王東升 李 東

(北京市密云縣中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，北京 密云 101500)

驅(qū)寒抗感顆粒質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)研究

王東升 李 東1

(北京市密云縣中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，北京 密云 101500)

質(zhì)量控制；色譜法，高壓液相；麻黃堿

驅(qū)寒抗感顆粒為純中藥制劑，原處方是北京市密云縣中醫(yī)醫(yī)院臨床驗(yàn)方，后經(jīng)化裁而成。全方由麻黃、荊芥、苦杏仁、桂枝、甘草等藥材組成，具有散寒解表、祛風(fēng)止咳的功效，主治外感風(fēng)寒表證。該制劑臨床使用后效果良好，且比原湯劑服用量小，服用方便，患者易于接受。為了有效地控制制劑質(zhì)量，保證藥效，經(jīng)過處方分析，我們采用薄層色譜(TLC)法對該制劑中的主要藥物麻黃、桂枝、苦杏仁進(jìn)行了定性鑒別，應(yīng)用高效液相色譜(HPLC)法對麻黃中的主要有效成分鹽酸麻黃堿進(jìn)行了含量測定，以便建立一種科學(xué)準(zhǔn)確且操作簡便的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

1 材 料

1.1 儀器 1200型高效液相色譜儀，美國安捷倫科技公司；AD-2百萬分之一電子天平，美國PerkinElmer公司；H66005超聲波清洗器，無錫市超聲電子設(shè)備廠。

1.2 藥品與試劑 鹽酸麻黃堿、桂皮醛、苦杏仁苷對照品，中國食品藥品檢定研究院，批號分別為：171241-201007、110710-201016、185361-201006；驅(qū)寒抗感顆粒，北京市密云縣中醫(yī)醫(yī)院制劑室自制，批號：20120705，20120707，20120709；水為重蒸水，乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別

2.1.1 麻黃的TLC鑒別[1]取驅(qū)寒抗感顆粒5g，研細(xì)，加適量濃氨水濕潤，再加三氯甲烷50mL，加熱回流1h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤?mL甲醇使溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液；按驅(qū)寒抗感顆粒處方及工藝制備不含麻黃的陰性樣品，同法制成缺麻黃陰性對照溶液；另取鹽酸麻黃堿對照品適量，加甲醇制成含量1mg/mL的溶液，作為對照品溶液。照TCL法試驗(yàn)，分別吸取上述溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-濃氨試液(20∶5∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，于105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同的紅色斑點(diǎn)；陰性對照無干擾。麻黃的TLC見封3，圖1。

2.1.2 苦杏仁的TLC鑒別[1]取驅(qū)寒抗感顆粒5g，研細(xì)，加甲醇50mL，加熱回流30min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤?mL甲醇使溶解，濾過，取濾液作為供試品溶液；按驅(qū)寒抗感顆粒處方及工藝制備不含苦杏仁的陰性樣品，同法制成缺苦杏仁陰性對照溶液；另取苦杏仁苷對照品適量，加甲醇制成含量2mg/mL的溶液，作為對照品溶液。照TCL法試驗(yàn)，分別吸取上述溶液各3μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)5～10℃放置12h的下層溶液作為展開劑，展開，取出，立即用0.8%磷鉬酸的15%硫酸乙醇溶液浸板，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；陰性對照無干擾?？嘈尤实腡LC見封3，圖2。

2.1.3 桂枝的TLC鑒別[1]取驅(qū)寒抗感顆粒5g，研細(xì)，加乙醇25mL，超聲(功率120W，頻率40kHz)處理25min，濾過，濾液作為供試品溶液；按驅(qū)寒抗感顆粒處方及工藝制備不含桂枝的陰性樣品，同法制成缺桂枝陰性對照溶液；另取桂皮醛對照品適量，加乙醇制成含量1μL/mL的溶液，作為對照品溶液。照TCL法試驗(yàn)，分別吸取上述供試品和陰性對照溶液各10μL，對照品溶液2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(17∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液。結(jié)果，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙紅色斑點(diǎn)；陰性對照無干擾。桂枝的TLC見封3，圖3。

2.2 鹽酸麻黃堿的含量測定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：UItimate AQ-C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：乙腈-0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液(含0.2%三乙胺，磷酸調(diào)pH 2．5)(2∶98)；檢測波長：210nm；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min。在此條件下，鹽酸麻黃堿能夠與其他成分很好的分離，供試品中的鹽酸麻黃堿保存時(shí)間與對照品相同，并且陰性對照無干擾。見圖4。

