張俊凱 潘佩玲 吳穎猛

食管鱗癌IGF-1R、EGFR蛋白的表達(dá)及其臨床意義

張俊凱 潘佩玲 吳穎猛

目的 研究IGF-1R、EGFR蛋白在食管鱗癌患者中的表達(dá)情況及其臨床意義。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測50例食管鱗癌患者IGF-1R、EGFR蛋白的表達(dá)情況, 取20例手術(shù)標(biāo)本正常組織作為對照組。結(jié)果 食管鱗癌中IGF-1R蛋白陽性表達(dá)率明顯升高(χ2=28.29, P<0.05), EGFR蛋白陽性表達(dá)率明顯升高(χ2=4.56, P<0.05)。IGF-1R的陽性表達(dá)與食管癌的病理分級有關(guān), 分級越高陽性率越高, 與浸潤深度有關(guān), 侵及深肌層及外膜IGF-1R的表達(dá)明顯高于侵及淺肌層及黏膜的表達(dá), 與TNM分期有關(guān), 分期越晚陽性率越高, 差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組IGF-1R或EGFR的表達(dá)明顯高于非轉(zhuǎn)移組。結(jié)論 初步結(jié)果分析顯示IGF-1R可能與食管鱗癌的病理分級及侵襲、轉(zhuǎn)移有關(guān), EGFR可能與食管鱗癌的轉(zhuǎn)移有關(guān)。

食管癌；IGF-1R蛋白；EGFR蛋白；免疫組織化學(xué)

本文應(yīng)用免疫組化的方法研究IGF-1R和EGFR在食管鱗癌中的異常表達(dá),對食管鱗癌中使用靶向治療具有積極意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 入選50病例本院2009年8月～2011年12月經(jīng)手術(shù)切除食管癌標(biāo)本, 且經(jīng)病理證實均為食管鱗狀細(xì)胞癌, 所有病例術(shù)前均無其他惡性腫瘤或嚴(yán)重內(nèi)科疾病, 術(shù)前均未接受化療、放療及免疫治療。其中男性47例, 女性3例,年齡32~74歲, 平均52.5歲。取20例手術(shù)標(biāo)本正常組織作為對照組, 正常組織取自手術(shù)殘端, 距癌組織3 cm以上。

1.2 試劑及方法 采用免疫組化檢測50例患者及20例正常組織中IGF-1R、EGFR蛋白的表達(dá)情況。標(biāo)本經(jīng)40 g/L甲醛固定, 石蠟包埋, 每塊連續(xù)切取3張4 μm厚的切片,貼附于用生物膠處理的載玻片上, 60℃烤60 min。切片脫蠟至水, 清洗3次。體積分?jǐn)?shù)0.03的H2O2封閉內(nèi)源性過氧化物酶20 min, 清洗3次。切片微波抗原修復(fù)、冷卻、清洗。按說明書滴加抗體, 濕盒4℃過夜。清洗后, 滴加二抗, 37℃30 min。清洗3次。DAB顯色, 蘇木精襯染, 脫水, 封片, 光學(xué)顯微鏡下觀察。

1.3 結(jié)果判斷 以PBS代替一抗作為陰性對照。IGF-1R蛋白表達(dá)陽性為胞膜上出現(xiàn)棕黃色細(xì)顆粒。綜合染色強度及分布范圍進行半定量分析:染色強度陰性為0分, 染色弱但強于陰性對照為1分, 染色清晰為2分, 染色強為3分, 分布范圍評分標(biāo)準(zhǔn):陽性細(xì)胞數(shù)<10%為0分, 10%~30%為1分, 31%~60%為2分, >60%為3分。上述兩種評分相加0~1分為(-), 2分為(+), 3~4分為(++), 5~6分為(+++)。+為陽性表達(dá), ++、+++為過度表達(dá)。操作EGFR蛋白以細(xì)胞膜和細(xì)胞漿染成棕黃色為陽性染色, 細(xì)胞膜或細(xì)胞漿里淡黃(染色弱)、棕黃(中等強度染色)和棕褐色(強陽性)。每張切片隨機觀察10個高倍視野, 按染色強度及陽性細(xì)胞數(shù)分為3級:陰性(-) ,無陽性細(xì)胞；弱陽性(±) ,< 50%細(xì)胞呈弱、中等強度染色,強陽性細(xì)胞數(shù)<30%；陽性(+),≥50 %細(xì)胞呈弱、中等強度陽性細(xì)胞, 強陽性細(xì)胞數(shù)≥30%。其中IGF-1R抗體購自福建邁新公司。EGFR抗體購自北京金菩嘉公司。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 所有統(tǒng)計處理均用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行。計數(shù)資料頻率比較及相關(guān)性分析采用χ2檢驗。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

表1 IGF-1R和EGFR的在食管鱗癌和正常組織中的表達(dá)

表2 IGF-1R和EGFR的表達(dá)與食管鱗癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 結(jié)論

