邱 靖，萬 勁，湯庚國

(三江學院建筑學院，江蘇 南京 210012)

花葉玉簪組織培養(yǎng)技術(shù)的研究

邱 靖，萬 勁，湯庚國

(三江學院建筑學院，江蘇 南京 210012)

以花葉玉簪‘France’,‘So Sweet’2個品種嫩芽為外植體進行的組織培養(yǎng)技術(shù)研究結(jié)果表明，以培養(yǎng)基MS+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA誘導不定芽萌發(fā)較為適宜；在培養(yǎng)基MS+3.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA上進行不定芽增殖，誘導效果最好,增殖系數(shù)分別達3.5和3.4，且植株生長健壯。最適宜的生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.5 mg/L NAA+1 g/L活性炭。

花葉玉簪；組織培養(yǎng)；外植體

花葉玉簪(HostaundulataBailey)為百合科玉簪屬多年生草本花卉[1]，性強健，具有較強的耐寒喜蔭特性，葉片色澤明亮，黃、白、綠三色相間，葉脈脈絡(luò)明顯，是非常優(yōu)良的園林綠化品種[2]。通?；ㄈ~玉簪以分株繁殖為主，但很難大批量繁殖，且周期較長，因此，利用組織培養(yǎng)快繁手段極有必要。目前國內(nèi)常有關(guān)于玉簪組織培養(yǎng)研究的報道，并篩選出了各種不同的培養(yǎng)基[3-5]。本文在前人研究基礎(chǔ)之上，通過濃度梯度更為密集的培養(yǎng)基及其他種類激素(KT、2,4-D)設(shè)置，為建立更適合花葉玉簪的快速微繁殖體系和進一步相關(guān)的研究提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

取‘France’，‘So Sweet’ 2個花葉玉簪品種春季萌動的嫩芽作為外植體。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗程序 取外植體 → 1%洗衣粉的洗滌劑浸泡5 min去除表面雜質(zhì) → 用流水沖洗45 min → 置于超凈工作臺，用75%酒精表面消毒30 s → 再用0.1%升汞消毒6～8 min →用無菌水沖洗4～5次 → 剝?nèi)ネ獍~片，將嫩芽接入備用培養(yǎng)基 →置至于光照培養(yǎng)箱，14 d后將無污染外植體接種于誘導萌發(fā)培養(yǎng)基上 → 增殖培養(yǎng) → 生根培養(yǎng) → 移栽[6]。

1.2.2 芽誘導培養(yǎng)基篩選 采用 MS為基本培養(yǎng)基，將外植體接種于不同激素配比的培養(yǎng)基1～5上(見表1)，共5個處理，每處理20瓶，每瓶3個芽。20 d后統(tǒng)計結(jié)果。

1.2.3 增殖培養(yǎng)基篩選 將誘導出的芽轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基6～12上誘導增殖(見表1)，共6個處理，每處理20瓶，每瓶接3個芽。20 d后統(tǒng)計不定芽的增殖數(shù)及生長狀況。

1.2.4 生根、移栽 取健壯增殖芽接種到生根培養(yǎng)基13～16上(見表1)。20 d后統(tǒng)計生根數(shù)等生長情況。篩選最適生根培養(yǎng)基。30 d后煉苗移栽，先在室溫條件下鍛煉3 d后打開瓶蓋，6 d后栽植到經(jīng)高壓滅菌的營養(yǎng)土中，保濕。10 d后觀察成活率及生長情況。

表1 培養(yǎng)基配方

培養(yǎng)基除13～16以1/2MS為基本培養(yǎng)基，外加活性炭1 g/L外，其他均以MS為基本培養(yǎng)基，蔗糖30 g/L,瓊脂4 g/L,pH5.8。培養(yǎng)溫度22～26 ℃,光照12～16 h，光照度1 000～2 000 lx。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同激素配比對外植體誘導的影響

選取無污染外植體接種到誘導萌發(fā)培養(yǎng)基上，約8 d后嫩芽開始萌發(fā)，25 d后統(tǒng)計其出芽率(見表2)。由表2可知，不同培養(yǎng)基上芽萌發(fā)有一定差別，隨著6-BA質(zhì)量濃度升高，芽分化率變大，當其達到一定質(zhì)量濃度時分化率又呈下降趨勢，這與胡相偉[7]在法蘭西玉簪組織培養(yǎng)技術(shù)研究中的結(jié)果相同。其中，‘France’在3號培養(yǎng)基上芽萌發(fā)率最高為86.7%，且生長茁壯?！甋o Sweet’在2號培養(yǎng)基上出芽率最高為78.3%,但芽生長勢弱于3號培養(yǎng)基，由此可知，3號培養(yǎng)基最適合花葉玉簪不定芽誘導。

表2 不同激素配比對外植體誘導的影響

2.2 不同激素配比對不定芽增殖的影響

30 d后，將新誘導的芽轉(zhuǎn)接入增殖培養(yǎng)基中，7 d左右基部葉鞘有芽產(chǎn)生，14 d后開始展葉，由表3看出2個品種在12號培養(yǎng)基的增殖系數(shù)最高分別達3.9，3.7，但植株生長勢較弱，11號培養(yǎng)基的增殖系數(shù)也較高，其中‘France’不定芽增殖系數(shù)達3.5，‘So Sweet’不定芽增殖系數(shù)達3.4，且植株均生長茁壯。因此，以11號培養(yǎng)基的增殖效果最好。除6-BA，NAA外，2,4-D、KT也具有刺激植物生長、促進細胞分裂的作用，但目前未見有用在玉簪組織培養(yǎng)中的報道。本實驗在10，7號培養(yǎng)基中分別加入2,4-D、 KT，初步研究其對花葉玉簪不定芽增殖的影響。結(jié)果表明，加入NAA的11號培養(yǎng)基明顯高于加入2,4-D的10號培養(yǎng)基。由此可知，在花葉玉簪的增殖培養(yǎng)中用生長素NAA優(yōu)于用2,4-D。此外，7號培養(yǎng)基與8號相比多添加1 mg/L KT，但增殖系數(shù)并未增加反而降低，因此，KT對不定芽的增殖不但沒有加強反而產(chǎn)生抑制作用。綜上所述，11號是最適合不定芽增殖的培養(yǎng)基。