2.2.2 對照品溶液的制備 精確稱取適量鹽酸麻黃堿對照品，加入0.1%鹽酸甲醇溶液制成含量42.30μg/mL的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取驅(qū)風(fēng)抗感顆粒1g，研細(xì)(過5號篩)，精確稱取0.5g，置于50mL具塞量瓶中，加入1.0mL濃氨試液，密閉，使之充分濕潤，加入氯仿40mL，超聲(功率120W，頻率40kHz)處理20min，放置至室溫，氯仿定容，過濾，棄去初濾液。精確量取25mL續(xù)濾液，加入0.1%鹽酸甲醇溶液2mL，搖勻，揮干，殘?jiān)尤?.1%鹽酸甲醇溶液使溶解，移至5mL量瓶中，加入0.1%鹽酸甲醇溶液定容，離心，分取上清液，即得供試品溶液[2-4]。

圖4 鹽酸麻黃堿HPLC圖

2.2.4 陰性對照溶液的制備 按驅(qū)寒抗感顆粒處方及工藝制備不含麻黃的陰性樣品，再按“2.2.3”項(xiàng)下方法制成陰性樣品溶液。

2.2.5 線性關(guān)系考察 取對照品適量，加入0.1%鹽酸甲醇溶液，分別配成8.46、12.69、21.15、42.30、63.45μg/mL的鹽酸麻黃堿對照品溶液，吸取各對照品溶液5μL，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件，依次注入液相色譜儀中進(jìn)行測定。以峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)，對照品溶液進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程Y =2.155×103X+1.613(r=0.999 9，n=5)。結(jié)果，鹽酸麻黃堿進(jìn)樣量在0.0423～0.3173μg范圍內(nèi)與峰面積積分值有良好線性關(guān)系。

2.2.6 精密度試驗(yàn) 取同一鹽酸麻黃堿對照品適量，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件測試，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次5μL。結(jié)果，鹽酸麻黃堿峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)=0.87%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液適量，在室溫下放置0、2、4、6、12、24 h，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣5μL進(jìn)行測定。結(jié)果，RSD=0.83%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號樣品適量，按2.2.3項(xiàng)下方法制成供試品溶液6份，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣5μL進(jìn)行測定。結(jié)果，鹽酸麻黃堿含量的RSD=1.1%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

2.2.9 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取已知鹽酸麻黃堿含量(0.4250mg/g)的同一批次(批號：20120705)樣品6份，每份約0.5g，分別精密加入鹽酸麻黃堿對照品0.1200、0.1200、0.1400、0.1400、0.1600、0.1600mg，按2.2.3項(xiàng)下方法制成供試品溶液，按上述2.2.1項(xiàng)下色譜條件測定含量，并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2.10 樣品含量測定 稱取3批樣品適量，按2.2.3項(xiàng)下方法制成供試品溶液，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件測定，以峰面積外標(biāo)法計(jì)算鹽酸麻黃堿的含量。結(jié)果，3批樣品中鹽酸麻黃堿的含量分別為0.4250、0.4174、0.409 8 mg/g。

3 討 論

在驅(qū)寒抗感顆粒組方中麻黃、苦杏仁、桂枝均為主藥，因此對其進(jìn)行了定性鑒別，且麻黃為君藥，對其有效成分鹽酸麻黃堿的研究較多，檢測方法成熟準(zhǔn)確，故對其進(jìn)行了HPLC含量測定。在對麻黃、苦杏仁、桂枝的定性鑒別中，按2010版《中華人民共和國藥典》即可取得良好結(jié)果。對鹽酸麻黃堿的定量鑒別，我們在參考文獻(xiàn)方法的基礎(chǔ)上，分別用1.44%磷酸溶液、氯仿和堿性甲醇作為提取溶劑，發(fā)現(xiàn)氯仿的提取率最高且峰形理想。經(jīng)方法學(xué)考察表明，本方法操作簡便，準(zhǔn)確性、可靠性、重復(fù)性好，可作為驅(qū)寒抗感顆粒的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版(一部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：300，187，259.

[2]劉睿，王寧，劉志輝.RP-HPLC同時(shí)測定宣肺止咳口服液中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿及苦杏仁苷含量[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17(16)：91-93.

[3]覃忠于.感冒解熱顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].中國中醫(yī)藥科技，2006，13(5)：341-343.

[4]魏萍，張亞鋒，王苑桃.高效液相色譜法測定定喘止咳膠囊中鹽酸麻黃堿含量[J].中國藥業(yè)，2012，21(17)：22-23.

(本文編輯：石 康)

王東升(1975—)，男，主管藥師。從事藥劑科臨床工作。

R943.3

A

1002-2619(2014)11-1701-03

2013-07-05)

1 北京市密云縣藥品檢驗(yàn)所，北京 密云 101500