黃偉 黃靜 王廣寧 王玨 邸晶 張玉

·論著·

地塞米松對(duì)人顆粒脂肪裸鼠移植成活的影響

黃偉 黃靜 王廣寧 王玨 邸晶 張玉

目的 探討地塞米松對(duì)自體脂肪顆粒移植成活率、脂肪纖維化及壞死程度的影響。方法 將抽脂獲得的顆粒脂肪組織經(jīng)洗滌純化后分為兩組, 實(shí)驗(yàn)組(A組)加入地塞米松, 對(duì)照組(B組)不加地塞米松, 只加入同等體積的生理鹽水, 將經(jīng)過不同處理的兩組脂肪分別移植于裸鼠背部皮下, 3個(gè)月后取出裸鼠皮下的脂肪組織, 測(cè)量其重量, 計(jì)算其成活率, 并進(jìn)行HE染色測(cè)定脂肪的囊腔數(shù),評(píng)價(jià)其纖維化及壞死程度。結(jié)果 濕重測(cè)定結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組脂肪顆粒注射移植的成活率(19.77±2.22)%高于對(duì)照組(12.80±1.73)%, 兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。HE染色結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組脂肪的囊腔數(shù)(209.68±16.74)顯著高于對(duì)照組(11.72±1.11), 兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論 地塞米松可以提高顆粒脂肪移植后的成活率, 并能有效降低注射脂肪的纖維化和壞死程度。

地塞米松；顆粒脂肪注射；成活率

自體脂肪顆粒移植在整形外科領(lǐng)域應(yīng)用已久, 經(jīng)常用于治療面部軟組織缺失導(dǎo)致的凹陷畸形或是面部美容手術(shù), 但人體脂肪顆粒注射后吸收率較高, 可達(dá)30%~40%, 對(duì)于較大面積的面部凹陷, 吸收率可達(dá)50%［1］, 嚴(yán)重影響和限制了其在整形美容領(lǐng)域的應(yīng)用。為提高其成活率, 本研究采用裸鼠作為動(dòng)物模型探討地塞米松促進(jìn)顆粒脂肪注射移植的效果。作者將臨床抽脂獲得的顆粒脂肪經(jīng)洗滌、純化等處理后, 分為地塞米松處理組(實(shí)驗(yàn)組)和非處理組(對(duì)照組), 移植到裸鼠背部皮下, 觀察其移植效果。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 4~6周雄性裸鼠 (為單純T淋巴細(xì)胞缺陷BALB/C-null)8只, 體重15~18 g (SPF級(jí))。

1.2 材料和儀器 地塞米松(Sigma公司), 4%多聚甲醛(sigma), 0.9%生理鹽水(上海試劑廠), 梯度酒精(上海試劑廠), 二甲苯(上海試劑廠), 蘇木精(上海試劑廠), 伊紅(上海試劑廠), 中性樹脂(上海試劑廠), 精密天平秤(Shangping, China), 倒置相差顯微鏡(Olympus, Japan), 超凈工作臺(tái)(蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司), 冰箱(海爾, 中國(guó)), 50 ml離心管(FALCON Franklin Lakes NT’U.S.A)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 脂肪移植模型制備及分組 脂肪取自腹部抽脂患者, 將抽取的脂肪用生理鹽水反復(fù)沖洗, 組織剪剪碎獲得顆粒脂肪。

脂肪體積的計(jì)算方法為:將沖洗、過濾后的脂肪顆粒放入標(biāo)記好液面的5 ml注射器中, 抽吸脂肪顆粒, 使液面恰好上升0.3 m1, 即獲得0.3 ml體積的脂肪組織, 0.3 ml脂肪組織濕重約為270 mg。實(shí)驗(yàn)組(A組)將顆粒脂肪浸入含地塞米松5 mg的100 ml NS中, 10 min后用16號(hào)針頭注射于裸鼠背部皮下；對(duì)照組(B組)將顆粒脂肪浸入100 ml NS中10 min, 同法注射于裸鼠背部皮下。