2.3 不同激素配比對生根的影響

取生長健壯的增殖芽將葉片中上部剪去接種到生根培養(yǎng)基13～16上，7 d后即開始形成根，20 d形成大量根，30 d后即可移栽至經(jīng)過高溫滅菌的珍珠巖中，成活率達100%。由表4可以看出2個品種最適合生根的培養(yǎng)基為14，其生根率均為100%且生根數(shù)量最多，平均每株分別形成6.9和6.5條，且根粗壯、色白，適合移栽。在16號培養(yǎng)基上雖然生根率也相對較高，但部分根生長粗短，不適合移栽。

表3 不同激素配比對不定芽增殖的影響

表4 不同激素配比對生根的影響

2.4 組織培養(yǎng)苗馴化移栽

將無菌苗瓶移至大棚進行馴化煉苗，視溫度、光強不同將煉苗時間控制在3～7 d。高溫、高光強煉苗時間縮短，低溫、低光強則煉苗時間延長。移栽在春季陰天或晴天的上午7∶00～9∶00 以及下午的 3∶00～5∶00進行。移栽前洗凈無菌苗上的培養(yǎng)基，將其移栽于80%泥碳土+20%珍珠巖的基質(zhì)中，移栽后澆透水，覆蓋薄膜保溫并遮陰80%。7 d后每天通風 7～8 h，并澆水，待新葉長出后去掉薄膜，但仍需遮陰。30 d后成活率95%以上。60 d后葉片明顯變寬，幼苗地上及地下部分均生長健壯，移栽效果好。

3 討論

玉簪花色淡雅，葉色明亮，深受人們喜愛?；ㄈ~玉簪獨特葉色，近年來成為園林上廣泛應用的新寵。本文以春季萌動的嫩芽為外植體，誘導不定芽萌發(fā)，建立了花葉玉簪離體快繁體系。研究發(fā)現(xiàn)，花葉玉簪嫩芽在培養(yǎng)基MS+ 2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA上最適合不定芽誘導。在MS+3.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA培養(yǎng)基上能快速增殖形成較健壯的不定芽，郝硯英等[5]報道玉簪最佳的生根培養(yǎng)基為1/2 MS+0.1 mg/L NAA+0.2%活性炭。本研究發(fā)現(xiàn)1/2 MS+ 0.5 mg/L NAA+1 g/L活性炭的培養(yǎng)基是花葉玉簪最佳的生根培養(yǎng)基，這可能是由于不同基因型間存在差異導致。目前，以花葉玉簪的子房等器官為外植體，試圖建立離體再生體系的研究，尚未見報道，后續(xù)將進一步進行這方面的研究工作。

[1] 王蓮英，秦魁杰，吳迪新.花卉學[M].北京：中國林業(yè)出版社，1988：427-28.

[2] 張金政，施愛萍，孫國鋒，等.玉簪屬植物研究發(fā)展[J].園藝學報，2004，31(4)：550-552.

[3] 張仁貴，張思露.花葉玉簪的組培技術(shù)的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2014，42(5)：1302-1303.

[4] 莊靜冰，方福鐘.花葉玉簪的組培快繁技術(shù)研究[J].福建熱作科技，2013,38(3)：18-21.

[5] 郝硯英，趙哀梅，王 勇，等.花葉玉簪的組織培養(yǎng)與快速繁殖技術(shù)研究[J].天津農(nóng)業(yè)科學，2006,12(2)：18-19.

[6] 李 江，馬正炳，孫仲序，等.植物組織培養(yǎng)的簡化[J].植物生理學通訊, 2003,39(4):356-358.

[7] 胡相偉.法蘭西玉簪組培技術(shù)[J].甘肅科技，2013,29(4)：146-148.

StudiesonthetissuecultureofHostaundulata

QIU Jing，WAN Jin，TANG Geng-guo

(School of Architecture of Sanjiang University， Nanjing 210012，China )

After approaching on the tissue culture of tender bud explant fromHostaundulata‘France' and So Sweet', we concluded that the optimum medium for adventitious bud induction was regarded as MS+2.0 mg/L 6-BA+1 mg/L NAA, and the optimum medium for adventitious buds propagation was alleged as MS+3.0 mg/L 6-BA +1 mg/L NAA, with multiplication coefficients of 3.5 and 3.4.And also, the optimum medium for rooting was considered as 1/2MS+0.5 mg/L+1 g/L activated carbon.

Hostaundulata; Tissue culture; Explant

1001-7380(2014)04-0043-03

2014-04-20；

2014-05-20

江蘇省農(nóng)業(yè)三新工程項目“花葉玉簪規(guī)?；M培快繁技術(shù)示范推廣”(SXGC[2013]375)

邱 靖(1982-)，女，江蘇盱眙人，講師，碩士，研究方向：園林植物與觀賞園藝。

Q939.71+8.23；Q813.7

B

10.3969/j.issn.1001-7380.2014.04.011