范正達 邢瑤

·實驗研究·

西洋參廢渣中總多糖的再提取

范正達 邢瑤

目的 西洋參廢渣中總多糖的提取及含量測定。方法 用70℃、80℃、90℃熱水分別浸泡提取西洋參廢渣, 并利用苯酚-濃硫酸法比色測定不同提取條件下西洋參總多糖得率。結(jié)果 西洋參廢渣經(jīng)90℃、3 h提取后總多糖含量最高, 占西洋參總多糖的80%。結(jié)論 西洋參廢渣中總多糖的再提取技術對改進西洋參制劑提取工藝具有指導作用。

西洋參廢渣；總多糖；再提取

西洋參(Panax quinquefolium L)又名西洋人參、洋參、花旗參, 為五加科植物。西洋參主產(chǎn)于美國、加拿大。西洋參味苦, 性涼, 入心、肺、腎經(jīng), 功能以補益為主, 可滋陰降火、益氣生津；西洋參中的主要藥理成分是西洋參皂苷、西洋參多糖等, 現(xiàn)代研究表明, 西洋參多糖的免疫增強功能強于西洋參皂苷［1］, 還具有抗輻射、抗衰老、增強特異性和非特異性免疫調(diào)節(jié)功能、升高白細胞數(shù), 其對肝炎、腫瘤患者的免疫功能低下［2］有很好的治療保健作用。護肝寶口服液為常州三院醫(yī)院制劑(蘇藥制字Z04001020), 具有增強機體免疫功能, 提高肝臟解毒能力等作用, 臨床使用多年, 療效確切。該制劑組方主藥為西洋參, 在生產(chǎn)中西洋參采用70%乙醇滲漉的提取方法。作者發(fā)現(xiàn)西洋參廢渣中仍殘存了不少的西洋參多糖, 滲漉后的西洋參殘渣不再使用。無形中浪費了大量的資源, 因此可采取措施充分利用這一資源。本課題利用西洋參多糖易溶于熱水這一特性,采用熱水浸泡提取多糖溶液并直接用于投料, 綜合利用資源, 該方法簡單、經(jīng)濟實用, 對制訂人參、西洋參等名貴藥材工業(yè)化提取工藝具有指導意義?，F(xiàn)報告如下。

1 材料

1.1 材料 西洋參廢渣(西洋參飲片經(jīng)70%乙醇滲漉) (西洋參飲片由常州市泰和中藥飲片有限公司提供, 批號：120301)。

1.2 試劑 葡萄糖(常州醫(yī)藥公司提供, 批號：110911),濃硫酸、苯酚、鹽酸均為分析純。

1.3 儀器 UV1600紫外分光光度儀(北京普析通用儀器有限公司), 分析天平, 電子恒溫不銹鋼水浴鍋。

2 方法與結(jié)果

西洋參廢渣用熱水提取, 經(jīng)多級處理除去脂類、單糖、雙糖、低聚糖、氨基酸、蛋白質(zhì)等雜質(zhì), 制得西洋參總多糖,總多糖溶解與苯酚-硫酸試劑顯色, 在490 nm吸收波長下用精制葡萄糖測得西洋參廢渣中總多糖的含量［3］。

2.1 西洋參總多糖的提取

2.1.1 西洋參廢渣中總多糖的提取 基于于容敏等［4］對于西洋參多糖組分提取條件的優(yōu)化考察, 設計提取方法如下：取9份西洋參殘渣(過10目, 不過20目), 2 g/份, 分別用50 ml純化水浸泡1 h；9份樣品分成3批, 每批3份,分別加入70℃、80℃、90℃的水浴鍋中；每種溫度條件下又分別恒溫加熱提取1、2、3 h, 期間分別于40、80、120 min時倒出提取液, 并重新在藥渣中加入50 ml純化水1次；每份樣品合并2次提取液, 冷卻, 定容至100 ml；抽濾,除去雜質(zhì), 得上清液。對于每份樣品, 取20 ml上清液,加入95%乙醇14.5 ml調(diào)醇度至40%, 靜置1 h, 抽濾得上清液, 取20 ml 上清液加95%乙醇53 ml調(diào)醇度至80%,靜置12 h, 抽濾得黏稠的漿液, 用乙醇沖洗, 50℃干燥,得到淡棕色的薄膜狀組分1。