取裸鼠8只, 以2%戊巴比妥鈉50 mg/kg腹腔注射麻醉,用注射器將A組移植物注入每只裸鼠背部皮下A、B區(qū)域, B組移植物注入每只裸鼠背部皮下C、D區(qū)域,如圖1所示。術(shù)后裸鼠均單籠飼養(yǎng)。

圖1 A、B區(qū)為經(jīng)地塞米松處理的實(shí)驗(yàn)組注射區(qū), C、D區(qū)為對(duì)照組注射區(qū)

1.3.2 脂肪移植術(shù)后觀察 術(shù)后3個(gè)月對(duì)游離移植脂肪組織進(jìn)行觀察, 指標(biāo)有:①3個(gè)月后移植脂肪組織濕重:術(shù)后3個(gè)月沿移植物被膜外分離, 完整取出移植物, 對(duì)其進(jìn)行濕重測(cè)定, 計(jì)算存活率。②纖維化及壞死程度的測(cè)定:將取出的移植物進(jìn)行HE染色。

隨機(jī)選取10個(gè)100倍視野, 計(jì)數(shù)10個(gè)視野的囊腔的平均數(shù)目, 將各組移植物測(cè)量得到囊腔數(shù)目進(jìn)行比較。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0軟件統(tǒng)計(jì)分析, 數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。脂肪濕重、成活率及囊腔數(shù)目比較采用T-TEST檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 脂肪移植物濕重及存活率測(cè)定 脂肪移植后3個(gè)月,完整取出移植物, 如圖2A所示, 稱重(如圖2B所示)。實(shí)驗(yàn)組脂肪平均濕重為(0.053±0.006)g, 對(duì)照組脂肪平均濕重為(0.035±0.005)g, 實(shí)驗(yàn)組平均濕重明顯高于對(duì)照組, 對(duì)照組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(如圖2C所示)。與最初脂肪濕重比較, 實(shí)驗(yàn)組脂肪的成活率為(19.77±2.22)%, 對(duì)照組脂肪為(12.80±1.73)%, 可見實(shí)驗(yàn)組脂肪的成活率要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對(duì)照組, 對(duì)照組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(如圖2D所示)?？梢? mg/100 ml地塞米松可提高移植脂肪的成活率。脂肪濕重及存活率具體數(shù)據(jù)見表1。

2.2 脂肪移植物纖維化及壞死程度的測(cè)定 如圖3所示, ×100倍視野下實(shí)驗(yàn)組脂肪移植物中脂肪囊腔小而排列緊密,而對(duì)照組中囊腔較大, 排列疏松。實(shí)驗(yàn)組平均脂肪囊腔數(shù)為(209.68±16.74), 對(duì)照組為(11.72±1.11), 實(shí)驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(如圖3C所示)。5 mg/100 ml地塞米松可降低移植脂肪的纖維化及其壞死程度, 提高脂肪細(xì)胞增殖能力(100倍光鏡下脂肪囊腔數(shù))。

表1 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組脂肪濕重及成活率

圖2 (A)剝離裸鼠背部皮膚后暴露脂肪移植物；(B)剝離取出的脂肪移植物；(C)脂肪濕重；(D)脂肪成活率(左為實(shí)驗(yàn)組, 右為對(duì)照組), Exp, 實(shí)驗(yàn)組, Ctrl, 對(duì)照組；** P<0.01

圖3 (A)光鏡下實(shí)驗(yàn)組脂肪囊腔數(shù)(×100)；(B)光鏡下對(duì)照組脂肪囊腔數(shù)(×100)；(C)兩組脂肪囊腔數(shù)比較(左為實(shí)驗(yàn)組, 右為對(duì)照組), Exp, 實(shí)驗(yàn)組, Ctrl, 對(duì)照組

