性好。自由基及其自由基引發(fā)的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)是CCl4誘導(dǎo)動(dòng)物急性肝損傷的重要因素，其機(jī)制是：CCl4進(jìn)人體內(nèi)后，在肝細(xì)胞中經(jīng)細(xì)胞色素P450代謝，生成活潑的三氯甲基自由基(·CCl3)和氯自由基(·Cl)，這些自由基攻擊肝細(xì)胞膜磷脂分子上的不飽和脂酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，或與肝微粒體脂質(zhì)和蛋白質(zhì)發(fā)生共價(jià)交聯(lián)，從而破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，最終導(dǎo)致細(xì)胞及器官功能的喪失[7，8]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型組動(dòng)物的血漿ALT活性、MDA含量及肝臟系數(shù)均非常顯著地高于對(duì)照組，而肝糖原含量卻非常顯著地低于對(duì)照組，這些都反映造模成功。南五加皮煎劑各劑量組的血漿酶活性、MDA含量、肝臟系數(shù)均非常顯著地低于模型組，肝糖原含量非常顯著地高于模型組，這些指標(biāo)與對(duì)照組比較，其差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。肝組織病理學(xué)改變也能說(shuō)明南五加皮煎劑對(duì)CCl4性肝損傷有保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能是通過(guò)抑制自由基-脂質(zhì)過(guò)氧化作用有關(guān)。結(jié)果提示，中藥南五加皮可作為預(yù)防化學(xué)性肝損害的有效藥物應(yīng)用于臨床。

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