焦 銘，孫 雪，李 筆，吳 喆**

(1.湖北科技學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，湖北 咸寧 437100；2.湖北科技學(xué)院2010級(jí)臨床醫(yī)學(xué)本科)

杜仲為杜仲科植物杜仲(Eucommia ulmoides Oliver)的干燥樹皮，是中國名貴滋補(bǔ)藥材。杜仲具有補(bǔ)肝腎，強(qiáng)筋骨，清除體內(nèi)垃圾，加強(qiáng)人體細(xì)胞物質(zhì)代謝，防止肌肉骨骼老化，平衡人體血壓，分解體內(nèi)膽固醇，降低體內(nèi)脂肪，恢復(fù)血管彈性，利尿清熱，廣譜抗菌，興奮中樞神經(jīng)，提高白血球數(shù)量，增強(qiáng)人體免疫力等顯著功效[1]。人參為五加科人參屬植物，是馳名中外、老幼皆知的名貴藥材。李時(shí)珍在《本草綱目》中對(duì)人參極為推崇，認(rèn)為它能“治男婦一切虛癥”[2]。但有關(guān)杜仲、人參及其合劑對(duì)SOD和GSH-Px的影響目前研究較少。本文利用D-半乳糖誘導(dǎo)的衰老小鼠模型，測(cè)定上述藥物對(duì)SOD和GSH-Px活性的影響，旨在為杜仲、人參功能開發(fā)、利用及作用機(jī)制的探討提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

杜仲、人參由咸寧市藥材公司提供，均制成含生藥濃度為6.38 mg/ml的水煎劑(合劑中兩味藥材比例為杜仲 ∶人參=2∶1)，4℃冰箱保存。SOD、GSH-Px試劑盒(南京建成生物制品研究所)、D-半乳糖(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，AR)。

昆明種小白鼠60只，雌雄各半，體質(zhì)量25～30 g，湖北省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK(鄂)2003-0005，購進(jìn)后適應(yīng)2 d。

1.2 儀器

JY 10001電子天平(上海精密科技儀器有限公司)，HHS-12-1恒溫水浴鍋(南京博古醫(yī)療器械廠)，PL 2003型電子天平(上海特勒-托利多公司)，UV-2550 Probe型紫外可見分光光度計(jì)(Shimadzu公司)。

1.3 動(dòng)物分組與給藥

將小鼠分為6組，每組10只。分別為：①衰老模型組：每日背部皮下注射D-半乳糖100 mg/kg，同時(shí)每日用與Vit E組等量生理鹽水灌胃；②杜仲組：按上述劑量每日背部皮下注射D-半乳糖，同時(shí)每日灌服杜仲水煎劑100 mg/kg；③人參組：按上述劑量每日背部皮下注射D-半乳糖，同時(shí)每日灌服人參水煎劑50 mg/kg；④合劑組：按上述劑量每日背部皮下注射D-半乳糖，同時(shí)每日灌服合劑水煎劑50 mg/kg；⑤Vit E組：按上述劑量每日背部皮下注射D-半乳糖，同時(shí)每日灌服Vit E 100 mg/kg；⑥空白對(duì)照組：按上述劑量每日背部皮下注射生理鹽水，同時(shí)每日用與Vit E組等量生理鹽水灌胃。各組小鼠自由進(jìn)食和飲水，持續(xù)4周。

1.4 樣品制備

最后一次給藥后，禁食不禁水12 h，眼眶取血，分離血清，并迅速取肝臟，用生理鹽水漂洗，吸干，稱重，用4 °C生理鹽水制成10 %組織勻漿備用。

1.5 指標(biāo)測(cè)定

血清、肝臟組織中的SOD、GSH-Px活性測(cè)定嚴(yán)格按照試劑盒中說明書所示方法進(jìn)行。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 杜仲、人參對(duì)小鼠血清和肝臟SOD、GSH-Px活性的影響

與空白對(duì)照組相比，衰老組SOD、GSH-Px活性都有不同程度下降，說明其抗氧化能力下降；與衰老組相比，Vit E組和藥物水煎劑組均能增加小鼠血清和肝臟SOD、GSH-Px的活性，并具備一定量效關(guān)系。結(jié)果見表1。

表1 杜仲、人參對(duì)小鼠血清和肝臟SOD、GSH-Px活性的影響(n=10，U/ml)

2.2 杜仲、人參及其合劑提高小鼠血清、肝臟SOD活性的差異

相比衰老組，杜仲、人參及其合劑均能顯著提高小鼠血清、肝臟中SOD的活力，其中合劑能發(fā)揮其配伍功效，使活力提高更為明顯。結(jié)果見圖1。

圖1 藥物提高小鼠血清、肝臟SOD活性比較

2.3 杜仲、人參及其合劑提高小鼠血清、肝臟GSH-Px活性的差異

相比衰老組，杜仲、人參及其合劑均能顯著提高小鼠血清、肝臟中GSH-Px的活力，其中合劑能發(fā)揮其配伍功效，使活力提高更為明顯。結(jié)果見圖2。

圖2 藥物提高小鼠血清、肝臟GSH-Px活性比較

3 討 論

自由基與一些疾病以及人體的衰老是相關(guān)的，而機(jī)體對(duì)體內(nèi)自由基的清除主要依靠某些酶類，包括超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)等。隨年齡增長，機(jī)體清除自由基的能力也相應(yīng)降低，自由基產(chǎn)生和清除的平衡被打破，造成機(jī)體衰老加速[3]。所以，機(jī)體內(nèi)SOD和GSH-Px活力大小可以反映機(jī)體清除自由基的能力。

D-半乳糖衰老模型在國內(nèi)外是用于衰老機(jī)制、抗氧化性和抗衰老藥物研究的最常用病理模型[4]。通過一定時(shí)間的連續(xù)注射D-半乳糖，造成機(jī)體代謝紊亂，最終引起機(jī)體衰老。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)，杜仲、人參和他們的合劑能夠提高衰老模型小鼠體內(nèi)SOD和GSH-Px的活力，從而具有延緩衰老的功效。杜仲、人參入藥已經(jīng)有2000多年的歷史了，但對(duì)他們的合劑研究卻鮮有報(bào)道，其配伍效應(yīng)的具體機(jī)制還有待挖掘。對(duì)杜仲-人參合劑提高機(jī)體抗氧化性的進(jìn)一步研究，將會(huì)對(duì)了解中藥如何增強(qiáng)機(jī)體免疫力，方劑具體成分之間的互補(bǔ)相成效應(yīng)大有裨益。

[1]胡偉.杜仲化學(xué)成分現(xiàn)代研究[J].中醫(yī)臨床研究，2013，5(9): 113

[2]馬萍，胡榮，王小英，等.中藥人參治療糖尿病的研究進(jìn)展[J].湖北中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，15(1): 63

[3]焦銘，梁毅，李洪濤，等.脲和鹽酸胍誘導(dǎo)過氧化氫酶去折疊的研究[J].化學(xué)學(xué)報(bào)，2003，61(9): 1362

[4]關(guān)萍，郭搏，王惠，等.D-半乳糖促小鼠衰老模型的衰老程度與自然生長鼠齡的比較[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2013，34(1): 71