3 討論

自體脂肪移植, 是將患者自身脂肪移植填充到軟組織缺損部位, 從而使該部位達(dá)到豐滿塑形的效果。自1889年, Vander Meulen將大網(wǎng)膜和脂肪游離移植到肝臟與膈肌之間,首次臨床應(yīng)用人類自體脂肪組織移植技術(shù), 至1986年 IIIouz提出了脂肪顆粒移植的理論, 自體脂肪移植的發(fā)展備受矚目。但在實(shí)驗(yàn)和臨床應(yīng)用中, 顆粒脂肪注射移植的吸收仍然較多［2,3］,極大限制了此項(xiàng)技術(shù)在臨床中的廣泛應(yīng)用。國(guó)內(nèi)外眾多學(xué)者在提高其存活率方面做了大量的實(shí)驗(yàn)研究, 認(rèn)為影響自體脂肪顆粒成活率的因素包括取脂部位、體積大小及純化方法、受區(qū)因素、注射方法及細(xì)胞因子的作用等。目前, 促進(jìn)移植顆粒脂肪組織成活的研究主要有兩個(gè)方面：向移植組織內(nèi)補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)物質(zhì), 如MCDBI53細(xì)胞培養(yǎng)基［4］；用成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子FGF、胰島素樣生長(zhǎng)因子IGF, 促進(jìn)移植組織內(nèi)的血管增生和脂肪細(xì)胞分化等［5］。大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)移植脂肪吸收、壞死的原因是脂肪細(xì)胞缺血造成［6］。移植體周邊區(qū)脂肪組織由于血運(yùn)恢復(fù)較快, 成活較好, 而中央?yún)^(qū)因不能及時(shí)得到充足血供, 脂肪細(xì)胞壞死較多, 故提高自體脂肪細(xì)胞對(duì)缺血缺氧的耐受性是其成活的關(guān)鍵。

地塞米松具有抗炎、抑制免疫、穩(wěn)定巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞細(xì)胞膜, 從而減少其相應(yīng)細(xì)胞因子生成等多方面生理功能。此外, 有文獻(xiàn)報(bào)道地塞米松還能阻止炎癥應(yīng)答反應(yīng)并抑制血小板聚集［7］, 對(duì)細(xì)胞凋亡可表現(xiàn)為抑制作用, 還可以有效地防止中性粒細(xì)胞的活化, 減少中性粒細(xì)胞釋放腫瘤壞死因子［8］。因此地塞米松能夠有效提高脂肪細(xì)胞離體及注射后血運(yùn)尚未建立時(shí)對(duì)缺血缺氧的耐受性, 從而提高了顆粒脂肪注射移植的成活率。本研究中裸鼠動(dòng)物模型也證實(shí)了, 5 mg/100 ml地塞米松確實(shí)能夠提高顆粒脂肪注射移植的成活率并能有效減少注射移植脂肪的纖維化和壞死。

總之, 隨著各種理論研究的不斷深入, 分子生物學(xué)、生物工程等學(xué)科突飛猛進(jìn)的發(fā)展, 自體脂肪移植的成活率將不斷提高, 脂肪顆粒移植必將有更加廣闊的應(yīng)用前景。

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Influence of dexamethasone on the survival rate of human fat particle in nude mice transplantation

HUANG Wei, HUANG Jing, WANG Guang-ning, et al.Department of Plastic and Reconstructive Surgery, Zaozhuang Municipal Hospital, Zaozhuang 277100, China

Objective To explore the influence of dexamethasone on the survival rate, fat fibrosis and necrosis degree of fat particle autologous.Methods Fat particle after washed from human liposuction were randomly divided into two groups: group A and group B.Dexamethasone were added as experimental group(group A), and the same volume of saline added as control group(group B).Two Groups of fat particle were respectively transplanted on the back of nude mice.Three months later, took out the fat in subcutaneous tissue to measure the weight and calculation survival rate and HE staining for the determination of fat fibrosis and necrosis degree.Results The fat particle auto-transplantation survival rate (19.77±2.22)% in experimental group was higher than that in control group (12.80±1.73)% the differences between the two groups were significant(P<0.01).After HE staining, the number of vesicles(209.68±16.74)in experimental group was higher than that in control group(11.72±1.11), the differences between the two groups were significant(P<0.01).Conclusion Dexamethasone can raise survival rate of fat particle autologous, and decrease fat fibrosis and necrosis degree.

Dexamethasone; Fat particle autologous; Survival rate

277102 山東棗莊市立院醫(yī)療美容科