2.1.2 西洋參飲片中總多糖的提取 取2份西洋參飲片, 2 g/份, 分別用50 ml純化水浸泡1 h；在80℃水浴鍋中分別浸泡2 h、3 h, 方法如2.1.1項, 得薄膜狀組分2。

2.1.3 西洋參滲漉液中總多糖的提取 取醫(yī)院制劑室70%乙醇滲漉所得濾液20 ml, 加20 ml 95%乙醇調(diào)至80%醇度,靜置12 h, 抽濾得黏稠的漿液, 用乙醇沖洗, 50℃干燥,得到黃棕色的薄膜狀組分3。

2.2 樣品與標準品溶液的配制

2.2.1 西洋參廢渣的總多糖溶液制備 取廢渣提取組分1溶于熱水中, 25 ml 定容；取15 ml加6 mol/L鹽酸10 ml, 于100℃熱水中加熱水解30 min, 冷卻, 再取15 ml水解液25 ml定容稀釋, 得待測液1。

2.2.2 西洋參飲片浸提液和西洋參滲漉液的總多糖溶液制備 取組分2, 3, 分別溶于100℃熱水中, 100 ml 定容；取15 ml加6 mol/L鹽酸10 ml, 于100℃熱水中加熱水解30 min, 冷卻, 得待測液2, 3。

2.2.3 標準品的配制 精密稱定0.050 g干燥恒重的葡萄糖, 用純化水溶解后500 ml定容, 作為標準溶液。

2.3 各制備液中總多糖含量測定

2.3.1 標準曲線的繪制 分別取葡萄糖標準液0、1、2、4、8、16、20 ml, 定容至25 ml；每份樣品各取2 ml, 依次加入6%的苯酚2 ml、濃硫酸5 ml, 立即搖勻, 靜置30 min,后在490 nm波長下測吸光度, 繪制得標準曲線, 得回歸方程：Y=0.0217X-0.0183。

2.3.2 滲漉液中西洋參總多糖的含量測定 取滲漉液和西洋參飲片浸提液各2 ml, 依次加入6%的苯酚2 ml、濃硫酸5 ml, 搖勻, 靜置30 min后, 分別在490 nm波長下測吸光度, 算出供試品中多糖濃度, 求得率。見表1。

表1 西洋參滲漉液提取總多糖的得率(g/g)

2.3.3 廢渣中西洋參總多糖的含量測定 測定方法如上,測定結(jié)果見表2。

表2 不同提取條件下所得西洋參廢渣中總多糖的得率對比(g/g)

2.3.4 80℃水提西洋參飲片中總多糖的含量測定。測定方法同上, 結(jié)果見表3。

表3 西洋參飲片的水提液中多糖得率與廢渣得率的對比(g/g)

3 討論

3.1 實驗結(jié)果表明, 經(jīng)70%的乙醇提取后的西洋參廢渣中殘留著約80%～90%的總多糖, 這表明此工藝未能充分、合理利用西洋參中的有效成分, 這無疑是極大的浪費。本次實驗采用熱水浸提的方法能繼續(xù)回收殘渣中約90%的總多糖。

3.2 根據(jù)理化性質(zhì), 西洋參多糖具有在熱水中長時間煎煮容易水解的特性, 故采用熱水浸泡法提取洋參多糖, 方法簡單、實用。

3.3 由實驗數(shù)據(jù)分析, 西洋參廢渣在90℃、浸提3 h時,廢渣中的總多糖得率最高, 且高于(80℃、3 h)和(90℃、2 h)條件下的得率。制劑生產(chǎn)可根據(jù)實驗結(jié)果進行工藝改進, 即西洋參經(jīng)醇提后用恒溫熱水浸泡, 過濾后的濾液加入生產(chǎn)配料中。

［1］ 錢農(nóng), 楊吉成, 盛偉華, 等.人參多糖及皂苷等5種中藥提取物促誘生人干擾素的研究.蘇州醫(yī)學院學報, 1997, 17(1):31-32.

［2］ 杜維霞, 劉秀敏, 趙乃坤.復方洋參多糖免疫增強劑對荷瘤和輻射小鼠T淋巴細胞亞群的影響.中國實驗臨床免疫學雜志, 1997, 9(4):58-61.

［3］ 陳軍輝, 謝明勇, 聶少平, 等.西洋參多糖的含量測定.食品與生物技術學報, 2005, 24(5):72-76.

213000 常州第三人民醫(yī)院藥事科(范正達)；南京中醫(yī)藥大學2012屆實習生(邢瑤)