胰島素樣生長因子(IGF)包括IGF-1和IGF-1R, 屬于多肽類家族的成員, 與胰島素約有50%的同源性［1］。IGF-1R主要分布在細(xì)胞膜上, 能促進體外培養(yǎng)細(xì)胞的有絲分裂［2］。細(xì)胞的增生與細(xì)胞膜上IGF-1R的數(shù)目成正比,當(dāng)IGF-1R表達(dá)水平下降或IGF-1R丟失會導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞大量凋亡；相反, IGF-1R表達(dá)水平升高則會抑制細(xì)胞凋亡［3］。Chen［4］研究發(fā)現(xiàn)IGF-1R和EGFR在食管癌細(xì)胞系CE48T/VGH中過度表達(dá)。表皮生長因子受體( EGFR)與其配體EGF或TGF-α結(jié)合可激活受體本身的酪氨酸蛋白激酶活性, 進一步激活信號傳導(dǎo)系統(tǒng), 刺激細(xì)胞生長增殖。日本、美國和法國的研究資料表明,食管鱗癌細(xì)胞系EGFR 基因擴增率為8%~30%［5］。

國內(nèi)吳慧等研究結(jié)果示, 食管鱗癌組織中IGF-1R的陽性表達(dá)率明顯高于正常組織, 并且在浸潤深層的癌組織中陽性表達(dá)率明顯高于淺層組, 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)率明顯高于非轉(zhuǎn)移組, 兩者相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義［6］。Imsumran［7］研究100例外科手術(shù)切除的食管鱗癌患者, 使用免疫組化的方法檢測IGF-IR和IGF-II配體的表達(dá)和預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果提示IGF-IR和IGF-II蛋白分別在60%和50%的食管鱗癌標(biāo)本中有表達(dá)陽性, 而且和腫瘤的浸潤深度、轉(zhuǎn)移、分期較晚、復(fù)發(fā)等有關(guān)聯(lián)［7］。Carneiro 等［8］報道30例食管鱗癌患者中19例顯示EGFR強陽性表達(dá)( 免疫染色為3+), 其中12例有基因擴增的現(xiàn)象, 另外11例患者中, 僅2例基因擴增, EGFR過表達(dá)與基因擴增發(fā)生一致。

本研究結(jié)果中, IGF-1R和EGFR在食管鱗癌組織中的表達(dá)高于在正常食管黏膜上皮中的表達(dá), 差異有統(tǒng)計學(xué)意義。本研究還發(fā)現(xiàn), IGF-1的陽性表達(dá)與食管癌的病理分級有關(guān),分級越高陽性率越高, 與浸潤深度有關(guān), 侵及深肌層及外膜IGF-1的表達(dá)明顯高于侵及淺肌層及黏膜的表達(dá), 與TNM分期有關(guān), I期、Ⅱ期、IIIA和B期, 分期越晚陽性率越高, 差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。說明IGF-1可能參與了食管癌的病理分化及侵襲、進展。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組IGF-1R或EGFR的表達(dá)明顯高于非轉(zhuǎn)移組, 提示IGF-1與EGFR可能參與了食管癌的淋巴道轉(zhuǎn)移。

綜上所述, 本研究提示IGF-1R和EGFR在食管鱗癌的異常表達(dá)可成為食管鱗癌的重要生物學(xué)指標(biāo), 由于本研究樣本例數(shù)較少, 關(guān)于IGF-1R和EGFR的蛋白表達(dá)是否為影響食管鱗癌預(yù)后的獨立危險因素, 還有待進一步研究。

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Expression and significance of IGF-1R and EGFR protein in esophageal squamous carcinoma

ZHANG Jun-kai, PAN Pei-ling, WU Ying-meng.
Department of Oncology, People's Hospital of Zhongshan, Zhongshan 528403,China

Objective To investigate the expression of IGF Type 1 Receptor protein and EGFR protein in esophageal squamous carcinoma patients and its clinical significance.Methods The expressions of IGF-1R and EGFR protein were detected in 50 patients with esophageal squamous carcinoma, 20 cases of normal esophageal tissue by SP immunohistochemistry method.Results The positive rate of IGF-1R protein was markedly higher in esophageal squamous carcinoma than in normal esophageal tissue.(χ2=28.29, P=0.032).The positive rate of EGFR protein was also higher.(χ2=4.56, P<0.05).Close correlation was found on the expression of IGF-1R between pathological grade of esophageal squamous carcinoma,the invasion of tumor and TNM stages.Difference was statistically significant.The expression of IGF-1R or EGFR was higher in lymph node metastasis positive patients than that in negative patients.Conclusion The expression of IGF-1R protein has some relationship with the pathological grade, invasion, metastasis and esophageal squamous carcinoma.The expression of IGF-1R protein has some relevance with the metastasis of esophageal squamous carcinoma．

Esophageal carcinoma; IGF Type 1 Receptor protein; EGFR protein; Immunohistochemistry

528403 中山市人民醫(yī)院化療科